用磁珠富集法快速制备银鲫微卫星标记

将磁珠富集法和用γ-32P标记的放射性探针法相结合,快速制备银鲫Carassius auratus gibelio微卫星。用限制性内切酶MboI对银鲫完整基因组DNA酶切,用不同蔗糖浓度梯度离心收集400⁹00 bp大小的片段,连接Brown接头,构建银鲫全基因组文库。用生物素标记的(CA)16寡核苷酸探针进行筛选,磁珠富集含有微卫星的DNA单链序列;对DNA模板进行PCR扩增,连接pMD18-T载体,转入用CaCl2制备的感受态大肠杆菌Escherichia coliDH5α中,得到微卫星序列文库;经用同位素γ-32P标记的探针(CA)16二次筛选,获得235个阳性克隆,对其测序,得224个含微卫星序列,完美型、非完美型、复合型序列分别占总数的52.8%、28.7%、18.5%。除探针中使用的(CA/GT)n重复单元外,还观察到(GA/CT)n、(ACTC)4的重复序列。设计163对引物,选择合成30对引物,经聚丙烯酰胺凝胶筛选,9对可以获得清晰条带,其中3对为单态,6对为多态。     

大蒜素对鲫非特异免疫指标影响的研究

为评价大蒜素对鲫Carassius auratus非特异性免疫功能的影响,在鲫基础饲料中分别添加250、500mg/kg的大蒜素,并对鲫进行42 d的养殖试验,其中试验的第1²8天饲喂含大蒜素的试验饲料,第2928天饲喂含大蒜素的试验饲料,第29⁴2天饲喂不含大蒜素的基础饲料。结果表明:与投喂基础饲料的对照组相比,添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清补体C3活力(P<0.05),而添加500 mg/kg剂量的大蒜素则能显著抑制鲫血清补体C3、C4活力(P<0.05),改投不含大蒜素的基础饲料后,该剂量组C4活性仍显著低于对照组(P<0.05);添加250、500 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清、肝胰脏、肾脏和脾脏中溶菌酶(LZM)活力(P<0.05),改投不含大蒜素的基础饲料的14 d内,250、500 mg/kg剂量组血清LZM活性及500 mg/kg剂量组肾脏和脾脏LZM活性仍有显著升高(P<0.05);添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高肝胰脏和脾脏中一氧化氮(NO)含量(P<0.05),添加500 mg/kg大蒜素能显著提高血清和脾脏中NO含量(P<0.05),但该剂量显著抑制肝胰脏NO含量(P<0.05),250、500 mg/kg剂量组肾脏中NO含量在第42天时均显著高于对照水平(P<0.05)。研究表明,鲫基础饲料中大蒜素的适宜添加剂量为250 mg/kg。     

白金丰产鲫含肉率及肌肉营养成分分析

为评价新品种白金丰产鲫Carassius auratus Var.Pengzenensis♀×Cyprinus acutidorsalis Wan♂的含肉率和肌肉营养成分,选取体质量为(580.33±198.02)g的1龄白金丰产鲫进行分析,测定其含肉率、一般营养成分、氨基酸组成和脂肪酸组成。结果表明:白金丰产鲫含肉率为66.22%,肌肉中水分含量为79.90%,粗蛋白质含量为17.61%,粗脂肪含量为1.71%,灰分含量为1.13%;采用酸水解法共检测出17种氨基酸,其中必需氨基酸占氨基酸总量的39.50%,呈味氨基酸占总氨基酸含量的37.12%;必需氨基酸评价显示,白金丰产鲫的必需氨基酸评分均大于1,必需氨基酸组成符合FAO/WHO模式标准;共检测到23种脂肪酸,其中饱和脂肪酸(SFA)7种,不饱和脂肪酸(UFA)16种,不饱和脂肪酸(UFA)含量为70.09%,其中的多不饱和脂肪酸(PUFAs)含量为42.48%。研究表明,白金丰产鲫含肉率高,必需氨基酸含量丰富、组成合理,脂肪酸种类丰富,不饱和脂肪酸特别是高度不饱和脂肪酸含量高。     

白金丰产鲫含肉率及肌肉营养成分分析

为评价新品种白金丰产鲫Carassius auratus Var.Pengzenensis♀×Cyprinus acutidorsalis Wan♂的含肉率和肌肉营养成分,选取体质量为(580.33±198.02)g的1龄白金丰产鲫进行分析,测定其含肉率、一般营养成分、氨基酸组成和脂肪酸组成。结果表明:白金丰产鲫含肉率为66.22%,肌肉中水分含量为79.90%,粗蛋白质含量为17.61%,粗脂肪含量为1.71%,灰分含量为1.13%;采用酸水解法共检测出17种氨基酸,其中必需氨基酸占氨基酸总量的39.50%,呈味氨基酸占总氨基酸含量的37.12%;必需氨基酸评价显示,白金丰产鲫的必需氨基酸评分均大于1,必需氨基酸组成符合FAO/WHO模式标准;共检测到23种脂肪酸,其中饱和脂肪酸(SFA)7种,不饱和脂肪酸(UFA)16种,不饱和脂肪酸(UFA)含量为70.09%,其中的多不饱和脂肪酸(PUFAs)含量为42.48%。研究表明,白金丰产鲫含肉率高,必需氨基酸含量丰富、组成合理,脂肪酸种类丰富,不饱和脂肪酸特别是高度不饱和脂肪酸含量高。     

黑尾近红鲌人工繁殖及胚胎发育的研究

对人工驯化的黑尾近红鲌Anoherythroculter nigrocauda进行人工药物催情、产卵和孵化,并连续观察其胚胎发育全过程。结果表明:用激素PG+HCG+LRH-A2、HCG+LRH-A2+DOM、PG+LRH-A2+DOM、HCG+LRH-A2组合催产,催产率均为100%,受精率为72.4%⁹7.9%,孵化率为63.8%97.9%,孵化率为63.8%⁸0.4%。黑尾近红鲌的胚胎发育时序和特征与斑马鱼Danio rerio相似,可分为7个时期。受精卵为黏性,呈淡黄色,圆形,直径为(0.94±0.05)mm。在水温为23.480.4%。黑尾近红鲌的胚胎发育时序和特征与斑马鱼Danio rerio相似,可分为7个时期。受精卵为黏性,呈淡黄色,圆形,直径为(0.94±0.05)mm。在水温为23.4²5.3℃条件下,受精卵经过25 min开始胚胎发育,45 min进入2细胞期,5 h 15 min进入囊胚期,7 h 25 min进入原肠期,10 h 15 min进入神经胚期,50 h 50%以上的仔鱼孵出。刚出膜的仔鱼体长为(4.10±0.02)mm。     

扁吻鱼胚胎及仔鱼发育的形态学观察

2005年4月底在人工繁殖条件下,对扁吻鱼Aspiorhynchus laticeps精、卵的形态,胚胎和仔鱼发育进行观察。结果表明:扁吻鱼的成熟卵呈浅灰色,微黏性,成熟卵卵径为1.80¹.85 mm,受精后卵膜吸水膨胀,卵膜直径为3.301.85 mm,受精后卵膜吸水膨胀,卵膜直径为3.30³.45 mm。受精卵在水温213.45 mm。受精卵在水温21²2℃下,历经1 h40 min胚盘突起;2 h10 min出现第一次卵裂;历经7 h 15 min胚胎发育到多细胞期;12 h 4 min发育到囊胚期;16 h 36 min为原肠早期;30h 20 min发育到神经胚期;历经91 h 37 min器官形成,心脏搏动,胚体摆动;103 h后仔鱼孵出,全长为7.5 mm。孵出后的第6 d,全长为11.6 mm,卵黄囊基本吸收完毕,开口索食。孵出26 d后,全长为21.00mm,奇鳍、偶鳍发育完成,肌肉增生,但体尚未披鳞。观察发现:扁吻鱼受精卵不仅具有黏性,而且卵膜吸水膨胀,形成的膜径1.8倍于卵径,富有弹性;受精卵发育后期在微流水中能悬浮水中片刻,后逐渐沉水,因此加强水中氧量的供给有助于其发育;受精卵的胚盘隆起至第6次卵裂的时距大大快于青海湖裸鲤,且眼基和体节、嗅囊和尾芽同时发生;孵出前的胚体已超越卵膜内经,尾端超出头部的眼后。     

中国鲫与日本鲫几个群体肌浆蛋白的电泳分析

以中国二倍体和三倍体鲫Carassius(黑龙江流域鲫、九江彭泽鲫、宁河彭泽鲫、海河流域鲫、金鱼)以及日本二倍体、三倍体鲫为试验材料,应用水平式淀粉凝胶电泳法对其肌浆蛋白进行了检测分析。结果表明:在中国二倍体鲫中共检测出4种类型(BB、BC、CC和BD),其中BB为主要类型,并且4种类型均不同于日本的二倍体鲫;在中国三倍体鲫中也检测出4种类型(BBB、BBC、BCC、ABB),方正银鲫中的两种类型(BBC、BCC)均不同于九江彭泽鲫、宁河彭泽鲫、于桥水库鲫和日本三倍体鲫,九江彭泽鲫、宁河彭泽鲫以及95.1%的于桥水库鲫为BBB类型,其电泳带组成与谷口顺彦报道的日本银鲫中的Ⅱ-1型相同。     

电磁场对鲫血清4种生化指标的影响研究

为研究电磁场对鱼类生理的影响,试验中将体质量为(103±2)g的40尾鲫Carassius auratus幼鱼分组放置在相同水温(10℃±1℃)、不同电磁场强度(0、0.5、1.0、1.5、2.0 mT的恒定磁场)下培养,并对每组鱼血清中的碱性磷酸酶(AKP)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、溶菌酶(LZM)活性和蛋白含量进行测定,试验周期为10 d,电磁场环境由亥姆霍兹线圈产生。结果表明:从试验第2天开始,电磁场试验组AKP活性明显低于对照组(P<0.05);电磁场试验组AChE活性在2¹0 d内逐渐减弱,并最终下降至初始活性的85.98%10 d内逐渐减弱,并最终下降至初始活性的85.98%⁹5.47%;试验结束时,电磁场试验组LZM活性显著低于对照组(P<0.05),蛋白含量较初始水平降低了24.61%。研究表明,电磁场对鲫血清4种生化指标的影响基本为抑制作用,说明多数外界环境的变化对鱼体本身会造成不利影响。     

舌鰕虎鱼的人工繁殖及其胚胎发育

为掌握舌鰕虎鱼Glossogobius giuris的人工繁殖技术及其胚胎发育特点,进行了舌鰕虎鱼人工繁殖试验和胚胎发育观察,研究了舌鰕虎鱼亲鱼强化培育、人工催产、产卵受精和胚胎发育过程,并描述了胚胎各发育时期的时序和形态特征。结果表明:性腺成熟的舌鰕虎鱼亲鱼经两次激素注射催熟催产,催产率为60%⁸0%,受精率为73.4%80%,受精率为73.4%⁸1.2%,孵化率为63.8%81.2%,孵化率为63.8%⁷7.2%;舌鰕虎鱼受精卵为纺锤形,呈黏性且半透明;胚胎发育分为胚盘形成期、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官形成期和出膜期7个阶段,以及26个发育时期;在2577.2%;舌鰕虎鱼受精卵为纺锤形,呈黏性且半透明;胚胎发育分为胚盘形成期、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官形成期和出膜期7个阶段,以及26个发育时期;在25²7℃条件下需要108 h完成孵化过程,初孵仔鱼体长为2.527℃条件下需要108 h完成孵化过程,初孵仔鱼体长为2.5³.5 mm,全长为2.73.5 mm,全长为2.7³.8 mm,肌节为263.8 mm,肌节为26²8对,心跳为5028对,心跳为50⁵5次/min。本研究结果可为舌鰕虎鱼资源的保护和人工繁殖提供理论指导。     

乌拉坦对鲫的麻醉效果

在鲫Carassius auratus适宜生存温度(室温为15～25℃)条件下,研究了10、20、30、40、50 g/L的乌拉坦(Urethane)溶液(pH为7.0±0.44)对鲫(体质量为230 g±9.46 g)的麻醉效果,探讨了乌拉坦对水生动物的麻醉作用,并提供日常实用的麻醉参数。结果表明:乌拉坦浓度为10～50 g/L时,麻醉时间随着乌拉坦浓度的增大而缩短,复苏时间随着乌拉坦浓度的增大而延长,但浓度为50 g/L时与浓度为40g/L时相比,鲫的复苏时间无显著性差异(P>0.05);浓度为10～40 g/L时,各组鲫的复苏率均为100%,浓度为50 g/L时,鲫的复苏率为88%;浓度为10～50 g/L时,各组鲫7 d的存活率均为100%。鲫在不同浓度(10～50 g/L)的乌拉坦溶液中药浴一定时间后,将其暴露于空气中,经过一定时间后鲫可自动苏醒而弹起。其中除50 g/L浓度组与40 g/L浓度组之间,鲫的弹起时间无显著差异(P>0.05)外,其余浓度组之间鲫的弹起时间均有显著差异(P<0.05);各浓度组药浴时间为10 min与5 min之间,鲫的弹起时间无显著差异(P>0.05),10 g/L组的药浴时间为25 min与20 min之间,鲫的弹起时间无显著差异(P>0.05),各浓度组其余药浴时间之间均有显著差异(P<0.05)。各试验组鲫7日存活率均为100%。药浴后的鲫能够恢复正常行为状态,表明乌拉坦对鲫行为的影响无明显的后遗效应。综合各项试验结果,表明乌拉坦对鲫的麻醉安全浓度为40 g/L。     

鲫听觉特性研究

为了解鱼类的听觉特性,以鲫Carassius auratus Linnaeus为研究对象,利用心电图(ECG)法和听觉脑干反应(ABR)法分别研究了体质量为262. 6～321. 8 g鲫的听觉阈值,通过在鱼体内插入电极,分别记录20尾鲫的心电图信号和听觉诱发电位,绘制出听力曲线,并分析比较了两种电生理听觉阈值测定方法的优缺点和准确性。结果表明:采用ECG法测得鲫听觉敏感频率范围为300～1000 Hz,最敏感频率为800 Hz,对应的听觉阈值为(70. 00±0. 55) d B;采用ABR法测得鲫听觉敏感频率范围与ECG法相近,最敏感频率相同,但对应的听觉阈值为(76. 00±0. 50) d B,采用ABR法所测数值略高于ECG法,总体相差约为(3. 50±0. 75) d B,在统计学上无显著性差异(P>0. 05)。研究表明,ABR法操作简便,数据精确,但对环境要求较ECG法更高,本研究结果可为了解中国淡水鱼类的听觉特性,以及发展淡水音响驯化型牧场建设提供参考和数据支持。     

大蒜素对鲫非特异免疫指标影响的研究

为评价大蒜素对鲫Carassius auratus非特异性免疫功能的影响,在鲫基础饲料中分别添加250、500mg/kg的大蒜素,并对鲫进行42 d的养殖试验,其中试验的第1~28天饲喂含大蒜素的试验饲料,第29~42天饲喂不含大蒜素的基础饲料。结果表明:与投喂基础饲料的对照组相比,添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清补体C3活力(P<0.05),而添加500 mg/kg剂量的大蒜素则能显著抑制鲫血清补体C3、C4活力(P<0.05),改投不含大蒜素的基础饲料后,该剂量组C4活性仍显著低于对照组(P<0.05);添加250、500 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清、肝胰脏、肾脏和脾脏中溶菌酶(LZM)活力(P<0.05),改投不含大蒜素的基础饲料的14 d内,250、500 mg/kg剂量组血清LZM活性及500 mg/kg剂量组肾脏和脾脏LZM活性仍有显著升高(P<0.05);添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高肝胰脏和脾脏中一氧化氮(NO)含量(P<0.05),添加500 mg/kg大蒜素能显著提高血清和脾脏中NO含量(P<0.05),但该剂量显著抑制肝胰脏NO含量(P<0.05),250、500 mg/kg剂量组肾脏中NO含量在第42天时均显著高于对照水平(P<0.05)。研究表明,鲫基础饲料中大蒜素的适宜添加剂量为250 mg/kg。     

五氯酚钠在鲫体内的毒性及代谢动力学的研究

在实验室条件下,研究了不同浓度的五氯酚钠溶液(0、1、2、3、4、5、10 mg/L)对鲫Carassiusauratus的毒性作用,并采用药浴的方式研究了五氯酚钠在鲫体内不同时间段的药代谢动力学。结果表明:五氯酚钠对鲫的毒性作用很强,当药物浓度为10 mg/L时,药浴1 h后试验动物100%死亡;当药物浓度为2 mg/L时,试验动物健康存活,药浴96 h无死亡现象;将鲫在2 mg/L的五氯酚钠溶液中浸浴24 h后,药物迅速被鲫吸收,血浆中0.5 h五氯酚钠浓度就能达到11.5 ng/mL,1 h达到峰值12.0 ng/mL,但药物的代谢较慢,给药70 d后才检测不到药物;药物在肌肉中的代谢与血浆中类似,1 h达到峰值(11.84 ng/mL),比血浆中的峰浓度略低,药动学参数t1/2α、t1/2β、MRT0-t、Tmax、Cmax、AUC0-t和MAT分别为12.6 h、186.8h、260.4 h、1 h、11.84 ng/mL、1106.5 ng/(mL.h)、222.5 h。     

β-葡聚糖和乳酸杆菌对鲫协同作用的初步研究

用分别喷有β-葡聚糖、益生菌制剂、β-葡聚糖与益生菌制剂联合以及不添加佐剂的一般饲料分别投喂鲫Carassius auratus,检测各试验组鲫肠道菌群、增重率、饲料系数和成活率。结果表明:与对照组相比,用β-葡聚糖和益生菌制剂联合投喂,鲫肠道中好氧菌总数极显著减少(P<0.01),厌氧菌总数、乳酸杆菌Lactobacillus、双歧杆菌Bifidobact数量显著增加(P<0.05),产气荚膜梭菌Clostridium perfringens数量显著减少(P<0.05);联合制剂中对鲫肠道菌群起调节作用的主要是益生菌,β-葡聚糖能协同益生菌减少鲫肠道的好氧菌,促进益生菌对鲫肠道产气荚膜梭菌的抑制作用;β-葡聚糖和益生菌制剂都能提高鲫对饲料的利用率,促进鲫生长和成活;β-葡聚糖和益生菌制剂联合对鲫的生长和成活的促进作用,比单独使用效果要显著得多。将β-葡聚糖和益生菌制剂配成复合型制剂在水产养殖中具有广阔的应用前景。     

醉鱼草对鲫麻醉效果及血清生化指标的影响

为探索新型鱼用麻醉剂的麻醉效果,采用不同浓度(2、4、6 g/L)醉鱼草Buddleja lindleyana Fortune粗提物水溶液对平均体质量为220 g左右的鲫Carassius auratus进行麻醉效果试验,并分析了浓度为6 g/L的醉鱼草水溶液对鲫血清生化指标的影响。结果表明:随着醉鱼草粗提物水溶液浓度的提升,鲫麻醉所需时间减少,复苏所需时间增加,呼吸频率下降;3个浓度条件下鲫复苏率均为100%,其中浓度为6 g/L的醉鱼草水溶液对鲫麻醉效果最为明显;对鲫血清生化指标检测表明,醉鱼草粗提物水溶液对鲫有麻醉作用,CAT的显著升高也表明其激发了肝细胞的氧化防御反应,细胞通过提高CAT的生产速率来抵御物质带来的氧化损伤;安全性评价结果显示,醉鱼草对鲫无毒性。研究表明,醉鱼草对鲫有明显的麻醉效果,可作为新型鱼用麻醉剂进行开发与使用。     

手术植入超声波信标对鲫鱼的影响

为研究手术植入超声波信标对鱼体的影响,以体长20 cm的鲫Carassius auratus Linnaeus为研究对象,使用手术缝合器进行信标植入缝合,试验设置对照组、虚假组(手术后不植入超声波信标)和信标组(手术后植入超声波信标),每组5尾鱼,在术后不同恢复时间(2 h、1 d、3 d和7 d)对试验鱼进行绝对临界游泳速度测量,同时记录试验鱼切口的变化情况。结果表明:在手术植入超声波信标后2 h,信标组、虚假组和对照组鲫的绝对临界游泳速度分别为(70.53±2.32)、(73.38±2.16)、(82.09±2.90)cm/s,信标组较对照组降低了14.06%(P<0.05);在手术植入信标1 d后,信标组鲫的绝对临界游泳速度恢复到(80.58±3.64)cm/s,虚假组为(79.59±1.94)cm/s,二者与对照组均无显著性差异(P>0.05);在7 d的试验和观察中,手术植入信标不会对鱼产生致死性影响,使用手术缝合器缝合能够保持切口闭合,缝合钉保留率为95%,切口未出现感染或坏死。研究表明,信标植入鱼体产生负面影响的关键时间为手术后2 h,而使用手术缝合器能够有效减少缝合时间,缝合效果良好,不会对植入信标的鱼行为产生负面影响。     

用Protein A亲和层析法快速分离纯化鲫血清IgM方法的建立和应用

采用Protein A亲和层析法对鲫Carassius auratus血清中的IgM进行快速分离纯化,所得产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blotting)进行分析检测。结果表明:采用Protein A亲和层析法可以很好地分离到高纯度的鲫血清IgM,电泳条带中重链和轻链清晰可辨,重链、轻链的相对分子质量分别为85 000、25 000左右,无明显杂带;利用纯化的鲫血清IgM免疫小鼠,获得了高效价抗IgM抗血清,可以特异性识别鲫血清和黏液中IgM重链。应用间接ELISA方法对浸泡免疫后的鲫血清和皮肤黏液中抗体的动态进行检测,结果显示:鲫皮肤黏液中的抗体滴度在免疫后第6天达到峰值,血清中抗体滴度在免疫后第15天达到峰值,前者高峰期出现较早,但持续时间短,后者高峰期出现较晚,但持续时间较长。本试验中所建立的Protien A亲和层析法为鱼类抗体制备、病原检测及免疫学相关研究提供了一种便捷的方法。     

一例查干湖异育银鲫洪湖碘泡虫病原的鉴定与生物信息学分析

为了鉴定东北地区异育银鲫Carassius auratus gibelio感染的病原体是否为洪湖碘泡虫Myxobolus honghuensis,在吉林省查干湖某异育银鲫养殖基地获取病鱼,采用病鱼体外观察、虫体形态学观察与可量形状测定,对该寄生虫进行了初步鉴定,并对该寄生虫的18S r DNA进行克隆、测序与生物信息学分析。结果表明:病鱼症状具有典型的碘泡虫感染特征;可量形状测定结果表明,虫体外观与尺寸均与洪湖碘泡虫接近;生物信息学分析表明,该虫的18S r DNA与Gen Bank中登录号为JF340216的洪湖碘泡虫同源性达到99.3%;系统发育树显示,与已知洪湖碘泡虫为同一进化分支,确定该病为洪湖碘泡虫感染。本研究中,首次报道了东北地区一例早期感染洪湖碘泡虫的异育银鲫病例,研究结果可为碘泡虫的防治提供参考。     

蛭弧菌Bdh5221对银鲫肠道菌群和非特异性免疫指标的影响

将360尾体重为50 g左右的银鲫Carassius auratus gibelio随机分为3个组,每个组设立3个平行,每个平行40尾鱼。将蛭弧菌Bdh5221菌液以0、104、107CFU/g(饲料)的浓度喷洒于基础饲料上投喂银鲫,于第7、14、21、28天时检测银鲫肠道蛭弧菌Bdellovibriosp.数量的变化。在两个试验组蛭弧菌数量基本达到稳定(即第28天)时,测定蛭弧菌Bdh5221对银鲫肠道菌群和血清中非特异性免疫指标的影响。结果表明:两个试验组的大肠杆菌、气单胞菌数量显著少于对照组(P<0.05),而乳酸杆菌数量极显著大于对照组(P<0.01),双歧杆菌数量有上升的趋势,拟杆菌变化不明显;溶菌酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化酶及107CFU/g组的超氧化物歧化酶活性显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。由此表明,在饲料中添加蛭弧菌具有改善银鲫肠道菌群和提高免疫相关酶活性的作用。