普洱茶多糖分离及纯化

研究10种树脂对普洱茶多糖溶液色素脱除的效果,比较sevag法、三氯乙酸法、盐酸等电点法对普洱茶多糖的脱蛋白质效果.脱色、脱蛋白后的茶多糖经冷冻干燥、透析后,再用DEAE-52纤维素柱层析分离纯化.结果表明:D101大孔吸附树脂为普洱茶多糖脱色的最佳树脂,脱色率为72.27%,多糖保留率为46.97%,脱蛋白率为71.38%;三氯乙酸的脱蛋白效果最佳,添加2%(体积分数)质量分数为50%的三氯乙酸可脱除95.2%的蛋白质;选择水和NaCl溶液作为洗脱剂的温和条件,DEAE-52纤维素柱水洗脱的多糖得率最高,为51.23%.     

毛竹竹叶多糖分离与纯化技术研究

对毛竹叶采用超声波提取法获得的竹叶多糖粗提取物,采用Sevag法脱蛋白质、乙醇分级沉淀、冷冻干燥后得到粗多糖,进一步用DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex葡聚糖凝胶柱层析等方法分离纯化.结果表明:Sevag法脱蛋白3次可脱除97.2%的蛋白质;50%浓度的乙醇沉淀多糖得率最高,为37.6%;DEAE-52纤维素柱层析柱水沈脱的得牢最高,为46.4%;DEAE-52纤维素柱层析柱2次水洗脱获得的竹叶多糖经G-75柱层析和G-100柱层析可得到白色粉末状的中性多糖.选择水和NaCl溶液为洗脱剂的温和条件分离纯化多糖效果较好.     

茶叶多糖的纯化工艺

较系统地研究了茶叶粗多糖的初步纯化工艺。脱蛋白工艺中,三氯乙酸易降解茶多糖,Sevag法效果较好,而且以处理3次为好。比较大孔吸附树脂DM130、S8、HPD500、HZ801、AB8、NKA2和聚酰胺对茶多糖的脱色效果,结果表明聚酰胺的脱色效果和多糖保留率相对都较高,而且聚酰胺动态脱色效果比静态好。进一步脱色工艺中,DEAE-纤维素柱脱色效果好,但得率低,而且柱材料不能再生,而用Sephadex G50柱不仅效果好,柱材料还可以再生。因此,茶多糖初步纯化工艺可首先用Sevag法脱蛋白,然后用聚酰胺柱脱色,再用Sephadex G50进一步脱色,这样多糖的纯度可达到89%。     

茶多糖脱色的研究

研究了7种离子交换树脂和吸附树脂对茶多糖溶液中的色素脱除的影响,筛选出3种树脂非极性大孔吸附树脂DA201C、大孔弱碱性的阴离子交换树脂D301G和D315,通过单因素试验和正交试验对脱色条件进行优化。研究发现,采用树脂D315,在pH=45,T=55℃下,茶多糖溶液的脱色率可达到8982%,多糖保留率为6486%,蛋白质去除率9395%。茶叶中的色素可能主要以带负电荷的非极性小分子色素为主。     

灰树花胞外多糖不同脱色方法的研究

为选择适合于灰树花胞外多糖脱色的方法,分别采用活性炭、过氧化氢和大孔树脂D941对灰树花胞外多糖进行脱色。通过对脱色率和多糖保留率的比较发现,3种方法对灰树花胞外多糖均有脱色作用。活性炭法的脱色率为37.74%,多糖保留率为47.92%,过氧化氢法的脱色率为68.28%,多糖保留率为53.07%,大孔树脂D941脱色的脱色率为74.24%,多糖保留率为61.87%。活性炭法相比另2种方法的脱色率和多糖保留率均较低,选取过氧化氢法和树脂法脱色后的多糖进行α-葡萄糖苷酶的抑制试验,结果表明:树脂法脱色后的多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用明显高于过氧化氢法脱色后的多糖(P0.05)。用5种大孔树脂进行多糖脱色,选择脱色率和多糖保留率较高的D941和D101脱色后的多糖进行α-葡萄糖苷酶的抑制试验,结果表明:大孔弱碱性离子交换树脂D941和大孔吸附树脂D101适合用于灰树花胞外多糖脱色。     

优化蚕蛹多糖的提取方法及脱色工艺的研究

目的:优化蚕蛹多糖的提取工艺及对蚕蛹多糖的脱色条件的研究。方法:采用正交实验方法,以蚕蛹多糖的得率为指标,优化微波法对蚕蛹多糖的提取工艺。研究离子交换树脂(D202、D113)和大孔吸附树脂(HZ-841、HZ-806、HZ-803)对蚕蛹多糖的脱色效果。通过正交实验确定蚕蛹多糖脱色的最佳条件。结果:传统工艺提取最佳条件:90℃提取3.5h,固液比1∶25g/mL,蚕蛹多糖的得率为3.95%;微波提取蚕蛹多糖的最佳工艺条件:微波功率600W,提取时间9min,固液比1∶25g/mL,蚕蛹多糖的得率为4.49%。蚕蛹多糖大孔树脂脱色的最佳条件为HZ-803树脂、pH4.0、温度45℃。结论:优化之后的微波提取法提取蚕蛹多糖的得率有显著的提高,且工艺简便、合理、可行,在大孔树脂静态吸附最佳脱色的条件下脱色率、多糖保留率和蛋白质去除率分别为88.56%、62.15%、92.21%,在大孔树脂动态吸附最佳脱色的条件下脱色率、多糖保留率和蛋白质去除率分别为89.43%、65.58%、90.56%。     

DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌多糖的工艺优化

为了能高效快速的分离纯化桦褐孔菌子实体多糖,使用DEAE-52纤维素静态法,分别研究了静态吸附过程中多糖的样品浓度、吸附时间、吸附温度和吸附振荡转速等因素对多糖吸附量的影响及解吸过程中洗脱时间和洗脱液量对多糖解吸量的影响,确定了多糖分离纯化优化工艺条件。结果表明:多糖浓度为40 mg/mL时,在30 ℃,120 r/min转速下吸附处理90 min,此时DEAE-52纤维素对多糖吸附效果最好。而分别以12倍体积的去离子水洗脱90 min后,采用11倍体积的0.2 mol/L NaCl溶液洗脱60 min时,能达到最好的解吸效果,其中去离子水洗脱多糖浓度为0.56 mg/mL,0.2 mol/L NaCl洗脱多糖浓度为0.38 mg/mL。静态洗脱出的两种多糖组分均为分子量均一分布的多糖组分,与DEAE-52纤维素柱层析分离效果一致。因此采用DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌子实体多糖是可行的。     

酸沉淀色素快速测定普洱茶多糖的研究

普洱茶中色素的存在对茶多糖的测定影响较大,研究通过比较大孔树脂吸附、聚酰胺吸附、H_2O_2氧化和酸沉淀4种脱色方法对普洱茶多糖测定的影响,选择通过调节溶液pH使色素沉淀的方法对普洱茶汤进行脱色。比较了不同的酸与不同pH对脱色效果的影响,最终确定采用硫酸调节pH为1.5对普洱茶汤进行脱色,苯酚-硫酸法快速测定普洱茶多糖含量。方法学验证显示:该方法具有较好的精密度(RSD=1.55%)、重复性(RSD=2.81%)及稳定性(RSD=0.95%),回收率为93.23%～103.98%,具有简单快速、重复性好的特点,适用于普洱茶多糖的测定。     

灵芝多糖树脂法脱色工艺优化

利用大孔树脂对灵芝多糖进行脱色。比较10种大孔树脂在脱色方面的性能,以灵芝多糖的脱色率和多糖保留率为考察指标,结果发现D303树脂的脱色效果最佳,通过单因素试验和正交试验对D303树脂的灵芝多糖脱色各种工艺参数进行优化,得到D303树脂静态脱色的最佳参数为在样品上样质量浓度15mg/mL、pH6、脱色温度50℃、脱色时间7h条件下,灵芝多糖溶液的脱色率可达91.89%,多糖保留率75.28%;D303树脂动态脱色的最佳参数为上样流速3BV/h、每毫升树脂上样量150mg,此条件下灵芝多糖溶液的脱色率可达92.01%,多糖保留率71.85%。研究表明D303树脂适合应用于灵芝多糖的脱色工艺。     

花生非淀粉多糖的纯化技术研究

以冷榨花生粕为原料,采用高温热水提取花生多糖(PPS)。通过正交实验优化酶解法去除花生粗多糖中淀粉的最佳工艺条件,并利用DEAE-52纤维素离子交换柱层析对花生多糖进行分离纯化。结果表明:在最佳工艺条件下,耐高温α-淀粉酶和糖化酶酶解除淀粉后的花生多糖纯度明显提高;DEAE-52柱层析主要得到中性多糖PPS-1和酸性多糖PPS-2,其含量分别为17.79%和66.93%;紫外扫描结果显示PPS-1和PPS-2均不含核酸,PPS-1含有少量的蛋白。     

柑橘柠檬苦素大孔树脂分离纯化方法

以柑橘柠檬苦素为考察指标,研究大孔树脂分离纯化柠檬苦素的工艺条件。结果表明,D101大孔树脂对柑橘柠檬苦素有较好的吸附分离性能,是分离纯化柑橘柠檬苦素的适宜大孔树脂;D101大孔树脂分离纯化柑橘柠檬苦素的最佳工艺条件为：上样流速1 mL/min、上样质量浓度0.5 mg/mL、用 pH 6、80%的乙醇溶液作洗脱剂、洗脱流速2 mL/min。通过树脂回收重复使用,发现D101树脂通过再生处理后,其吸附性能未有明显降低,可以重复使用。采用上述方法得到D101大孔树脂对柠檬苦素的吸附率为88.53%,解吸率为93.47%,得率为82.75%。高效液相色谱检测可知,柠檬苦素的含量达到了92.79%。     

大孔树脂纯化山杏核壳总黄酮的工艺优化

以山杏核壳为原料,采用大孔树脂纯化山杏核壳提取液中的总黄酮,利用单因素试验和正交试验优化D101大孔树脂纯化山杏核壳总黄酮的工艺条件。结果表明：在上样溶液质量浓度0.3 mg/mL、pH 2、流速2 mL/min的条件下进行纯化实验,大孔树脂对山杏核壳总黄酮的平均吸附率为75.20%。山杏核壳总黄酮的质量分数可达51.63%,表明D101大孔树脂对山杏核壳总黄酮有较好的纯化效果,且工艺重复性和稳定性良好。     

蔗渣制备低聚木糖溶液的脱色脱盐工艺及其组分分析

利用活性炭结合阴阳离子交换树脂吸附技术研究甘蔗渣制备低聚木糖溶液的脱色脱盐工艺,并采用高效液相色谱分析精制后的低聚木糖溶液组分。结果表明：活性炭对低聚木糖溶液最佳脱色工艺为活性炭添加量质量分数1%、反应温度60 ℃、吸附时间1 h,在该条件下溶液脱色率为80.25%、还原糖保留率为98.70%。通过对7 种不同型号的树脂进行筛选,确定选用001×7和D301树脂串联、V（001×7）∶V（D301）=2∶1、流速254 mL/h时,离子交换树脂对低聚木糖脱盐效果最佳。经过活性炭和离子交换树脂共同脱色脱盐,低聚木糖溶液的最终脱色率为92.4%、脱盐率为79.2%,溶液接近中性（pH 7.4）。高效液相色谱法分析确定低聚木糖水解得到的单糖主要为木糖,还含有少量的甘露糖和葡萄糖,其中木糖占所有单糖的88.9%;低聚木糖溶液主要为木二糖和木三糖,还含有少量的木糖和木五糖。     

石榴皮多酚分离纯化及对脂肪酸合成酶抑制作用的研究

以总多酚质量分数、吸附率、解吸率为指标,进行石榴皮总多酚的分离纯化研究,并通过反相高效液相色谱（reverse phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC）法测定石榴皮多酚中的鞣花酸、安石榴苷、绿原酸、槲皮素和表儿茶素质量分数。同时研究石榴皮多酚纯化物对脂肪酸合成酶的抑制作用。结果表明：石榴皮多酚纯化的最佳条件为采用D101大孔树脂,石榴皮溶液进柱质量浓度为10 mg/mL,流速为2 BV/h,清洗用水5 BV,乙醇洗脱剂的体积分数为70%,用量为5.5 BV;纯化后石榴皮多酚质量分数为71.64%,较纯化前多酚质量分数49.31%有明显提高;纯化后石榴皮多酚中安石榴苷、鞣花酸、绿原酸、槲皮素和表儿茶素质量分数分别为46.91%、9.44%、0.53%、0.75%、0.32%。石榴皮多酚提取物对脂肪酸合成酶的半最大效应浓度（concentration for50% of maximal effect,EC50）为0.72 mg/mL,说明石榴皮多酚对脂肪酸合成酶具有较好的抑制作用。     

大孔树脂纯化桦褐孔菌多酚及其成分分析

采用大孔吸附树脂对桦褐孔菌多酚进行纯化,并采用高效液相色谱-电喷雾-质谱（high performance liquidchromatography-electrosprary ionization-mass spectrometry,HPLC-ESI-MS）技术对桦褐孔菌多酚纯化物进行分离鉴定分析。实验结果表明,D101树脂不仅静态吸附量、吸附率最大,且解吸性能优良,适合分离纯化桦褐孔菌多酚。最佳纯化工艺条件为上样质量浓度1.0 mg/mL、上样流速1.0 mL/min、洗脱液乙醇溶液体积分数70%、洗脱流速1.0 mL/min,在此条件下,其纯度由16.52%提高到了49.77%;根据HPLC-ESI-MS检测分析结果推测桦褐孔菌多酚中含有9 种物质,分别为无色花色素、花旗松素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、仙茅苷、像黄素-3-O-己糖苷、7-木糖苷儿茶酚、雪胆素乙、桔皮素、儿茶素、芦丁。     

响应面法优化酸枣仁多糖的脱色工艺

利用响应面法优化酸枣仁多糖的脱色工艺。首先通过静态吸附法选择具有较好脱色工艺的树脂类型,然后通过单因素实验结果,将上样质量浓度(mg/mL)、上样量(mL)及洗脱流速(BV/h)作为工艺优化中的主要影响因素,并以多糖脱色率和多糖保留率综合得出的归一值(OD)作为响应值,利用Box-Behnken试验设计,响应面分析优化酸枣仁多糖脱色工艺。结果表明:选用D101大孔吸附树脂,当上样质量浓度为2 mg/mL,上样量为3.5 mL,洗脱流速为4 BV/h时脱色效果最佳,此条件下多糖脱色率和多糖保留率分别为61.32%和87.05%,二者综合得出的归一值OD值为0.56(模型预测值0.55),说明该工艺可行性良好。     

吸附树脂对蛹虫草黄酮纯化工艺条件优化

以蛹虫草黄酮粗提物为研究对象,分析黄酮纯化过程中树脂种类、上样体积、淋洗液pH值、洗脱液体积分数与体积及树脂重复使用次数多种影响因素,优化吸附树脂对黄酮的分离纯化工艺。通过对AB-8、D-101、NKA-9和NKA-Ⅱ 4 种吸附树脂对蛹虫草黄酮的静态吸附、静态解吸和静态吸附动力学等特性的研究,发现AB-8吸附树脂对蛹虫草黄酮有较高的吸附速率和单位吸附量,且易于解吸,是蛹虫草黄酮分离的理想树脂。通过优化实验,确定AB-8吸附树脂对蛹虫草黄酮分离纯化的最优工艺条件为树脂装柱体积100 mL时,上样体积40.0 mL、黄酮上样量47.536 mg、淋洗和洗脱速率2 BV/h、淋洗液pH 5、洗脱液乙醇体积分数和洗脱体积分别为85%和500 mL,树脂重复使用次数为2 次,在此条件下,蛹虫草黄酮的回收率在65%以上,纯度在17%以上,具有良好的分离纯化效果。     

银杏花粉粗多糖脱色工艺研究

为优选银杏花粉粗多糖的脱色材料,以多糖保留率和脱色率为考察指标,通过比较聚酰胺、树脂、粉末活性炭和颗粒活性炭四种不同的脱色剂的脱色效果,选择一种较好的脱色剂进行单因素和正交试验。结果表明：颗粒活性炭优于其他3 种脱色剂,通过正交试验法研究脱色条件,颗粒活性炭脱色最佳工艺参数为脱色时间4h、脱色温度50℃、脱色剂用量0.15g/ml。     

自然乳酸发酵猪肉蛋白质降解与血管紧张素转化酶抑制肽的分离纯化

对猪肉发酵过程中蛋白质及其降解产物进行分析。结果表明：猪肉在发酵过程中蛋白氮含量随发酵时间延长呈下降趋势,非蛋白氮和氨态氮含量随发酵时间的延长而增加,多肽氮含量呈先升高后降低趋势,在发酵20 d时达最大值（0.227%）;发酵20 d酸肉多肽具有最强的体外血管紧张素转化酶（angiotensin I-converting enzyme,ACE）抑制活性,ACE抑制率达74.35%,IC50为2.75 mg/mL;采用超滤、D101型大孔树脂、葡聚糖凝胶对发酵20 d的酸肉多肽进行分离纯化,分离得到的F3组分有较强的ACE抑制活性,IC50为0.90 mg/mL,肽含量为86.54%,氨基酸组成分析显示水解后增加最多的氨基酸是脯氨酸（7.08 倍）和酪氨酸（3.26 倍）,谷氨酸、组氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸和丙氨酸占全部肽中氨基酸总量的49.09%,构成肽的疏水性氨基酸、芳香族氨基酸和支链氨基酸分别占39.35%、10.69%和13.65%;反相高效液相色谱显示F3组分主要由9 个峰组成,有待进一步的纯化。     

鸡血藤原花青素的纯化及活性评价

采用大孔吸附树脂对鸡血藤原花青素进行纯化,并对原花青素纯度、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除活性及α-葡萄糖苷酶抑制活性进行评价。比较3 种大孔吸附树脂对原花青素静态吸附及解吸附能力,从D101、X-5及AB-8树脂筛选出X-5型树脂用于纯化。对X-5型树脂的动态吸附及解吸附条件进行优化,获得最适条件为：上样质量浓度6.00 mg/mL,上样流速2 BV/h,上样量10 BV,洗脱流速1 BV/h,洗脱剂用量2 BV。利用不同体积分数乙醇洗脱可得到不同纯度的原花青素,其中70%乙醇纯化物原花青素纯度最高,具有最强的DPPH自由基清除活性及α-葡萄糖苷酶抑制活性。相关性分析表明原花青素可能是鸡血藤抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶的主要活性成分。