紫蛇尾皂苷的初步纯化和生物学活性研究

对紫蛇尾Ophiopholis mirabilis皂苷粗提物进行初步纯化,并对所得产物的抑菌活性、抑制α-葡萄糖苷酶活性和细胞毒活性进行了研究。采用AB-8大孔吸附树脂初步纯化紫蛇尾皂苷粗提物,采用香草醛—高氯酸法测定总皂苷含量,采用滤纸片法测定抑菌活性,采用比色法和MTT法分别测定α-葡萄糖苷酶和MCF-7人乳腺癌细胞的抑制率。结果表明:纯化后的紫蛇尾皂苷纯度增加至48.57%;皂苷粗提物及纯化物的抑菌活性表现一致,均对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis具有明显的抑制作用,且纯化物的抑菌效果略强;皂苷粗提物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果明显,大孔树脂95%乙醇洗脱所得纯化物的抑制率达到94.62%;皂苷粗提物及纯化物对MCF-7人乳腺癌细胞均表现出了很强的细胞毒活性,其中大孔树脂60%、75%、95%乙醇洗脱所得纯化物的浓度为300μg/m L时,细胞抑制率均高达97%以上。研究表明,紫蛇尾皂苷粗提物及纯化物均表现出了很强的选择性抑菌活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性和对MCF-7人乳腺癌细胞的细胞毒活性,且纯化物的活性增强。     

好食脉孢菌纤溶酶的分离纯化

以豆渣和麸皮为固体发酵主要原料培养好食脉孢霉,用生理盐水浸提取发酵后培养基、硫酸铵40%,80%两次盐析后,用Octyl-Sepharose FF疏水色谱分离出两个组分,均为纤溶酶。再顺次采用Sephadex G-25凝胶色谱、SP-Sepharose HP强阳离子色谱和Superdex 75凝胶色谱对好食脉孢霉发酵产生的纤溶酶组分Ⅰ进一步分离纯化,获得纯度较高的纤溶酶,其比活力为97.52 U/mg,其相对于发酵液的活力回收率为0.74%,总纯化倍数为87.07。经SDS-PAGE、酶谱法活性电泳和等电聚焦电泳,切割活性条带进行Q-TOF质谱测序,获得纤溶酶的部分氨基酸序列,分别为:N-P-S-G-S-L-S-N-G-A-G-L-E-P-K;P-V-Q-P-G-S-G-Q-S-D-G-T-A-D-V-E-K;S-S-V-M-D-S-E-A-N-M-A-W-N-D-E-R。通过NCBI-BLAST数据库与已报道的纤溶酶氨基酸序列比对,发现此脉孢霉纤溶酶为新型蛋白质。     

天花粉蛋白抗肿瘤机制研究进展

天花粉蛋白是从中药天花粉中提取纯化的一种活性蛋白,具有抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡;抑制肿瘤细胞蛋白质的合成;增强NK细胞的杀伤活性以及免疫调节等作用,有着良好的研究前景及实用价值。     

皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究

为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX2蛋白,并进行质谱鉴定及体外抗氧化功能检测。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,经表达条件的优化,在pH为7的培养基中用0.5%甲醇诱导表达72 h,分泌表达上清液中得到相对分子质量约为25 000的稳定表达产物,纯化后的蛋白经质谱鉴定为目的蛋白;体外活性测定发现,该蛋白清除羟自由基(·OH)能力强于维生素C,并对H_2O_2引起的细胞损伤具有一定的保护作用。研究表明,皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化物酶HdhTPX2在毕赤酵母表达系统中得到高效表达,重组表达产物具有抗氧化活性功能。     

皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究

为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX2蛋白,并进行质谱鉴定及体外抗氧化功能检测。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,经表达条件的优化,在pH为7的培养基中用0.5%甲醇诱导表达72 h,分泌表达上清液中得到相对分子质量约为25 000的稳定表达产物,纯化后的蛋白经质谱鉴定为目的蛋白;体外活性测定发现,该蛋白清除羟自由基(·OH)能力强于维生素C,并对H_2O_2引起的细胞损伤具有一定的保护作用。研究表明,皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化物酶HdhTPX2在毕赤酵母表达系统中得到高效表达,重组表达产物具有抗氧化活性功能。     

穿透支原体P35蛋白细胞粘附活性研究

目的研究穿透支原体(Mpe)P35蛋白的细胞粘附活性。方法 IPTG诱导pQE31/p35原核表达载体在E.coli中表达,用Ni-NTA Spin亲和纯化,Western blot鉴定表达产物。通过间接免疫荧光试验(IFA)、竞争抑制试验研究rP35对HeLa细胞的粘附活性。结果 pQE31/p35在E.coli中表达出分子量约35 kDa的蛋白质,Western blot鉴定其为特异性rP35蛋白。IFA发现rP35对HeLa细胞无明显的粘附活性;竞争抑制试验表明rP35不能抑制Mpe粘附HeLa细胞。结论 P35可能不是Mpe的主要粘附分子。     

海刺猬体腔液凝集素的纯化、性质及其色氨酸的化学修饰

通过DEAE-纤维素52离子交换层析、Sephadex G-200凝胶层析,从海刺猬体腔液中分离纯化海刺猬Glyptocidaris crenularis凝集素(简称为GCL),并对其部分性质和色氨酸的化学修饰进行了研究。结果表明:在还原与非还原SDS-PAGE上,GCL都显示单一蛋白质条带,其相对分子量为94 462;GCL对人O型、兔、鸡、狗红细胞均具有血凝活性,对兔和狗红细胞的血凝活性最强,但对人A、B、AB型及鲫红细胞无血凝活性;GCL血凝活性在温度为4～33℃时最高,经36℃热处理10 min后,GCL对兔红细胞的血凝活性保留25%,经48℃加热10 min后,其血凝活性完全丧失;GCL血凝活性在pH为7.5～8.5时最高;Ca2+对GCL血凝活性无抑制作用,EDTA和Mg2+对其血凝活性有抑制作用;GCL血凝活性不被所测试的α-乳糖、D-果糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和γ-球蛋白所抑制,但被蔗糖和麦芽糖所抑制,最小抑制浓度分别为40 mmol/L和20 mmol/L;用N-溴代丁二酰亚胺(NBS)对GCL分子中的色氨酸(Trp)残基进行化学修饰,有5.1个Trp残基被修饰,修饰后其血凝活性丧失75%,表明Trp残基是GCL血凝活性的重要组成部分。     

用蛋白质指纹技术预测局部晚期胰腺癌伽玛刀治疗疗效的研究报告

目的:使用蛋白质指纹技术(SELDI)预测伽玛刀治疗局部晚期胰腺癌治疗效果的临床应用价值。方法:选择2010年2月-2014年10月本院35例行伽玛刀胰腺癌患者,于治疗前抽血保存于-80℃低温冰箱,伽玛刀治疗后2个月,按WHO实体间质谱技术(SELDE-TOF-MS),通过分析血清特异性蛋白质质谱图,寻找差异蛋白指纹。结果:有效组与无效组中共检测出56个蛋白质峰,其中丰度(M/Z)为3337、9234、11 650的蛋白质组指纹两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中无效组上调的峰M/Z为3337、11 650,下调的峰M/Z为9234。结论:使用SELDI可以预测伽玛刀治疗局部胰腺癌的临床疗效,为临床治疗提供指导。     

扇贝裙边ACE抑制肽的分离鉴定及其降血压活性研究

为研究扇贝裙边ACE抑制肽的结构及其降血压效果,以虾夷扇贝Patinopecten yessoensis裙边酶解液为研究对象,采用凝胶色谱及反相高效液相色谱对ACE抑制肽组分进行分离纯化、ESI MS/MS鉴定和动物试验。结果表明:经Sephadex LH-20分离得到的组分F5和F7具有ACE抑制活性,其半抑制浓度(IC_(50))分别为1.4、1.7 mg/m L;通过两次反相高效液相色谱分离得到F5-3-3,经质谱解析筛选出的肽段Val-Trp(VW)具有ACE抑制活性,其IC_(50)为86.9μmol/L;用扇贝酶解液经超滤获得的相对分子量小于3000的组分灌胃雄性原发性高血压大鼠(SHR)28 d,灌胃第9天时,SHR的心脏收缩压(SBP)达到172 mm Hg,之后心脏收缩压基本保持恒定且极显著低于空白对照组(P<0.01),停止灌胃7 d内,多肽处理组SHR的心脏收缩压与空白对照组相比仍表现出极显著性差异(P<0.01)。研究表明,扇贝裙边酶解产物具有较好的降血压效果,可作为研发降压药物或保健食品的良好原料。     

牡蛎ACE抑制肽对原发性高血压大鼠的降压效果及其性质研究

为研究食源性海洋天然ACE抑制肽的体内降血压效果,以太平洋牡蛎Crassostrea gigas为原料,采用脱盐、二次酶解、超滤等工艺方法,制备相对分子质量3000以下的牡蛎ACE抑制肽,对其抗消化能力、乳化性、乳化稳定性、吸水性、吸油性和溶解性等性质进行研究,并通过雄性原发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)进行灌胃试验(28 d),研究牡蛎ACE抑制肽的降血压作用。结果表明:用二次酶解法制备的牡蛎肽粉中多肽含量为66. 7%,糖分为18. 2%,灰分为6. 31%,且含有44. 28%的必需氨基酸和14. 17%的疏水性氨基酸,17种氨基酸组成良好,表明制备的牡蛎ACE抑制肽纯度较高,牡蛎ACE抑制肽具有良好的消化稳定性,其吸油能力比吸水能力强,不同p H (6～10)和温度(50～90℃)下溶解性较好;动物试验结果表明,第21天时牡蛎ACE抑制肽组SHR心脏收缩压(SBP)降到最低值,为(161. 56±16. 63) mm Hg,之后基本保持恒定且极显著低于空白组(P<0. 01),停止灌胃ACE抑制肽6 d内,ACE抑制肽组SHR的心脏收缩压与空白组相比仍表现出极显著性差异(P<0. 01)。研究表明,牡蛎ACE抑制肽的降压体制在体内能发挥较好作用并能持续性稳定血压,可作为海洋天然活性肽被开发和利用。