应用鲁米诺化学发光法测定脂质过氧化

建立了一个测定脂质过氧化（Lipid peroxidation,LPO）的化学发光体系，测试某些抗氧化剂清除脂自由基的活性。取含有不饱和脂肪酸的脂质加入到测量管中，再加入鲁米诺及双重蒸馏水，放入预恒温箱中37℃预温育0.5h，取出并加入启动剂AAPH｛2,2'-axobis(2-amidinopropane)dihydrochloride｝，立即放入预先温度设至38－39℃的生化发光测量仪中，用T－2程序测定每6s钏的脉冲数（CP6s），连续测定，观察化学发光（chemiluminescence,CL）的动力学变化和是否产生脂质过氧化，随后加入各类抗氧化剂，根据实际需要，选其某一次的CL强度作为评判指标。建立了一个应用鲁米诺化学发光法测定脂质过氧化的体系并对比了多种抗氧化剂的活性。结果发现，Vit.C、茶多酚（EGCG）、还原型谷胱甘肽（GSH）皆有抑制L，即抗脂质过氧化的作用。该方法是一种快速、灵敏、简便的测定脂质过氧化及筛选抗氧化剂的新方法。     

SIN-1产生ONOO-及其被抗氧化剂清除的化学发光研究

采用3-morpholino-sydnonimine(SIN-1)作为过氧亚硝基(ONOO-)的发生器,以鲁米诺作为光的扩增剂,建立一个检测ONOO-及筛选清除剂的发光体系.在探索pH、温度、SIN-1浓度对ONOO-发光强度影响的基础上,确定了ONOO--鲁米诺化学发光体系,测定了水溶性维生素E(Trolox)、茶多酚、槲皮素对ONOO-的清除作用.建成SIN-1为0.30mg/mL、鲁米诺为1×10-4mol@L-1、pH7.4、温度为30℃的发光体系,测得3种清除剂皆有清除ONOO-的作用,清除效果槲皮素＞茶多酚＞Trolox.SIN-1-鲁米诺化学发光体系测定ONOO-的产生和清除是一个快速、简便、灵敏且较稳定的新技术.     

一种新的产生和检测过氧亚硝基的化学发光体系

研究产生和消除过氧亚硝基（Peroxynitrite anion,ONOO^-）是自由基生物学和医学的一项紧迫任务。为此,建立了一种新的产生和检测ONOO^-的化学发光体系,并评估了检测的最佳条件。该方法为：10mmol／L羟胺与0．5mol,LNaOH、1mmol／L、乙二胺四乙酸二钠（Disodium ethylenediamine tetraacetate,EDTA）反应产生ONOO^-,随后用MnO2粉末过滤反应液以除去H2O2,然后在测量管内加入100μL抗氧化剂和860μL0．Imol／L的碳酸盐缓冲液（pH10）,再加入40μL过滤后的ONOO^-反应液、混匀、延迟10s,测10s化学发光强度。以抗氧化剂茶多酚、抗坏血酸、芦丁和黄芩苷作清除ONOO^-的实验。结果表明,本体系是一种灵敏价廉、可靠易行的筛选ONOO^-清除剂的新方法。     

前列腺抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

应用鲁米诺-过氧化氢发光体系建立定量测定血清前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法。该方法测量范围为1.5～80μg/L,灵敏度为0.12μg/L,批内变异＜5%,批间变异＜15%。回收率为83.8%～118.7%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.999。本方法与免疫放射分析方法的相关方程y=1.07x+0.68,相关系数r=0.97。     

二甲亚砜和维生素E对照剂小鼠脂质过氧化的影响

二甲亚砜（ＤＭＳＯ）和维生素Ｅ（Ｖｉｔ Ｅ）都是自由基清除剂，可抑制或阻断由自由基引发的脂质过氧化反应，减轻组织损伤和细胞的破坏。本研究应用荧光分光光度法，通过测定小鼠血清中脂质过氧化代谢产物丙二醛（ＭＤＡ）的含量来研究不同浓度的ＤＭＳＯ和维生素Ｅ对γ射线照射后小鼠的保护作用，以及两者联合应用的效果。结果表明：ＤＭＳＯ的保护作用优于Ｖｉｔ Ｅ，最大脂质过氧化抑制率（４．０Ｇｙ）分别为５５．１％和５     

线粒体Mn-SOD参与预适应大鼠心肌抗梗死保护作用的实验研究

为定量去甲肾上腺素（NE）诱导的延迟相预适应抗心肌梗死保护强度，研究了预适应机体抗氧化剂量酶活性变化与预适应保护的关系。将50只大鼠分为NE组、I／R组和正常组。3.1μmol/kgNE腹腔内注射诱发预适应，24h后开胸结扎左冠状动脉主干（LGA）、造成LCA支配区缺血30min，再灌注120min复制预适应模型，用伊文斯蓝，TTC色分别显示左室未缺血区，梗死区，危险区，数码相机与实体显微镜结合拍摄左室切面，Metamorph Imaging System软件定量各组左室梗死区／危险区面积，放免法和黄嘌呤氧化法分别测定血清Cu^2 、胞浆Cu^2 ，Zn^2 -SOD含量、活性及线性体Mn-SOD活性。结果显示，1）预适应保护可使心肌梗死面积减少33．4％；2）预适应心肌线粒体Mn-SOD活性增高；3）血清及心肌细胞胞浆Cu^2 ，Zn2＋-SOD含量，活性预适应组与非预适应组差别不显著，实验研究启示，NE可诱导大鼠产生延迟相心肌预适应保护。其机制可能是通过使心肌线粒体Mn-SOD活性增高，减少自由基损伤，产生预适应保护。     

二甲亚砜和维生素E对照射小鼠脂质过氧化的影响

二甲亚砜（ＤＭＳＯ）和维生素Ｅ（ＶｉｔＥ）都是自由基清除剂，可抑制或阻断由自由基引发的脂质过氧化反应，减轻组织损伤和细胞的破坏。本研究应用荧光分光光度法，通过测定小鼠血清中脂质过氧化代谢产物丙二醛（ＭＤＡ）的含量来研究不同浓度的ＤＭＳＯ和维生素Ｅ对γ射线照射后小鼠的保护作用，以及两者联合应用的效果。结果表明：ＤＭＳＯ的保护作用优于ＶｉｔＥ，最大脂质过氧化抑制率（４．０Ｇｙ）分别为５５．１％和５３．６％，两者的最佳用量分别为１０ｍｇ／ｇ体重和０．２５ｍｇ／ｇ体重，联合用药的作用效果（最大脂质过氧化抑制率为６０．１％）大于单独使用时的效果。     

几种制剂对辐射所致脂质过氧化作用的影响

本文报道了γ射线照射对小鼠肝、脾、肾中脂质过氧化物（ＬＰ０）含量的影响，以及照后服用知母宁、单宁酸和鲨烯等制剂的抗脂质过氧化作用。制剂均灌胃给药，ＬＰＯ用改良的ＴＢＡ分光光度法测定。结果表明，γ射线整体照射小鼠后７２ｈ，其组织中ＬＰＯ含量增高，在０－４Ｇｙ范围内辐射剂量与ＬＰＯ含量呈线性关系；三种制剂均有降低小鼠肝、脾、肾中ＬＰＯ的作用，其中知母宁（０．３５ｍｇ／ｄ）的抗脂质过氧化作用显著优于单宁酸（１５ｍｇ／ｄ）和鲨烯（０．６ｍｇ／ｇ）。     

一种新型酶促化学发光增强液的发光性能及其在免疫分析中的应用

在辣根过氧化物酶／鲁米诺／增强剂／过氧化氢(HRP／luminol／enhancer／H2O2)增强化学发光体系中，加入一系列辅助试剂，获得了一种灵敏度高、发光持续稳定、可长期贮存的新型酶促化学发光增强液。该增强液灵敏度为2．4amol／孔，发光半衰期为40min，工作液在室温可稳定存放1个月，在37℃下可稳定存放14d。在此基础上，在TSH-BAS ECLEIA和AFP ECLEIA上进行了应用。TSH-BAS ECLEIA测量范围为0．17～35mIU／L．信噪比大于5；分析灵敏度为0．04mIU／L，功能灵敏度为0．06mIU／L；批内变异系数为2．96％～5．05％，批间变异系数为4．01％～7．56％；回收率为101％～119％；稀释实验相关方程为y=44．650x 0.352,r=0.352,r=0.996；与Bayer ACS：180系统进行方法学比较，相关方程为y=0．889x=0．351，r=0．984。AFP ECLEIA测量范围为5～2000ng／mL，信噪比大于4。动力学实验表明，加入发光液之后15min测量，结果准确可靠。     

富勒醇对贻贝棘尾虫的辐射防护机制

为进一步了解富勒醇对贻贝棘尾虫γ辐射防护的机制,在先前工作基础上测定了0．10mg mL^-1的富勒醇存在下,剂量为100-2000 Gy范围内贻贝棘尾虫辐照后第5d的存活率,并用光学和透射电子显微镜观察了辐照后贻贝棘尾虫形态和超微结构的变化,测定了与自由基相关的酶的活性（超氧化物歧化酶Superoxide dismutase,SOD和过氧化氢酶Catalase,CAT）和脂质过氧化产物（丙二醛Malondialdehyde,MDA和脂褐素Lipotusion,LIP）。结果表明,当剂量为100-1500 Gy时,富勒醇能明显提高贻贝棘尾虫γ辐照后的存活率,当剂量达到2000 Gy时,富勒醇对存活率无明显影响,表明富勒醇对贻贝棘尾虫γ辐射防护作用不仅和它浓度有关,而且与γ辐射剂量相关。显微镜观察结果在细胞和亚细胞层次揭示了贻贝棘尾虫辐射损伤的结构特征,并给出了富勒醇防护作用的附加证据。未加富勒醇辐照组中SOD和CAT的活性低于对照组（P〈0．01）,加富勒醇辐照组中SOD和CAT的活性明显高于未加富勒醇辐照组和对照组（P〈0．01,P〈0．01）,而加富勒醇辐照组中MDA和LIP的含量却显著低于对照组（P〈0．01,P〈0．05）和辐照组（P〈0．01）,由此推断富勒醇主要通过清除自由基,刺激SOD和CAT的活性,同时减少细胞膜上的脂质过氧化反应,达到对贻贝棘尾虫的辐射防护作用。     

环糊精对紫外线损伤保护作用的实验研究

探讨谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物-环糊精(2-Se-CD)对中波紫外线损伤的防护作用。以小鼠成纤维细胞(NIH3T3)制备紫外线损伤模型,采用荧光分光光度法测定DNA裂解率,改良硫代巴比妥酸荧光法测定细胞脂质过氧化作用,流式细胞术测定H2O2。1.5kJm-2紫外线(UVB)照射后24h可引起NIH3T3细胞DNA裂解率、脂质过氧化、H2O2产生增高,2-Se-CD可使前述变化发生不同程度逆转,即与紫外线损伤模型组相比,DNA裂解率、脂质过氧化、H2O2产生降低(p<0.05—0.01)。结果提示,本实验室合成的GPX模拟物2-Se-CD具有防护紫外线损伤的作用。     

新型低温CuO／AC脱硫剂制备——煅烧温度对脱硫活性的影响

首次将炭载型CuO/AC用于烟气脱硫，在最经济的烟气脱硫温度窗口（120－250℃）显示出高的脱硫活性，考查了煅烧温度和煅烧后脱硫剂的预氧化对硫脱活性的影响，并对脱硫剂进行了TPD和EXAFS表征。结果表明：经250℃煅烧的CuO/AC脱硫剂具有最高的脱硫活性。200℃煅烧，前驱体Cu(NO3）2未完全分解：高于250℃煅烧，活民生组分CuO被载体C部分还原为金属Cu微晶，从而发生烧结，聚集，以上均导致脱硫剂活性的下降，尽管不同温度煅烧的CuO/AC表现出大的脱硫活性差异，但吸硫后均生成同一反应产物CuSO4,250℃煅烧的CuO/AC脱硫剂Cu以CuO和Cu2O形态存在，其中的Cu2O在200℃很容易氧化成CuO。     

液闪探测PMN Ly化学发光及其细胞外间质成分改变与肝纤维…

矸硬化患者血中多形核白细胞，淋巴细胞化学发光的活性氧自由基和细胞外间质变化和早期肝纤维化形成关系密切，结果表明，化学发光是氧自由基生成释放的过程，肝纤维化细胞外间受氧自由基作 成过脂质氧化物损伤细胞膜和组织，而透明质酸和胶原等受降解致使细胞外间质沉聚，这可能是成为肝纤维化早期阶段。     

抗氧化剂减轻辐射脂质过氧化损伤的实验研究

自由基在辐射损伤中起着重要作用。应用抗氧化剂可在一定程度上清除自由基,从而减轻辐射损伤。该研究应用荧光分光光度法测定了照后小鼠组织和血清中脂质过氧化代谢产物MDA的含量变化,以此来研究其剂量效应关系,以及抗氧化剂Vit E和DMSO对照后小鼠的保护作用,探讨抗氧化剂在临床方面的应用。结果表明:(1)3.0Gy照后12～24小时,MDA含量最高,然后逐渐下降;(2)MDA随照射剂量的增大而增高,即MDA可很好地反映机体损伤情况;(3)Vit E和DMSO都能明显地降低照后小鼠体内MDA的水平,DMSO的作用大于Vit E,两者的最佳用量分别为:10mg/g体重和0.25mg/g体重;(4)DMSO和Vit E联合应用,其防护效果优于单独使用的效果。     

双羟基脲对Pu（Ⅳ）的还原及其在U／Pu分离中的应用

用分光光度法实验考察了硝酸体系中双羟基脲（DHU）对Pu（Ⅳ）的还原。结果表明：当往Pu（Ⅳ）的硝酸溶液中加入DHU后，DHU能快速还原Pu（Ⅳ），Pu（Ⅳ）在476nm处的吸收峰在3s内消失，同时在506和601nm处出现新的吸收峰。     

12C6+照射对小鼠睾丸组织脂质过氧化、SOD活性及细胞周期的影响

为评估重离子照射的生殖毒性,探讨其损伤的可能机制,用0、0.5、1、2或3Gy剂量12C6 离子对性成熟昆明雄鼠下腹部进行局部照射,6h后处死小鼠,取睾丸组织,用流式细胞术检测睾丸细胞凋亡率和细胞周期,用化学试剂盒检测组织中超氧化物岐化酶(SOD)的活性以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平.结果表明,与对照组(0Gy)相比,低剂量照射(0.5Gy)组中睾丸组织SOD活性增加(P>0.05),但SOD活力随剂量增加而下降,在2Gy和3Gy照射组中呈显著抑制作用(P<0.05);睾丸组织中MDA含量随剂量增加,2Gy和3Gy照射组呈显著性差异(P<0.05).流式细胞术检测结果显示,1～3Gy 12C6 照射可导致睾丸组织中单倍体、二倍体及四倍体细胞数量显著减少(p<0.01),凋亡率明显增加(p<0.01)以及G2/M期阻滞(p<0.01).提示12C6 照射可能通过自由基损伤途径,诱发细胞凋亡和细胞周期异常,从而造成睾丸组织损伤,生殖能力下降.本实验结果为抗氧化剂和自由基清除剂用于临床重离子治疗中对性腺的防护提供了理论依据.     

预辐射聚丙烯纤维接枝N-异丙基丙烯酰胺及其对Fe(Ⅱ)离子的吸附

采用预辐射接枝法，将N-异丙基丙烯酰胺（N-Isopropylacryamide，NIPAAm）接枝于聚丙烯纤维。研究了不同条件下接枝纤维对亚铁离子的吸附和解吸附情况。结果表明，在较低温度（5℃）及pH≈10条件下，接枝纤维对金属离子（Fe^2＋）具有良好的吸附性能；而在较高温度（50℃）下pH≈3时，被吸附的Fe^2＋几乎能被较完全解脱下来。     

碳离子全身辐照对小鼠血清及肝脏中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量和脑组织中还原性谷胱甘肽浓度的影响

用12C6 离子束对小鼠进行吸收剂量分别为0.05、0.1、0.3、0.5、0.75、1、1.5、2Gy的一次性全身照射,5d后测定血清及肝脏中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(Maleic dialdehyde,MDA)含量,以及脑组织中还原性谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的浓度.结果显示,吸收剂量小于0.75 Gy小鼠的血清及肝脏中SOD活性高于对照组,大于0.75 Gy则低于对照组;吸收剂量小于0.3 Gy小鼠的血清及肝脏中MDA含量小于对照组,大于0.3 Gy则大于对照组;吸收剂量小于0.5 Gy小鼠的脑组织GSH浓度大于对照组,大于0.5 Gy则小于对照组.低剂量的重离子全身辐照对小鼠的抗氧化系统有一定的激活作用,随着照射剂量的增大,抗氧化酶活性明显降低,脂质过氧化水平增高.     

α2M对辐射引起细胞自由基变化的影响

采用６０Ｃｏγ射线照射人皮肤成纤维细胞，并在照射前、后给予不同剂量的甲２巨球蛋白（α２Ｍ），用细胞色素Ｃ法、ＴＢＡ法及邻苯二酚自氧化法分别测定细胞超氧阴离子自由基（Ｏ２）释放、脂质过氧化（ＬＰＯ）水平及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力。发现细胞受照后Ｏ２释放和ＬＰＯ水平显著增高（ｐ＜０，０１）；Ｏ２释放与照射剂量呈正相关（ｒ＝０．９６６，Ｐ＜０．０１），ＳＯＤ活力显著下降（Ｐ＜０．０１），且与照射剂量呈负相关（γ＝０．９６６，Ｐ＜０．０１）。照射后给予α２Ｍ能显著抑制Ｏ２释放（Ｐ＜０．０１）、降低ＬＰＯ水平。     

高盐份强放废液中痕量Am的测定

建立了一个可用于高盐份强放复杂体系的准确测定痕量Ａｍ的放射化学分析方法，对影响测定准确度的几个主要因素进行了研究。实验结果表明，全程Ａｍ的回收率高（８４％），重复性好，对裂变元素净化好。