实时荧光聚合酶链式反应法检测食品中猫源性成分

根据猫线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化还原酶亚基1（ND1）基因中的保守序列设计猫特异性引物和TaqMan探针,建立食品中猫源性成分的实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法。通过实时荧光PCR反复验证,结果表明,引物和TaqMan探针对猫源性成分的特异性良好,检测灵敏度可达1 pg,适用于食品中猫源性成分的快速鉴定。通过对随机抽取的市售肉制品的检测,尚未发现掺有猫源性成分的行为。     

实时荧光聚合酶链式反应法检测食品中猪源性成分

针对猪线粒体细胞色素b基因序列设计特异的引物和探针,建立食品中猪源性成分实时荧光聚合酶链式反应检测方法,并经特异性和敏感性试验验证其可行性。结果表明：该体系可扩增猪肉DNA片段,长度为98bp,其他常见畜、禽肉成分均无法正常扩增。该体系灵敏度低至1pg,且阴性样品扩增后的Ct值限制在35循环以后。对于各模拟肉类样品中掺杂的猪源性成分,其检测限均达1%,经市售加工食品检测验证,表明所建立的猪引物探针体系具有特异性好、灵敏度高、快速、高效等优点,可用于对食品中猪源性成分的掺假鉴别检测。     

聚合酶链式反应法检测饲料中鸡源性成分

选择鸡线粒体DNA为研究对象,通过特异性引物,建立了饲料中鸡源性成分的PCR检测方法,该方法的最低检出限为0.1%。运用该方法成功检测出饲料中的鸡源性成分。该方法具有很高的特异性和灵敏性,而且简便易行,可以作为鸡源性成分鉴别检测的常规方法。     

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法 本研究以鸭线粒体基因全序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立鸭源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对鸭肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对鸭源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的鸭源性成分。     

基于实时荧光聚合酶链式反应技术定量检测肉制品中动物源性成分研究进展

实时荧光聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）技术灵敏度高、特异性强,广泛用于肉制品中动物源性成分的定性、定量分析。已有多种基于RT-PCR技术的分析策略用于实现肉制品中动物源性成分的定量检测,已报道的定量分析策略各有优势及缺陷,目前尚无可推广的国家标准方法发布。本文针对采用RT-PCR技术对肉制品中动物源性成分定量检测的分析策略及其中的关键因素（结果表示形式、靶基因、DNA提取效率、DNA降解、扩增效率、标准物质、物种基因组大小）进行综述分析,为建立最优定量分析模型提供思路,期望找到操作简便、成本较低、可推广实施的定量分析策略,实现对肉制品中动物源性成分进行准确定量检测,促进国家标准检测方法的制定。     

Taqman探针荧光聚合酶链式反应实时同步鉴定动物源性食品中猪肉、鸡肉源性成分

目的:建立一种能实时同步检测动物源性食品中猪肉源性和鸡肉源性成分的Taqman探针双重荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法,应用于动物源性食品的成分掺假快速检验。方法:分别依据猪和鸡的种间保守基因(Cytb)序列设计、合成特异性引物及不同荧光标记(FAM、HEX)的Taqman探针,建立可同步检测动物源性食品中的猪源性和鸡源性成分的Taqman探针双重荧光PCR方法。结果:所建立的Taqman探针双重荧光PCR检测方法特异性强,仅对猪、鸡成分有扩增;灵敏度高,最低检测到猪源、鸡源DNA的含量分别为0.02、0.10 ng;抗干扰性强,当DNA混样中猪源、鸡源性成分含量在2%以上水平时,所建立的混合检测体系均能对DNA混样给出正确判断。结论:所建立的混合检测体系具有高特异性、高灵敏度,能够适用于动物源性食品中猪肉、鸡肉成分的同时快速检测。     

食品中马源性成分的实时荧光PCR检测

针对马线粒体DNA细胞色素b基因设计特异性引物和探针,建立食品中马源性成分实时荧光PCR检测方法,并经特异性和灵敏度试验验证其可行性。结果表明:该体系可扩增马DNA片段,长度为127 bp,其他常见畜、禽肉成分均无法正常扩增。该体系的检测灵敏度为1.25 pg马DNA和质量分数0.001%马肉粉。经市售食品的检测验证,表明所建立的马引物探针体系具有特异性好、灵敏度高、快速、高效等优点,可用于对食品中马源性成分的掺假鉴别检测。     

利用实时荧光定量PCR法检测食品中鹌鹑源性成分

为建立基于TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在食品中的鹌鹑源性成分的定量检测方法,根据现行检验检疫标准(SN/T 2727-2010)合成引物及探针。首先对13种不同动物鲜肉组织的DNA进行鹌鹑源性成分特异性检测,然后对鹌鹑源性DNA模板原液进行梯度稀释,检测方法灵敏度,最后在加工制品中检测方法的适用性。研究结果表明:建立的方法特异性强,除鹌鹑肉外,牛、羊、猪、马、驴、狗、兔子、鸡、鸭、鸽子、火鸡、鱼12种动物鲜肉组织均无特异性扩增;方法的灵敏度较高,鹌鹑组分DNA的检出限可达10 fg/mL,灵敏度可达0.001%;方法的适用性较广,可以用于加工制品中鹌鹑源性成分的检测。     

实时荧光PCR法检测肉制品中猪源性成分

目的 建立一种高特异性和高灵敏度的有效检测猪源性成分的检测方法.方法 以猪雌激素受体基因设计合成一对特异性引物,采用液氮研磨结合试剂盒抽提的方法提取猪肉中的DNA,分别以300、30、3、0.3、0.03 ng为模板量进行梯度反应,基于荧光定量PCR技术(SYBR法)建立检测方法.结果 以Ct值作为纵坐标,以lgX(X...     

聚合酶链式反应快速检测畜肉食品中鸭源性成分

目的：建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法：以鸭细胞色素C氧化酶Ⅲ（COⅢ ）基因序列为靶位点设计引物,进行聚合酶链式反应扩增,建立鸭源性成分检测方法;以常见畜禽肉,包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种进行特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液,对鸭肉DNA进行梯度稀释,检测灵敏度。结果：该方法能够有效的对鸭源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高（0.1 μg/kg）,且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响,可以快速、准确检测畜肉食品中掺杂的鸭源性成分。     

实时荧光PCR技术快速检测食品中的牛源成分

目的:建立基于实时荧光PCR技术的食品中牛源性成分快速检测方法。方法:以牛线粒体细胞色素b为目的基因,设计特异性引物和探针,通过特异性、灵敏性实验,及模拟混合肉样和市售肉制品检测,对该体系进行验证。结果:该牛源荧光PCR检测体系具有很好的特异性及灵敏性,可检测1pg牛源DNA的存在,对于各模拟肉类样品中掺杂的牛源性成分,其检测限低至0.5%,且经市售加工食品验证具有较好的应用能力。结论:所建立的牛引物探针体系具有特异性好、灵敏度高,快速高效等优点,可用于对食品中牛源性成分的掺假鉴别检测。      

实时荧光PCR快速筛选食品中鸭源性成分

基于鸭线粒体细胞色素Cyt b基因建立了肉制品中的鸭源性成分检测的real-time PCR方法,并对模拟样本和市售样本进行了检测分析,检出限低至1%,适用于实验室的鸭源性成分的鉴定分析。      

菠萝成分的实时荧光PCR检测方法的建立

目的本文研究建立食品中菠萝成分的实时荧光PCR检测方法。方法根据菠萝rbcL基因设计菠萝物种特异性检测引物和荧光探针,对样品中的靶标基因片段进行检测,并进行物种特异性检测、灵敏度测试和实际应用检测。结果通过对供试的58种动植物材料进行检测,只有菠萝出现特异性扩增,其他物种材料无扩增;对不同浓度菠萝DNA样品和不同含量的菠萝粉样品进行灵敏度测试,该检测方法对菠萝成分的检测灵敏度分别为0.01 ng/μL菠萝DNA和0.1%菠萝粉;对市场销售的实际样品进行检测,能够满足于检测需求。结论该方法简单、灵敏、快速、准确,能应用于食品中菠萝成分检测。     

Detection of peanut using real-time polymerase chain reaction

Preliminary results are presented on a sensitive and robust assay for the identification of peanut in commercial products using real-time PCR technology. Peanut specific primers and probe, designed using the Arah 2 gene, were optimised for real-time PCR using an ABI PRISM 7700. Commercial extraction kits employing different technological strategies were assessed for the extraction of PCR quality peanut DNA template. The specificity of the primer and probe set was determined using a wide range of food items and the limit of detection and quantification calculated using dilutions of peanut DNA. The assay was used to detect spiked or trace level of peanut in commercial samples and was finally used to detect peanut in a biscuit prepared with 2 ppm of lightly roasted peanut powder.An erratum to this article can be found at     

Detection of pea in food by real-time polymerase chain reaction (PCR)

A qualitative 5′-nuclease real-time PCR-based method for the detection of pea (Pisum sativum) in food is described. The method consists of DNA isolation by chaotropic solid phase extraction and the subsequent PCR with pea-specific primers and a TaqMan fluorescent probe. The primers and the probe are oriented to the chloroplast DNA intron located between trnL and trnF exons encoding for tRNA. The analytical parameters of the method were inclusivity 100%, exclusivity 100% and the detection limit of 0.11±0.07 ng of pea DNA corresponding to 12±7 diploid pea genome copies. Using a set of model meat patés with defined pea contents, a matrix-related detection limit of 0.05% was determined and a linear calibration line was constructed. The presented analytical method was useful for qualitative detection or semiquantitative determination of pea in food products. The method was relatively fast because the analysis could be performed in one working day.     

Methods for the detection of beef and pork in foods using real-time polymerase chain reaction

Summary Two TaqMan?‐polymerase chain reaction (PCR) systems have been developed which permit the detection of even minute amounts of beef and pork in processed foods. In these methods cattle‐specific primers amplified a fragment from the phosphodiesterase gene having a length of 104 base pairs (bp), and the swine‐specific primers amplified a fragment from the ryanodin gene having a length of 108 bp. Beyond this, a third TaqMan?‐PCR system, developed on the basis of the detection of the myostatin gene, permits a reliable exclusion of false‐negative results by detecting meat from a variety of mammals or poultry in the material to be tested.     

双色实时荧光聚合酶链式反应法检测产玉米赤霉烯酮毒素的黄色镰孢菌

目的 建立双色实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法同时检测黄色镰孢菌(Fusarium culmorum)及其所产玉米赤霉烯酮毒素合成基因的方法。方法 依据EF1α基因和PKS基因,优化建立双色实时荧光PCR反应体系和扩增条件;建立粮食霉变模型,检测霉变粮食中产毒真菌,验证方法的特异性、灵敏度和重复性。结果 应用本研究设计的引物和探针,仅产玉米赤霉烯酮毒素的黄色镰孢菌EF1α和PKS基因出现特异性扩增,其余真菌扩增结果均为阴性;检出限达3.5×10²CFU/mL,重复性良好;且采用此方法对粮食霉变模型中选取的样品进行检测,可检出产玉米赤霉烯酮的黄色镰孢菌。结论 该方法可准确鉴定霉变粮食中的产玉米赤霉烯酮毒素的黄色镰孢菌,实现在真菌毒素未产生前或者产生早期,对粮食受真菌及真菌毒素污染的情况进行早期监控。     

基于Cycling探针的实时荧光聚合酶链式反应检测河鲀鱼中掺杂的横纹东方鲀成分

目的 开发基于Cycling探针实时荧光聚合酶链式反应(real-time fluorescent polymerase chain reaction,RT-PCR)用于检测河鲀鱼中横纹东方鲀(Takifugu oblongus, T. oblongus)成分。方法 基于细胞色素C氧化酶亚型I (cytochrome C oxidase subunit I, COI)基因为靶标设计RT-PCR引物及Cycling探针,开发横纹东方鲀成分检测方法,评价方法的特异性、扩增效率、灵敏度和稳定性。结果 横纹东方鲀成分与密切相关的其他8种河鲀鱼、4种其他鱼类物种DNA无交叉反应,具有很好的特异性;方法扩增效率为93.47%;方法重复18次均给出阳性报告的最小稀释点(limitofdetection6,LOD6)为14.64pg/μL(相对应的质量含量为0.1%),95%置信水平条件下检出限为34.41 pg/μL (11.59～119.05 pg/μL, LOD95%),稳定性分析(P=0.152)表明该方法可转移到其他实验室以及在常规分析中使用。结论 本研究开发的Cycling探针RT-PCR...     

PCR方法快速检测变形杆菌的研究

建立了一种快速、准确检测变形杆菌属的PCR方法.采用传统分离培养法、全自动微生物分析系统检测法和常规PCR方法对66株变形杆菌样本分离株进行鉴定.三种检测方法结果一致,但PCR方法检测时间只需5～6h,比传统分离方法节省40h左右.通过对13株非变形杆菌属菌株的特异性实验和标准菌株的灵敏度实验,进一步表明,PCR方法具有操作简便、准确可靠以及灵敏特异的特点,优于传统分离培养法和全自动微生物分析系统检测法.