鲤白细胞介素-8基因组DNA的克隆及序列分析

在白细胞介素-8(IL-8)cDNA全长序列的两侧——非翻译区设计一对引物,以提取的鲤脾脏基因组DNA为模板进行PCR扩增,并将扩增产物回收、纯化,连接到pMD18-T载体上,再转化到DH5α大肠杆菌感受态细胞中,并对插入片段进行测序,获得了鲤IL-8基因组DNA的全长序列。结果表明:鲤IL-8DNA全长为943 bp,由4个外显子和3个内含子组成,与已知其它物种的排列非常相近,说明在进化过程中其拼接位点非常保守,符合GT-AG规则;对系统发生的分析证明,鲤与斑马鱼的亲缘关系较近,与哺乳动物亲缘关系较远;将鲤的IL-8基因组结构与人、猪、狗、虹鳟的基因组结构进行比较,发现IL-8基因在由鱼类到哺乳动物的分子进化过程中较为保守,外显子基本保持稳定,而内含子的变化较大。     

杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系的建立及应用

为研究杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的形成机制,探寻其产业化生产的有效途径,通过对GISH的多项试验参数进行优化,建立杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系,并对天然四倍体泥鳅(4n=100)与大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus(2n=48)正、反杂交后代进行GISH分析。结果表明:杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系中,探针DNA在温度为105℃、持续时间为2 min时,片段化后探针DNA片段长度为500~1000 bp;封阻DNA在温度为110℃、持续时间为10 min时,片段长度为100~500bp;标记后的探针DNA与片段化后的封阻DNA混合比(P/B)在1∶25和1∶50时均可以得到较好的杂交信号;以大鳞副泥鳅全基因组DNA为探针DNA、天然四倍体泥鳅全基因组DNA为封阻DNA,与二者正、反交后代进行基因组原位杂交试验,结果显示,来源于亲本大鳞副泥鳅24条染色体在着丝点处均有杂交信号,无杂交信号染色体50条,来源于亲本泥鳅。该研究结果不仅为杂交三倍体泥鳅后代的鉴定提供了最直观的证据,也为中国天然四倍体泥鳅是含有四套染色体组的遗传四倍体并能产生2n的配子提供了分子细胞遗传学基础数据,对泥鳅三倍体育种研究具有一定的指导意义。     

杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系的建立及应用

为研究杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的形成机制,探寻其产业化生产的有效途径,通过对GISH的多项试验参数进行优化,建立杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系,并对天然四倍体泥鳅(4n=100)与大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus(2n=48)正、反杂交后代进行GISH分析。结果表明:杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系中,探针DNA在温度为105℃、持续时间为2 min时,片段化后探针DNA片段长度为500¹000 bp;封阻DNA在温度为110℃、持续时间为10 min时,片段长度为1001000 bp;封阻DNA在温度为110℃、持续时间为10 min时,片段长度为100⁵00bp;标记后的探针DNA与片段化后的封阻DNA混合比(P/B)在1∶25和1∶50时均可以得到较好的杂交信号;以大鳞副泥鳅全基因组DNA为探针DNA、天然四倍体泥鳅全基因组DNA为封阻DNA,与二者正、反交后代进行基因组原位杂交试验,结果显示,来源于亲本大鳞副泥鳅24条染色体在着丝点处均有杂交信号,无杂交信号染色体50条,来源于亲本泥鳅。该研究结果不仅为杂交三倍体泥鳅后代的鉴定提供了最直观的证据,也为中国天然四倍体泥鳅是含有四套染色体组的遗传四倍体并能产生2n的配子提供了分子细胞遗传学基础数据,对泥鳅三倍体育种研究具有一定的指导意义。     

常染色体隐性骨质硬化症易感基因定位

目的本研究对一个常染色体隐性遗传的骨质硬化症家系进行了研究,以确定本家系骨质硬化症的致病基因。方法采用双能X线吸收法(DXA)测定骨密度(BMD)。提取11个家系成员及180名正常对照者外周血DNA,用基因测序排除已知与骨质硬化症相关的11个基因的突变后,做全基因组扫描、精细基因定位及单倍型分析确定致病基因候选区。采用TRAP染色试剂盒行骨活检标本破骨细胞染色。结果该常染色体隐性骨质硬化症家系无已知与骨质硬化症相关的基因突变。全基因组扫描、精细基因定位及单倍型分析结果显示,染色体19q13.2～q13.3的D19S197～D19S545之间的8.36cm范围为致病基因候选区,连锁分析最大LOD值Zmax=2.907(θ=0时)。骨活检标本的TRAP染色结果显示,与性别和年龄匹配的正常人相比,骨质硬化患者髂嵴破骨细胞数量减少。结论该常染色体隐性骨质硬化症家系患者破骨细胞减少,19号染色体q13.2～q13.3有骨质硬化症易感基因存在,为尚未报道的常染色体隐性骨质硬化症特色类型。     

杂交三倍体泥鳅×二倍体泥鳅杂交后代胚胎染色体组构成的研究

为探讨杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus配子染色体组的构成,以杂交三倍体泥鳅(3n)与二倍体泥鳅(2n)为研究对象,配制2n♀×3n♂和3n♀×2n♂杂交组合,对杂交后代的胚胎染色体进行银染(Ag-NORs)、CMA_3/DA/DAPI三重荧光染色和染色体荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)等方面的研究。结果表明:两个杂交组合的杂交后代胚胎染色体有丝分裂中期分裂相中最高银染点数均为3个,位于中部着丝粒染色体(M1)的端部区域;在2n♀×3n♂和3n♀×2n♂杂交后代胚胎染色体有丝分裂中CMA3阳性部位有3个,位于中部着丝粒染色体(M1)的端部区域;将核糖体5.8S+28S r DNA定位在杂交后代胚胎染色体上,两种杂交组合均可检测到3簇杂交信号,位于中部着丝粒染色体(M1)的端部区域。研究表明,杂交三倍体泥鳅无论雌雄与二倍体泥鳅杂交所产生的后代染色体组构成均为3套染色体组,进而可推测,杂交三倍体泥鳅无论雌雄均可产生(1.5²)n的配子,该结果为三倍体泥鳅配子染色体组成提供了细胞遗传学证据。     

中职电工技能课“共同研讨法”教学实践与思考

核小体定位是复制起始调控的重要因素,但是核小体定位是如何调控真核生物的复制起始,目前还不是很清楚。研究酵母Ⅲ号染色体上的不同活性复制起始序列形成核小体能力对探究真核生物DNA复制起始机制有着重要的生物学意义。酿酒酵母Ⅲ号染色体上的10个复制起始序列分为高活性和低活性两组复制起始序列,利用核小体体外组装技术,将回收纯化的高活性和低活性复制起始序列分别与组蛋白八聚体在体外进行梯度盐透析组装形成核小体,并进行Biotin标记检测,然后用Image J软件分析不同复制起始序列组装形成核小体能力的强弱。结果表明,用Image J软件对核小体组装能力强弱进行分析:ARS304>ARS303>ARS313>ARS302>ARS306>ARS314,ARS305,ARS307,ARS309,ARS315。低活性复制起始序列较高活性复制起始序列更易形成核小体;复制起始位点偏好出现于核小体缺乏区。     

分子光谱法研究槲皮苷与DNA的相互作用

以溴化乙锭(EB)做为DNA的荧光探针,研究了黄酮类化合物——槲皮苷与DNA的相互作用。实验结果表明,离子强度对槲皮苷与DNA的结合常数有一定的影响。在15℃、25℃、35℃和45℃时的Stern-Volmer曲线说明了槲皮苷对DNA荧光猝灭的过程。通过计算得到了在不同温度时二者的结合常数,以及相对应的热力学常数ΔH、ΔG和ΔS。     

鲤耐寒性状分子标记在遗传连锁图上的定位

与鲤Cyprinus(Cyprinus)carpioLinnaeus的抗寒性状相关的RAPD标记有6个,其中2个与荷包红鲤抗寒品系的抗寒性状相关,4个与抗寒大头鲤CyprinuspellegriniTchang的抗寒性状相关,且5N1451c标记被定位在第5号连锁组中。初步研究结果表明,鲤的抗寒性状是一种数量性状。     

多重连接依赖的探针扩增方法对原发性智力低下患儿进行亚端粒重排分析

目的 了解原发性智力低下伴单发或多发畸形患儿中染色体亚端粒重排的发生率,寻找智力低下的致病原因.方法 180例符合本组入选标准的原发性智力低下患儿,抽取外周血,乙二胺四乙酸钠(EDTA)抗凝.提取基因组DNA并进行纯化.用多重连接依赖的探针扩增(MLPA)方法的试剂盒P036B/C和P070进行检测,对使用2个试剂盒均存在相同异常的样本,再选用针对异常区域特异性的试剂盒P096、P064和P023鉴定或判断发生异常片段的大小.MLPA主要实验步骤包括:DNA变性、分子杂交、连接反应和特异PCR扩增,扩增的PCR产物用ABI 3100测序仪进行基因型分析,最终所得数据用GeneMarker软件进行分析.结果 在180例原发性智力低下患儿中发现13例存在染色体亚端粒重排(7%):其中12例为致病性,均为新生突变;1例2号染色体长臂末端缺失(2qdel)来源于表型正常的父亲.结论 亚端粒重排是原发性智力低下伴单发或多发畸形的致病原因.     

利用Bayesian方法进行牙鲆体质量和主要形态性状的QTL定位及互作分析

为了定位牙鲆Paralichthys olivaceus体质量和形态性状的QTL,利用雌核发育方法获得双单倍体牙鲆群体的157个个体,同时构建了包含481个SSR标记和141个EST-SSR标记的遗传连锁图谱,并采用Bayesian模型选择方法对研究性状进行主效应QTL定位和上位性互作分析。结果表明:共检测到38个主效应QTL和50对上位互作效应,其中,大部分主效应QTL位于5、6、9、22号染色体,上位互作效应所解释的表型方差为2.3%²3.1%;8个主效应QTL和7对互作QTL表现出多效性,均分别对两个以上的性状起作用。本研究结果将有助于提高牙鲆育种中对有益经济性状的选择效率。     

浅析高速公路工程招投标中的最低评标价法

结合目前高速公路施工项目招投标活动的实际情况,阐述了最低评标价法的概念,归纳了其优点及存在问题,对完善最低评标价法提出几点策略,以期促进招标投标市场更加规范有序。     

Place-Making in Megaprojects in Melbourne

This article analyses state-led place-making practices in Melbourne. The two levels of government that influence planning in Melbourne make much of the city as ‘culturally vibrant’ and ‘creative’, and have incorporated creative city-inspired place-making principles into many layers of the planning system. An examination of the development of two mixed-use megaprojects in central Melbourne reveals however that ideals of culturally engaging public places, and indeed of creative landscapes for middle-class consumption, wither in the face of more basic imperatives for economic development. In these case studies the ‘creative city’, no matter how the idea is interpreted, has little traction either as a set of inclusive place-making principles or as a gentrification strategy. The article concludes that the creative city-inspired place-making objectives in the planning system at both state and local levels are ambiguous in their overall intents and completely unsupported by statutory controls. Such place-making objectives as are realised are the compromised results of the interplay of uncoordinated decisions, delivered at the pleasure of the developer.     

Pathogens in septage in Vietnam

Septage is widely acknowledged as a major source of infectious pathogens while disposal of septage, and the operation and maintenance of septic tanks, is not regulated in many developing countries. Twenty untreated septage and septage sludge samples were taken from Can Tho City, Vietnam to examine their pathogen content, and indicator micro-organisms. Escherichia coli and Enterococcus spp. were detected in all samples, regardless of sludge storage time. Phages were detected in 80% of samples. Salmonella spp. were detected in 70% of the untreated septage and 60% of septage sludge samples. Concentrations of phages and bacteria tested in septage sludge after many years of tank storage were much higher than the expected levels. Helminth ova were present in 95% of untreated septage samples with an average of 450 ova l^− 1, and were detected in all septage sludge samples with an average of 16,000 ova l^− 1. Twelve varieties of helminth ova were identified. More helminth ova varieties in higher concentrations were found in septage than those reported from stool samples. The varieties' frequency ranged from 10% to 50% and Ascaris lumbricoides predominated. Results show that pathogens and indicator micro-organisms, especially helminth ova, accumulate in sludge. Thus helminth ova should be considered when septage sludge is treated and used for agriculture. Proper health protection measures must be applied for people handling septage.     

在市场中实践在实践中学习在学习中进步--工程公司市场化进程的回顾与展望

近两年来，工程公司在提高市场竞争意识、推动市场化进程中做了大量工作，其中坚持走出去的方针是我们自我加压、推行加快市场化步伐的一个重要战略步骤。     

新时期广东城市化的新特点

新时期广东城市化出现以下特点:知识源导向、城市由单体向群体化发展、产业集群推动、政府主导自上而下的集约化发展、城镇化向城市化转变、由重“数量”发展向重“质量”发展的转变。     

新形势下高校强化基建财务管理的探讨

在市场条件下高校基建财务人员在加强日常财务管理的同时,必须树立起高度的工作责任心,抓好事前监督、事中监督、事后监督三个环节,全面理解、贯彻执行《高等学校财务制度》,管好用好各项基本建设资金,提高基建财务管理水平,更好地完成高校各项基建任务,以有限的投资,最快的建设速度,获得最大的投资效益。     

2005年北京办公物业市场七大趋势

趋势一:CBD区域写字楼集中放量从各区域规划方案上看,CBD区域多数项目在03～04年处于项目的报批手续及拆阶段,预计2005年正式推向市场,因此2005年CBD区域将成为北京市场供应集中的域,区域即将供应的项目有北京财富中心(二期)、金地国际花园、万达广场、SOHO尚都、万通中心、世纪财富中心、怡禾国际中心、光华国际等。除去未知项目,2005CBD写字楼办公面积的供应量为60万平方米左右。中关村区域经过一段时间的集中供后开始逐步放缓,2005年供应的体量相对较大的项目有中关村金融中心、新中关。金街区域可能开盘的项目只有2个:英蓝国际中…     

浅谈我国工程项目建设成本控制存在的问题

结合目前我国施工企业工程项目成本管理现状,对工程项目成本管理过程中存在的问题进行了较详细的分析,并提出了一些解决问题的办法,以做好项目成本控制工作,进而增强企业经济实力。     

Trends in ozone concentrations in Jerusalem

Ozone concentrations have been measured in Jerusalem since 1977 by a chemiluminescent ozone meter. During the last five years ozone levels have increased considerably. In order to test whether this increase reflected the growth in the number of motor vehicles or was caused by atmospheric conditions, the summer data of the last five years were analyzed. Ozone levels were characterized by the daily one-hour maxima; the atmospheric factors considered were temperature, insolation and stability. A multiple regression equation was computed and a correlation coefficient r = 0.77 obtained. The yearly mean reduced ozone levels showed a definite trend, which reflected the corresponding trend in the number of motor vehicles.