草鱼铜绿假单胞菌灭活疫苗发酵培养基的优化及其在发酵罐的生长试验

为培养优质的铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa菌液,通过单因素试验对草鱼铜绿假单胞菌灭活疫苗发酵培养基的氮源、碳源和磷酸盐成分进行了筛选,采用正交试验法对培养基各主要成分的用量进行了优化组合,并经过验证试验绘制出了铜绿假单胞菌JP802在优化培养基条件下的5 L发酵罐生长曲线。结果表明:草鱼赤皮病铜绿假单胞菌JP802发酵培养基中最佳氮源为蛋白胨+牛肉膏+酵母膏,最佳碳源为葡萄糖,最佳磷酸盐为磷酸氢二钾;确立了培养基的优化配方为蛋白胨10 g/L、牛肉膏5.0 g/L、酵母膏2.5 g/L、葡萄糖5.0 g/L、磷酸氢二钾0.75 g/L、氯化钠5.0 g/L,JP802菌株在此培养基中发酵14 h菌体浓度达到最大(OD_(600 nm)值为6.44)。研究表明,通过对发酵培养基的优化,可以获得更高产量的铜绿假单胞菌JP802发酵菌液。     

草鱼铜绿假单胞菌灭活疫苗发酵培养基的优化及其在发酵罐的生长试验

为培养优质的铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa菌液,通过单因素试验对草鱼铜绿假单胞菌灭活疫苗发酵培养基的氮源、碳源和磷酸盐成分进行了筛选,采用正交试验法对培养基各主要成分的用量进行了优化组合,并经过验证试验绘制出了铜绿假单胞菌JP802在优化培养基条件下的5 L发酵罐生长曲线。结果表明:草鱼赤皮病铜绿假单胞菌JP802发酵培养基中最佳氮源为蛋白胨+牛肉膏+酵母膏,最佳碳源为葡萄糖,最佳磷酸盐为磷酸氢二钾;确立了培养基的优化配方为蛋白胨10 g/L、牛肉膏5.0 g/L、酵母膏2.5 g/L、葡萄糖5.0 g/L、磷酸氢二钾0.75 g/L、氯化钠5.0 g/L,JP802菌株在此培养基中发酵14 h菌体浓度达到最大(OD_(600 nm)值为6.44)。研究表明,通过对发酵培养基的优化,可以获得更高产量的铜绿假单胞菌JP802发酵菌液。     

微生物絮凝剂产生菌的筛选、鉴定及培养条件优化

以活性污泥作为菌种来源,通过加入刚果红的寡培养基稀释涂布法和富培养基平板划线分离法,筛选出24株微生物絮凝剂产生菌,其中菌株LL6的絮凝活性最高,经鉴定,该菌为约氏不动杆菌(Acinetobacter sp.)。通过正交试验确定菌株LL6的最佳培养基成分配比为:葡萄糖,15g/L;蔗糖,10 g/L;酵母膏,0.7 g/L;尿素,0.1 g/L;硫酸铵,0.5 g/L;KH2PO4,1 g/L;K2HPO4,2.5 g/L;Mg SO4,0.3 g/L;Na Cl,0.2 g/L。通过单因子试验得出菌株LL6的最佳培养条件如下:初始p H值为6,培养温度为20℃,培养时间为24 h,摇床转速为150 r/min。     

用黄色隐球酵母发酵生产辅酶Q10最佳条件的选择

从黄色隐球酵母CryptococcusluteolusL3302中提取辅酶Q10,经过对氮源、碳源、初始pH、发酵温度等的研究分析,得到最佳的发酵条件。通过最优化试验,确定培养基的碳源为蔗糖和葡萄糖各1 25g/L;氮源为酵母膏和玉米浆,各0 3g/L;pH值6 5,温度28℃,接种量5%,500mL锥形瓶中的装液量为50mL;生长因子以蛋白水解液为优。按此发酵条件上罐发酵,发酵液中菌体生长量为13 4g/L,辅酶Q10的产量为18 2mg/L。     

产κ-卡拉胶酶菌株的筛选及其发酵条件的优化

对κ-卡拉胶酶产生菌进行富集培养,以κ-卡拉胶为唯一碳源的平板初筛,从多种海藻上分离纯化获得32株具有卡拉胶酶活性的菌株,经摇瓶复筛,从亮管藻上分离的HC4菌株酶活力最高,为50.75U/mL。测定了HC4菌株的16S rRNA基因序列1436 bp,在核苷酸序列数据库(NCBI)中进行同源性检索,发现它与Tamlana agarivorans的相似性为98%。通过单因子筛选和正交试验,确定该菌株产酶的最佳培养基组成为:碳源κ-卡拉胶5 g/L;氮源蛋白胨3 g/L和NaNO31 g/L;无机盐NaCl 20 g/L、K2HPO4.3H2O 1 g/L、MgSO4.7H2O 0.5 g/L和CaCl20.1 g/L。最佳培养条件为:摇床转速150 r/min,250 mL三角瓶中发酵培养基的装液量50 mL,接种量4%,发酵培养基起始pH7.5,温度28℃,培养时间28 h。经培养基组成及培养条件优化后,HC4菌株的κ-卡拉胶酶酶活力提高到602.30 U/mL,是优化前的11.87倍。     

碳源、氮源对异养单针藻Monoraphidium sp.FXY-10油脂积累和脂肪酸组成的影响

研究了碳源与氮源对单针藻Monoraphidium sp.FXY-10异养培养的影响。以BG-11为基础培养基,通过添加不同类型、浓度梯度碳源和氮源,比较分析微藻生物量、油脂积累以及脂肪酸组成。结果表明,以葡萄糖作碳源,硝酸钠为氮源,微藻细胞积累的油脂是理想的生物柴油制备原料。硝酸钠浓度分别为1.00、3.00和5.00 g/L时,对油脂产量影响不显著(P>0.05)。葡萄糖浓度为10.00 g/L,硝酸钠为氮源油脂产量达到实验最高值0.84 g/L,其油脂脂肪酸组成主要由C16∶0和C18∶1等短链饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸组成,不饱和度值(DU)为61.98,相对偏低。     

翅碱蓬根系降油细菌的筛选及其生长特性研究

为建立适用于沿海滩涂石油污染的翅碱蓬-细菌复合修复技术,对翅碱蓬Suaeda heteroptera Kitag根系及其土壤进行常规细菌分离,并采用柴油为唯一碳源的平板,从中筛选具有降油性能的菌株并对筛选的菌株进行降油性能测定,研究其在不同作用时间(3、5、7 d)时对柴油的原始降解率,选择在3个时间段中降油性能均较高的菌株作为目的菌进行形态学观察、生理生化特征和16S r DNA序列分析,测定其生长特性。结果表明:试验中共分离纯化出28株细菌,其中具有降油性能的细菌有7株,编号分别为S1、G3、G4、G9、G10、G11、G12;7株细菌对柴油的原始降解率,作用3 d时分别为34.21%、3.68%、18.40%、18.95%、0.52%、9.47%、21.05%,作用5 d时分别为44.06%、3.19%、23.90%、24.70%、31.47%、25.90%、46.22%,作用7 d时分别为41.09%、1.49%、14.36%、28.22%、14.36%、29.70%、31.68%;S1、G11和G12菌株对柴油具有较高降解率;S1属微杆菌属Microbacterium,与Microbacterium saperdate的相似性为98.7%,G11和G12均属于刘志恒菌属Zhihengliuella,与Zhihengliuella halotolerans的相似性均为99.8%,3株菌的最适生长温度范围均为15³0℃,最适生长盐度分别为0、20、20,最适生长p H分别为5、7和7。     

翅碱蓬根系降油细菌的筛选及其生长特性研究

为建立适用于沿海滩涂石油污染的翅碱蓬-细菌复合修复技术,对翅碱蓬Suaeda heteroptera Kitag根系及其土壤进行常规细菌分离,并采用柴油为唯一碳源的平板,从中筛选具有降油性能的菌株并对筛选的菌株进行降油性能测定,研究其在不同作用时间(3、5、7 d)时对柴油的原始降解率,选择在3个时间段中降油性能均较高的菌株作为目的菌进行形态学观察、生理生化特征和16S r DNA序列分析,测定其生长特性。结果表明:试验中共分离纯化出28株细菌,其中具有降油性能的细菌有7株,编号分别为S1、G3、G4、G9、G10、G11、G12;7株细菌对柴油的原始降解率,作用3 d时分别为34.21%、3.68%、18.40%、18.95%、0.52%、9.47%、21.05%,作用5 d时分别为44.06%、3.19%、23.90%、24.70%、31.47%、25.90%、46.22%,作用7 d时分别为41.09%、1.49%、14.36%、28.22%、14.36%、29.70%、31.68%;S1、G11和G12菌株对柴油具有较高降解率;S1属微杆菌属Microbacterium,与Microbacterium saperdate的相似性为98.7%,G11和G12均属于刘志恒菌属Zhihengliuella,与Zhihengliuella halotolerans的相似性均为99.8%,3株菌的最适生长温度范围均为15~30℃,最适生长盐度分别为0、20、20,最适生长p H分别为5、7和7。     

3株耐盐细菌对萘、菲、惹烯和苯并[α]芘的降解性能

为研究3株耐盐细菌(S1 Microbacterium sp.、G12 Zhihengliuella sp.和Y3 Pseudomon putida)对多环芳烃的利用性能,分别测定其在以萘、菲、惹烯和苯并[α]芘为唯一碳源并添加不同浓度葡萄糖(0、0.5、1.0、1.5 g/L)的无机盐培养基中的生长情况,采用气质联用(GC-MS)技术测定了3株菌在上述培养基中作用7 d后对4种多环芳烃(PAHs)的降解性能,同时测定出3株菌的生长量并计算出单位细胞的降解效率。结果表明:3株菌均能够利用4种PAHs作为碳源,且在无糖的萘-无机盐培养基的中生长量高于其他3种PAHs-无机盐培养基,在萘、菲、惹烯-无机盐培养基的生长量均与含糖量成正比,但0.5、1.0、1.5 g/L葡萄糖组间无显著性差异(P>0.05);添加1.0 g/L葡萄糖时,3株菌对4种PAHs的降解率均可达到最高值,对萘的降解率分别提高了44.06%(S1)、70.56%(Y3)和50.98%(G12),对菲的降解率分别提高了49.66%(S1)、45.87%(Y3)和38.29%(G12),对惹烯的降解率分别提高了66.13%(S1)、61.31%(Y3)和56.20%(G12),对苯并[α]芘的降解率分别提高了69.42%(S1)、65.79%(Y3)和65.01%(G12)。研究表明,3株菌对4种PAHs单个细胞降解速率均随葡萄糖浓度的增加而大幅度降低,呈剂量反比关系。     

氨基甲酸乙酯的生物降解研究

为了降低发酵食品中的氨基甲酸乙酯含量,对氨基甲酸乙酯的生物降解展开研究。从土壤样中采用氨基甲酸乙酯和葡萄糖为碳氮源的选择性培养基初筛、复筛降解氨基甲酸乙酯的菌株。以耐受氨基甲酸乙酯性能,菌体生长量和生长繁殖时间为筛选标准,评价菌株的生长和降解能力。同时考查不同碳氮源对菌株培养的影响和优化,并采用气相色谱法测定降解菌株对氨基甲酸乙酯的降解率。研究表明筛选的高效降解菌对1g/100ml氨基甲酸乙酯溶液的降解率为53.91%,其中蛋白胨和硫酸铵作为辅助氮源添加对降解效果影响明显。筛选到的菌株对氨基甲酸乙酯有较高降解能力,且优化培养条件可以提高降解率,为深入研究生物降解提供良好的资源。