胡椒总多酚的提取及其抗氧化活性研究

明确总多酚在胡椒果上的分布与抗氧化活性,建立胡椒总多酚的提取和分析方法,为胡椒总多酚的进一步研究奠定基础。以黑胡椒果实为主要原料,通过单因素和正交实验,分析乙醇浓度、提取时间、料液比、提取温度等4个因素对胡椒总多酚提取率的影响。以没食子酸作为标准物质,利用福林酚比色法测定黑胡椒提取液中总多酚含量。分析测定胡椒果皮、种子和果梗中总多酚含量。以维生素C作对比,清除DPPH自由基的半抑制浓度(IC50)作为评价抗氧化活性指标,分析总多酚含量与IC50的相关性。结果表明:胡椒总多酚的最佳提取条件为55%乙醇浓度、提取时间4 h、料液比1:30(g/m L)、提取温度90℃,黑胡椒总多酚含量为6.556 mg/g。总多酚类物质在胡椒果梗中含量最高,为12.208 mg/g,其次为果皮(12.105 mg/g),种子最低(2.891 mg/g)。胡椒总多酚含量与IC50值呈显著负相关(P<0.05)。胡椒总多酚相对维生素C具有更高的清除DPPH自由基能力。总多酚是胡椒的重要抗氧化活性成分,胡椒果梗和果皮可以作为一种良好的天然抗氧化剂物质来源。     

紫色胡萝卜中花青素的提取、分离及抗氧化活性研究

目的:从紫色胡萝卜中提取、分离花青素,并对提取所得的花青素进行体外抗氧化活性研究。方法:以维生素C作为阳性对照,研究不同浓度的花青素对·OH、H2O2、O2-·的清除效果。结果:从紫色胡萝卜提取所得的花青素对·OH、H2O2、O2-·均有较好的清除率。结论:紫色胡萝卜中分离提取的花青素有较好的抗氧化活性。     

海藻多酚功能性作用机制及其应用研究

海藻多酚(Algae Polyphenols)是海藻次级代谢产物,可保护海藻自身免受植食性动物干扰,因其具有多种生物学活性,已成为人们对海洋活性物质研究的热点。本研究中对海藻多酚提取工艺和分离纯化技术进行综述,阐明了海藻多酚的抗氧化、抑菌、抗病毒、抗肿瘤、抗过敏、抗炎症、抗血凝、葡萄糖稳态调节等生物学活性作用机制,以及海藻多酚化学结构与其生物学活性的构效关系,总结了海藻多酚的应用现状,表明海藻多酚具有可持续性高值化利用发展的价值。同时指出今后需加强海藻多酚功能性结构、活性作用机制、产品应用开发的研究,海藻多酚在工农业生产中具有广大应用前景。     

复合酶法提取蕨麻多糖及其抗氧化活性研究

确定了复合酶(纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶)提取蕨麻多糖的最佳工艺,并对其体外抗氧化活性进行初步研究.在单因素试验的基础上,设计L9(33)正交实验和L9(34)正交实验,分别得出复合酶的最佳配比和复合酶法提取蕨麻多糖的最佳提取工艺条件;采用清除·OH(羟基)自由基模型和O2一·(超氧阴离子)自由基模型评价了蕨麻多糖的抗氧化能力.结果表明:复合酶的最佳配比为:纤维素酶2.0%,木瓜蛋白酶1.0%,果胶酶2.0%;最佳工艺条件为:料液比为1:30、p H值为4.5,温度为45℃,酶解时间为60min,此时蕨麻多糖的提取率最大为8.12%,同时验证性实验也表明优化得到的提取工艺稳定可靠;蕨麻多糖对羟基自由基和超氧阴离子都具有较强的清除作用,并与浓度呈一定依赖关系,且对羟自由基的清除能力要比超氧阴离子自由基的清除能力强.     

桑叶发酵前后总黄酮、总酚酸含量变化及抗氧化活性研究

目的:比较桑叶70%乙醇提取物液体发酵前后的抗氧化活性,并考察发酵前后总黄酮、总酚酸含量的变化。方法:利用冠突散囊菌在桑叶70%乙醇提取物的液体培养基中发酵培养,将得到的发酵液和未发酵的桑叶70%乙醇提取物以抗坏血酸和EDTA为阳性对照,针对指定指标(DPPH、ABTS、FRAP、OH·、螯合能力)进行体外抗氧化活性试验;并对发酵前后总黄酮、总酚酸含量进行测定。结果:未发酵桑叶70%乙醇提取物的抗氧化活性整体优于液体发酵后的抗氧化活性。其中未发酵桑叶70%乙醇提取物对DPPH、ABTS、螯合能力的IC50值分别为:4.69mg·ml-1、2.03mg·ml-1、20.89mg·ml-1,而液体发酵后的桑叶70%乙醇提取物三者的IC50值分别为:12.42mg·ml-1、2.65mg·ml-1、14.81mg·ml-1;同时含量测定结果显示,发酵后桑叶中总多酚含量较发酵前明显下降,而发酵后桑叶中总黄酮含量却明显高于发酵前总黄酮含量。其中发酵前桑叶中总黄酮、总酚酸含量分别为4.39mg·ml-1、3.95mg·ml-1,而发酵后桑叶中总黄酮含量高达8.53mg·g-1,总酚酸却下降为1.24mg·g-1。结论:桑叶70%乙醇提取物液体发酵前后体外均具有一定的抗氧化活性,但发酵前抗氧化作用较明显。此外通过微生物转化,显著性提高桑叶中总黄酮含量的同时,却降低了桑叶中总酚酸含量,因此可以推测,桑叶中起到抗氧化作用的主要成分并非是黄酮类化合物,而是非黄酮类的多酚类成分。     

桦树皮甲醇提取物的体外抗氧化活性研究

目的:测定桦树皮甲醇提取物的体外抗氧化活性。方法:以2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和维生素C为对照,测定桦树皮甲醇提取物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)的清除率,并用铁离子还原法(FRAP)分析了桦树皮甲醇提取物的抗氧化活性。结果:桦树皮甲醇提取物、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和维生素C对DPPH的IC50分别为0.43、0.09和0.21mg/ml,FRAP值分别为1.54±0.012、4.54±0.028.和5.76±0.041mmol/g。结论:桦树皮甲醇提取物对DPPH自由基有良好的清除作用,对铁离子的还原性较强,具有良好的抗氧化活性。     

海蜇多肽的制备工艺及体外抗氧化活性的研究

用胰蛋白酶酶解提取海蜇多肽,探索不同的酶解条件对酶解工艺的影响,并从还原体系、羟自由基清除体系、DPPH自由基清除体系等三个方面,对海蜇酶解多肽的提取制备工艺及体外抗氧化活性进行研究。结果表明:海蜇不同部位酶解物具有不同的最佳酶解条件。当处于最佳酶解条件时,海蜇头和海蜇皮的氨基氮含量最高值分别为15.25%和48.13%,对羟基自由基的清除率分别为77.95%和78.72%,其中DPPH自由基的清除率分别为52.41%和59.24%,其还原力大小用吸光值表示分别为0.459和0.507。     

微波辅助提取款冬花多糖的工艺及抗氧化活性研究

目的:研究款冬花多糖微波辅助提取工艺及其抗氧化活性。方法:通过单因素实验,对影响款冬花多糖提取率的料液比、微波功率、微波时间进行考察,最后,选用正交实验对提取工艺参数进行优化,并研究款冬花多糖对羟基自由基、超氧阴离子的清除作用。结果:实验结果表明,款冬花多糖微波辅助提取最佳实验条件为料液比为1∶30(g/m L),微波功率为600 W,微波时间为7 min,在此条件下,多糖得率为14.806%。随着款冬花多糖浓度的增大,其清除羟基自由基、超氧阴离子的能力也随之增加。结论:款冬花多糖具有一定的抗氧化性,并对羟自由基、超氧自由基有较强的清除能力。     

笼式钻头的改进及其在黏土地层中的应用

结合工程实际,针对黏土地层钻进过程中,出现的钻进缓慢、糊钻、埋钻等问题,提出了改进措施,解决了正循环钻机在黏土地层中正常钻进的问题,并取得了显著的经济效益。     

一种施工升降机分体式吊笼的设计及研究

针对目前施工升降机吊笼采用整体焊接,无法根据施工环境改变吊笼尺寸的问题,提出了一种具有结构简单、模块体积小、便于运输、可灵活组装变长度特色的分体式吊笼结构,能满足不同施工场景对升降机的需求,降低施工成本,实现一机多用。     

萱藻配子孤雌生殖丝状体的采苗及育苗研究

为研究萱藻Scytosiphon lomentaria的丝状体育苗,以大连沿海萱藻为材料,采用配子孤雌生殖方法,进行了丝状体的诱导及采苗、育苗研究。结果表明:单株种藻获得的配子经孤雌生殖形成的盘状体在20℃时生长最快,15℃时次之,10℃时最慢;盘状体直径达到100μm以上时开始形成丝状体,丝状体在20℃时形成的时间最短、数量最多、生长速度最快,15℃时次之,10℃时最差;将丝状体剥下经增殖后切碎采苗,在10℃时幼苗形成最快、形成率最高,15℃时次之,20℃时无幼苗形成;在10℃时,采苗后培养30 d幼苗长度达到(11.0±0.3)mm,移至海区栽培4个月后获得藻体长度为60 cm左右的萱藻成体。     

重金属镉对铜藻生长及其生物活性成分积累的影响

为研究水体重金属污染对经济海藻的生长和品质造成的严重影响,以经济褐藻铜藻Sargassum horneri为研究对象,在温度为15℃的条件下,研究了由Cd Cl2·2.5H2O配制不同浓度(0、0.1、0.5、1.0、5.0 mg/L)的重金属镉胁迫对铜藻生长、光合色素、可溶性糖、可溶性蛋白等生理生化指标,以及对生物活性成分(岩藻黄素、褐藻胶和褐藻多酚)积累的影响。结果表明:对照组藻体的特定生长率(SGR)在15 d内持续升高,0.1、0.5 mg/L Cd处理组的SGR在试验前10 d内逐渐升高,然后保持稳定至第15天,1.0 mg/L处理组的SGR随着培养时间的延长呈波动变化状态,而5.0 mg/L处理组的SGR呈先升高后降低的趋势;藻体的各项生理生化指标随胁迫时间呈不同的变化趋势,但在试验第15天时,各胁迫组藻体的叶绿素a、类胡萝卜素和可溶性蛋白含量均显著低于对照组(P<0.05),而可溶性糖含量则显著高于对照组(P<0.05);铜藻的岩藻黄素和褐藻多酚含量在不同浓度的Cd胁迫下均有极大程度的下降,且Cd胁迫浓度越高,降幅越大,而褐藻胶含量在Cd浓度≤0.5 mg/L胁迫下未有显著变化(P>0.05),在Cd≥1.0mg/L时显著下降(P<0.05)。研究表明,在铜藻产业化开发应用过程中,其养殖海域的重金属污染是需要考虑的重要因素。     

Release of mercury from dental amalgam and its influence on salivary antioxidant activity

Dental amalgam fillings are known to release significant amounts of mercury (Hg) in saliva which could represent a continuous source of oxidative damage to mouth tissues. The present investigation was aimed at verifying this hypothesis by determining a possible correlation between salivary Hg levels and salivary total antioxidant activity (TAA), which is used as an index of oxidative stress. Samples of saliva from 34 healthy donors were analyzed for Hg content, by vapor atomic absorption spectrometry, and for TAA, by determining the ferric reducing ability ('FRAP' method). A significant correlation between Hg and the number of amalgam restorations or total amalgam surface was evident in both the male and female subjects. A significant negative correlation between TAA and Hg levels or number of amalgam restorations or amalgam surface was evident in females, indicating that small increases in salivary Hg were sufficient to produce a decrease in salivary TAA. On the other hand, no significant correlation was found in the males. The present study provides, for the first time, evidence of a pro-oxidant role of the amalgam Hg chronically released in saliva.     

拟穴青蟹抗菌肽SCY2在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性

为深入研究拟穴青蟹Scylla paramamosain阴离子抗菌肽SCY2的抗菌活性,将抗菌肽SCY2的成熟肽序列与毕赤酵母Pichia pastoris的p PIC9K质粒连接,构建了分泌型表达载体p PIC9K-SCY2,用电击法将其转化至毕赤酵母GS115菌株中,经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得目的蛋白,并进行质谱鉴定和抗菌活性分析。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9K-SCY2,用0.5%甲醇诱导表达24 h后,分泌表达上清液中获得了相对分子质量约11 000的稳定表达产物,与预期的抗菌肽SCY2成熟肽的大小相符;纯化后的目的蛋白经质谱鉴定,有6个肽段的氨基酸序列与预期一致;抗菌活性结果表明,抗菌肽SCY2能抑制革兰氏阳性菌生长,对被测的革兰氏阴性菌无抑杀活性(>50μmol/L);抗菌肽SCY2同抗生素进行协同抗菌试验,发现SCY2与四环素协同使用对荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens的抑杀存在协同作用,SCY2与青霉素协同使用对施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri的抑杀具有增强作用。研究表明,较低浓度的抗生素与抗菌肽协同使用可有效地减少抗生素的使用,降低食品中抗生素的残留风险。     

A simple purification and activity assay of the coagulant protein from Moringa oleifera seed

Use of extracts from Moringa oleifera (MO) is of great interest for low-cost water treatment. This paper discusses water and salt extraction of a coagulant protein from the seed, purification using ion exchange, its chemical characteristics, coagulation and antimicrobial properties. The coagulant from both extracts is a cationic protein with pI greater than 9.6 and molecular mass less than 6.5 kDa. Mass spectrometric analysis of the purified water extract indicated that it contained at least four homologous proteins, based on MS/MS peptide sequence data. The protein is thermoresistant and remained active after 5h heat treatment at 95 degrees C. The coagulant protein showed both flocculating and antibacterial effects of 1.1--4 log reduction. With samples of high turbidity, the MO extract showed similar coagulation activity as alum. Cecropin A and MO extract were found to have similar flocculation effects for clay and microorganisms. Simple methods for both the purification and assay of MO coagulating proteins are presented, which are necessary for large-scale water treatment applications.     

SD新生大鼠c-kit阳性心肌细胞的分离纯化

目的:建立新生SD大鼠c-kit阳性细胞分离纯化及传代的培养方法。方法:取出生24h之内新生SD大鼠心尖部组织,用PBS液洗去心尖部的血液,将其剪碎成lmm3以下的组织块培养,培养48h后,0.5%Trypsin-EDTA消化,用免疫磁珠分选c-kit阳性的心肌细胞,继续培养传代。用倒置显微镜观察c-kit阳性心肌细胞,用免疫细胞化学法检测心肌组织特异性cTnT及Desmin蛋白。结果:用心脏组织培养法成功得到了体外搏动的原代心肌细胞;用免疫磁珠分选了c-kit阳性心肌细胞,倒置显微镜下观察到c-kit阳性心肌细胞具有传代增殖的特性;同时,检测了c-kit阳性心肌细胞胞质cTnT及Desmin结合蛋白的阳性表达。结论:采用改良后的培养方法获得了c-kit阳性心肌细胞,该细胞具有心肌干细胞的蛋白表达特性,并具有一定的传代增殖能力。     

大孔吸附树脂分离纯化苗药雪人参中α-葡萄糖苷酶抑制物质的研究

目的:筛选出纯化苗药雪人参中α-葡萄糖苷酶抑制物质的最佳大孔树脂,并对影响分离纯化的主要因素进行探讨,确定最优工艺参数。方法:采用分光光度法和酶标法测定雪人参乙醇提取液中α-葡萄糖苷酶抑制物质的含量,并通过静态吸附和动态吸附两种方法筛选出最佳大孔树脂,以α-葡萄糖苷酶抑制物质酶活性抑制率为指标对优化后的工艺条件进行验证。结果:大孔树脂HPD600在室温下吸附效果最好,优化后的工艺参数为提取液p H=8.0、提取液体积与大孔树脂质量之比为1∶10,洗脱剂为70%乙醇溶液,洗脱体积为3BV。结论:纯化前后α-葡萄糖苷酶抑制物质酶活性抑制率提高约3倍,工艺稳定。     

长角血蜱副肌球蛋白的原核表达、纯化与免疫原性分析

为进一步研究长角血蜱副肌球蛋白(paramyosin,Pmy)的免疫保护力,将本实验室构建的重组质粒pET-32(a+)-pmy转入E.coli BL21进行原核表达。SDS-PAGE电泳结果表明,在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)浓度为0.5mmol/L、诱导温度为25℃、诱导时间为6h条件下,重组蛋白(rPmy)在菌液上清中的表达量最高,并通过亲和层析法纯化得到rPmy。Western blotting结果表明rPmy具有免疫原性。研究结果可为今后抗蜱疫苗的研制提供理论依据。     

Recovery and concentration of polyphenols from olive mill wastewaters by integrated membrane system

The purpose of this work was to analyse the potentialities of an integrated membrane system for the recovery, purification and concentration of polyphenols from olive mill wastewater (OMW). The proposed system included some well-known membrane operations such as microfiltration (MF) and nanofiltration (NF), as well as others not yet investigated for this specific application, such as osmotic distillation (OD) and vacuum membrane distillation (VMD).The OMW was directly submitted to a MF operation without preliminary centrifugation. This step allowed to achieve a 91% and 26% reduction of suspended solids and total organic carbon (TOC), respectively. Moreover, 78% of the initial content of polyphenols was recovered in the permeate stream.The MF permeate was then submitted to a NF treatment. Almost all polyphenols were recovered in the produced permeate solution, while TOC was reduced from 15 g/L to 5.6 g/L.A concentrated solution enriched in polyphenols was obtained by treating the NF permeate by OD. In particular, a solution containing about 0.5 g/L of free low molecular weight polyphenols, with hydroxytyrosol representing 56% of the total, was produced by using a calcium chloride dihydrate solution as brine. The obtained solution is of interest for preparing formulations to be used in food, cosmetic and pharmaceutical industry. Besides the OD process, VMD was applied as another way for concentrating the NF permeate and the performance of both processes was compared in terms of evaporation fluxes.