高效液相色谱法测定维生素片中维生素B12的不确定度评定

目的评定高效液相色谱法测定维生素片中维生素B_(12)的不确定度。方法维生素片中维生素B_(12)经纯化水超声提取,经色谱柱分离,流动相等度洗脱,使用紫外检测器550 nm检测,外标法定量来测定维生素片中维生素B_(12)的含量。依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》,考察称量、标准溶液配制、样品和仪器重复测量等主要因素引入的不确定度,并对不确定度的各分量进行计算和合成。结果当维生素片中维生素B_(12)含量为0.408 mg/100 g时,在95%的置信区间下,其扩展不确定度为±0.0053 mg/100 g(k=2)。评定结果表明,实验过程中的不确定度主要来源于标准溶液配制、仪器重复测量。结论不确定度评定适用于高效液相色谱法快速测定维生素片中维生素B_(12)含量的不确定度分析,对检测结果准确度的提高具有指导意义。     

微生物法测定发酵食品中维生素B12含量的研究

为明确发酵食品中维生素B12的含量及分布,利用微生物法对大豆发酵食品（3种类型腐乳、韩国大酱、纳豆、豆汁）及奶酪中维生素B12的含量进行了测定。结果表明,在3种腐乳中,臭腐乳维生素B12含量最高,达到（3.57±1.08） μg/100 g,红腐乳和白腐乳分别为（0.48±0.21） μg/100 g和（0.41±0.16） μg/100 g;除腐乳外,纳豆（0.50 μg/100 g、0.20 μg/100 g）、韩国大酱（0.97 μg/100 g、0.10 μg/100 g）、豆汁（熟）（0.52 μg/100 g）的维生素B12含量均低于臭腐乳。虽然个别奶酪样品中维生素B12含量最高可达1.54 μg/100 g,但其总体维生素B12的分布及含量也均低于臭腐乳。     

固相萃取-高效液相色谱法测定保健食品中维生素B12的研究

为监管保健食品中维生素的含量 ,建立了保健食品中维生素B12 的化学分析法 ,采用固相萃取 (SPE)进行试样富集、净化 ,高效液相色谱 (HPLC)进行分离检测。方法的最小检出量为 0 3ng ,最低检出浓度 0 2mg kg ,线性范围在 0 334～ 16 7μg mL之间 ,平均回收率为 72 1%～ 131 7%。该方法具有简便、快速、可靠、容易推广等优点。     

液相色谱-串联质谱法测定咀嚼片中B12含量

目的建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定多种维生素咀嚼片(儿童型)中维生素B12的分析方法,为维生素B12及其制剂的含量测定提供参考。方法样品中的维生素B12用10 mmol/L乙酸铵超声提取,三氯甲烷沉淀蛋白质,以10 mmol/L乙酸铵-甲醇作为流动相经SUPELCO DiscoveryHS C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm)梯度洗脱分离,流速0.6 m L/min,采用LC-MS/MS在正离子模式下检测,外标法定量。结果 LC-MS/MS法在30~150 ng/m L范围内,维生素B12的浓度和峰面积的线性良好,相关系数r=0.993,精密度为2.4%,在不同的添加水平下,方法的回收率85.9%~95.7%,检出限为5 ng/g。结论液相色谱-串联质谱法简单快速、灵敏度高、准确性强,适用于保健食品中维生素B12的分析。     

微生物法测定肠内营养粉剂中微量维生素 B12的含量

目的建立微生物法测定肠内营养粉剂中微量维生素B_(12)的含量。方法以莱士曼氏乳酸杆菌为实验菌,在测定用培养基中供给除维生素B_(12)以外的所有营养成分,(36±1)℃培养19~20 h,采用比浊法测定。结果维生素B_(12)在0.001~0.010 ng/mL浓度范围内线性关系良好,肠内营养粉剂中维生素B_(12)的含量为2.9μg/100 g。结论该方法检测结果准确、可靠,适用于肠内营养粉剂中微量维生素B_(12)的含量测定。     

偏重亚硫酸钠对微生物法测定维生素B12含量的影响

摘 要: 目的 探究偏重亚硫酸钠对微生物法测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12(VB12)含量的影响。方法 通过在标准工作液和样品待测液中添加质量浓度梯度为0、0.0025、0.005、0.02、0.08和0.16 mg/mL偏重亚硫酸钠, 测定不同处理组实验样品中VB12含量值并对质控样品进行质控结果分析, 研究偏重亚硫酸钠对莱士曼氏乳杆菌生长的促进作用及其对原生VB12提取的影响。结果 在标准溶液中添加质量浓度为0~0.16 mg/mL的偏重亚硫酸钠都可以促进莱士曼氏乳杆菌的生长。偏重亚硫酸钠能促进样品中原生VB12的提取。偏重亚硫酸钠终浓度在0~0.16 mg/mL的范围内都不会抑制莱士曼氏乳杆菌的生长, 同时在0~0.05 mg/mL的范围内, 随偏重亚硫酸钠质量浓度增加, 原生VB12的提取会成比例增加。结论 偏重亚硫酸钠在0~0.16 mg/mL浓度范围内可以促进莱士曼氏乳杆菌的生长, 提高食品原生VB12的提取率, 进而增加检测结果的稳定性和准确度。     

高效液相色谱法检测婴幼儿配方食品中维生素B12的含量

目的 建立一种高效液相色谱快速检测婴幼儿配方食品中维生素B12的方法。方法 选择C18柱（250×4.6mm,4.6 μm）作为色谱柱,流动相为水-甲醇（75:25）,流速0.5 mL/min等度洗脱,进样量35 μL,柱温40℃,波长361nm,样品经超声提取15 min,然后在8000 r/min下冷冻离心10 min,离心结束后取上清液过0.22 μm滤膜,上机测试。结果 显示维生素B12标准品在浓度0.05~2.0 μg/mL范围内线性良好;相关系数r=0.9998;平均回收率91.3 %;检出限2 ng/mL。结论 该条件下的高效液相色谱可测定婴幼儿配方食品中维生素B12含量,具有重复性好、简单、快速、结果准确等优点。因此该方法可应用于婴幼儿配方食品中维生素B12含量的检测。     

微孔板法检测婴幼儿配方乳粉中维生素B12的含量

目的 建立用微孔板检测婴幼儿配方乳粉中维生素B12的方法。方法 基于微生物原理的检测方法, 缩小样品的培养体积。样品经提取后, 分装到96孔细胞培养板中, 在培养基中加入0.05%的菌悬液, 混匀后分配到含有样品和标准品的微孔中, 培养后直接用酶标仪测定吸光度值。结果 本方法标准曲线相关系数0.9987, 加标回收实验回收率在92.7%~98.7%之间, 重复性实验相对标准偏差在1.03%~1.73%之间, 6种不同含量的样品同时用GB 5413.14-2010方法和本方法检测维生素B12, 检测结果无显著性差异。结论 该方法快速, 操作简单, 稳定性高, 检测成本低, 可大批量样品同时检测, 适合测定婴幼儿配方乳粉中维生素B12的含量。     

高效液相色谱法快速测定多维片中的维生素B12

目的建立高效液相色谱法快速测定多种维生素片中的维牛素B_(12)含量。方法样品用水作为溶剂经超声波提取,以0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=2.5)和乙腈作为流动相采用高效液相色谱法测定,以外标法定量。结果本研究将检测波长改为546 nm,可减少多维片中其他组分的干扰。维生素B_(12)在0.5~10 mg/L范围内线性关系良好(r=0.9999),在1、2和5 mg/L的添加水平下测得回收率分别为98.1%、97.2%和99.0%(n=6),相对标准偏差分别为3.6%、2.0%和4.6%,方法检出限为0.2 mg/L,定量限为0.5 mg/L。结论该方法快速、简便、准确且干扰少,可适合于多种维生素片中维生素B_(12)的定量分析。     

固相萃取-高效液相色谱法测定饼干中的维生素B12

目的建立固相萃取-高效液相色谱法测定饼干中维生素B12的分析方法。方法样品中的维生素B12用0.1mol/L乙酸钠溶液(pH=4.5)提取,二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物(N-vinylpyrrolidonecopolymer)HLB固相萃取柱净化, 10%的乙腈水溶液定容后用高效液相色谱仪测定。结果维生素B12含量在0.5～10 mg/L线性关系良好,线性相关系数r=0.9999,检出限为0.1 mg/kg。在精密度实验中,相对标准偏差为0.74%～3.75%,在0.3、0.8、1.7mg/kg的添加水平下,加标回收率为93.9%～99.4%。结论该方法准确、高效,适合饼干中维生素B12的测定。     

HPLC法有效测定发酵液中维生素B_(12)的含量

建立了一种更简便、快速、准确的测定谢氏丙酸杆菌发酵液中脱氧腺苷钴胺素(维生素B12)含量的检测方法,使用高效液相色谱直接检测.利用Apollo C18(5μm,4.6mm×25cm) 色谱柱;以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH3.0)作流动相;柱温25℃;检测波长260nm;流速1.0mL/min;恒速洗脱.在所选定的液相色谱条件下,脱氧腺苷钴胺素和杂质分离良好,维生素B12在20μg/mL80μg/mL范围内线性良好,线性方程相关系数为0.99995,平均回收率为99.92%,相对标准偏差RSD为0.12%.此方法重复性好,样品预处理方法简单,分析速度快,7min内即可实现目的产物和杂质的完全分离.适用于整个发酵过程条件的优化及发酵产物提取过程的监控.     

Production of vitamin B12 in genetically engineered Propionibacterium freudenreichii

Since the chemical synthesis of vitamin B12 requires more than 70 steps, the production of vitamin B12 has been achieved by microorganism fermentation with additional brief chemical modifications. In an effort to increase the productivity of vitamin B12, we tried to express 10 genes belonging to the hem, cob and cbi gene families involved in the synthesis of vitamin B12 in Propionibacterium freudenreichii, which is a known producer of vitamin B12. In a recombinant P. freudenreichii clone that harbored the expression vector containing a cobA, cbiLF, or cbiEGH, we obtained an increase in vitamin B12 production of 1.7-, 1.9-, and 1.5-fold higher, respectively, than that in the microorganism without any cloned genes in the expression vector pPK705. The cobU and cobS genes caused a slight increase in the production of vitamin B12. Furthermore, we achieved multigene expression in P. freudenreichii. In a recombinant P. freudenreichii clone that harbored an exogenous gene, hemA, from Rhodobacter sphaeroides and endogenous hemB and cobA genes, we successfully achieved the production of about 1.7 mg/l vitamin B12, 2.2-fold higher than that produced by P. freudenreichii harboring pPK705.     

利用甘蔗糖蜜生产维生素B12发酵条件

以甘蔗糖蜜为碳源发酵生产维生素B12,通过单因素试验确定的培养条件为接种量20％,种龄48h,装液量75／300ml三角瓶,培养基初始pH值6．8,30％静止发酵,周期为96h,维生素B12的产量为2．86mg／g。     

试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉及功能饮料中维生素B12的研究

目的建立试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉及功能饮料中维生素B_(12)的含量。方法以Tris缓冲液稀释样品,加入冻干的莱士曼氏乳酸杆菌测试菌球,采用Costar 3599细胞培养板培养,使用酶标仪测定结果。采用本法同时检测了47批次婴幼儿乳粉和12批次功能饮料中维生素B_(12)的含量。结果本试剂盒方法回收率为89.9~110.2%,定量检测限为0.01 ng/g(mL),日间精密度为9.0%,日内精密度为5.8%。采用试剂盒方法与GB5413.14-2010试管法同时检测47批次婴幼儿乳粉中维生素B_(12)的含量,检测结果无显著性差异,乳粉的合格率为80.9%。检测功能性饮料12批次,合格率为33.3%。结论该方法操作简单,灵敏度高,重现性好,可用于测定婴幼儿乳粉及功能性饮料中维生素B_(12)的含量。     

高效液相检测婴儿配方乳粉中的维雏生素B12

目的:建立婴儿配方乳粉中维生素B12的高效液相测定方法.方法:采用BDS HYPERSIL C18柱(150mm×4.6mm,5μm),以水-乙腈为流动相;流速0.25mL/min,检测波长361am.结果:维生素B12的检出限为20ng/mL,线性范围在0.0506～3.23841μg/mL,回收率在92.23%～96.68%,相对标准偏差(RSD)为2.04%.结论:本方法快捷准确,适用于婴儿配方乳粉中添加的维生素B.2的测定.     

高效液相色谱法测定婴儿奶粉中维生素B12

建立了奶粉中维生素B12的反相高效液相色谱的测定方法,奶粉经去蛋白质-糖分-超声提取-富集浓缩超滤后进高效液相色谱仪,采用C18色谱柱,水-乙腈流动相体系,梯度洗脱能够快速有效地分离奶粉中的维生素B12.线性范围为0.010μg/mL～10μg/mL,相关系数为0.9998,检出限为0.1 μg/100g,加标回收率为78.8％～84.0％.该方法适用于实际样品的测定,速度快、成本低,结果令人满意.     

Milk fat as related to vitamin B12 status.

Two experiments examined whether vitamin B12 status of liver affects milk fat percentage or yield. In Experiment 1 B12 concentration in liver, measured at approximately 8 and 15 wk postpartum in 35 cows, was not correlated significantly with milk fat percentage or yield. In Experiment 2 twenty-two cows were fed a ratio similar to one used to depress milk fat percentage. The B12 status of 12 of these cows was enhanced by intramuscular injection of vitamin B12 while the other 10 served as controls. During wk 2 to 8 of lactation, milk fat percentages were almost identical for the two groups. A difference in milk fat yield in favor of the B12-treated group resulted from a difference in milk yield. The data do not support a recent hypothesis of the metabolic cause of milk fat depression.     

微生物法测定婴幼儿乳粉中维生素B12含量的不确定度评定

目的建立微生物法测定婴幼儿乳粉中维生素B₁₂含量的不确定评定方法。方法依据JJF1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》及GB 5413.14—2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B₁₂的测定》分析微生物法测定婴幼儿乳粉中维生素B₁₂含量过程中产生的各测量不确定度分量,计算测量结果的合成标准不确定度和扩展不确定度。结果当样品中维生素B₁₂含量为3.97μg/100 g时,其扩展不确定度为0.53μg/100 g(k=2)。结论标准溶液配制和标准曲线拟合计算待测溶液含量产生的不确定度对检测结果影响较大。