拮抗细菌对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用研究

从发生烟草花叶病毒(TMV)的烟田耕作层土样中分离到对TMV有拮抗作用的菌株By33和By88。生物测定试验表明,By33和By88的无菌发酵液对TMV的体外抑制作用分别为81.81%和83.29%,涂抹菌液24 h后接种TMV,仍有73.01%和66.98%的预防作用。硫酸铵沉淀无菌发酵液、PBS透析获得拮抗蛋白;拮抗蛋白对TMV的体外抑制作用分别为85.38%和87.47%,并且在274.00 nm处有明显的蛋白吸收峰,为典型的蛋白质吸收光谱。此外,通过叶圆片法和透析法生物测定表明,抗病毒蛋白与TMV粒子结合作用为不可逆,有抑制TMV在烟株体内复制的作用。     

拮抗TMV细菌发酵产物对TMV粒体形态的影响

通过对拮抗细菌发酵产物抑制TMV活性的测定及体外混合对TMV粒体形态的影响研究,表明:1)拮抗细菌by33、by88发酵产生的活性蛋白对TMV的体外钝化作用分别为85.38%和87.47%;2)电镜下观察到活性蛋白能打破TMV粒体的规则排列,与TMV粒子不可逆的结合,从而降低侵染力。      

树舌MP-01菌株提取液抑制TMV生物活性研究

本实验从病毒体外钝化、抑制病毒初侵染、抑制病毒增殖和诱导抗性4个方面测定了树舌MP-01菌株提取液对烟草花叶病毒(TMV)生物活性的影响。结果表明,MP-01菌株提取液对TMV体外钝化效果显著;对TMV初侵染、增殖有一定的抑制作用,且能诱导烟草产生一定的抗病性。     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

菌克毒克防治烟草普通花叶病毒(TMV)及对病程相关蛋白的诱导作用研究

１９９８～１９９９年在室内进行了菌克毒克防治ＴＭＶ药效试验。室内结果表明,使用菌克毒克１５０倍液、２００倍液、２５０倍液预防烟草花叶病毒的防效依次为８２．２％、７０％、６１．１％。抗病毒剂菌克毒克注射于珊西烟（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ｖａｒ．Ｘａｎｔｈｉ ｎｃ）下部叶片,上部叶片接种ＴＭＶ,结果菌克毒克诱导上部未注射叶片对ＴＭＶ侵染的抗性对侵染的抑制率为６５．５％～８２．６％,对菌克毒克处理叶片及上部叶未处理叶片细胞间液中的病程相关蛋白进行电泳分析,结果表明,菌克毒克可系统地诱导珊西烟产生７种健康植株所设有的ＰＲ蛋白,ＰＲ蛋白的诱导与抗病性、耐病性的诱导相一致。     

实时荧光RT-PCR检测By33蛋白抑制TMV复制的作用

供试烟草NC89接种TMV后6 h,接种叶悬浮于By33无菌活性蛋白、无菌水中48 h,实时荧光RT-PCR检测病毒RNA复制量,结果显示:悬浮于By33蛋白50、100倍液的处理,病毒RNA复制量分别为0.302434和0.411478,低于悬浮于无菌水处理(0.438963).悬浮叶研磨接种三生烟,悬浮于By33蛋白50、100倍液处理与悬浮于无菌水处理比,枯斑抑制率分别为96.97和97.92%,与PCR榆测结果一致.     

两株根际促生细菌对TMV的生防作用研究

烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）是危害烟草的主要病毒之一,其寄主范围广、侵染力和抗逆性强,尚无有效的抗病毒药剂。利用植物根际促生细菌（PGPR）对寄主的促生以及对病毒的钝化作用进行病毒病早期预防,是控制TMV的有效途径。本文对筛选到的两株PGPR菌株Sa和Sk进行了菌株鉴定及促生和防病作用研究。结果表明:Sa为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、Sk为假单胞菌属（Pseudomonas sp.）。在霍格兰氏营养液中添加Sa、Sk的发酵上清液,能显著促进烟苗的根系发育和茎叶生长;“半叶法”试验结果显示Sa、Sk的发酵上清液能在体外钝化TMV,并且Sa的粗蛋白溶液、去蛋白上清、蛋白失活后的粗蛋白溶液对TMV的抑制效果分别为85.2%、83.1%、36.2%,说明Sa的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要包括蛋白和非蛋白两类;Sk的粗蛋白溶液、去蛋白上清抑制TMV的效果分别为88.0%、0%,说明Sk的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要为蛋白类。利用TMV30B侵染性克隆,观察到Sa、Sk发酵上清液能显著抑制病毒的初侵染。室内栽培烟株喷施Sa、Sk发酵上清后,对TMV的防效分别为27.71%和18.55%。芽孢杆菌Sa生防效果好于Sk,具备抗病毒剂的开发潜力。      

烟草赤星病拮抗细菌Ata28菌株的控病及促生效应

从烟草叶片中分离获得的对烟草赤星病菌[Alternaria alternata(Fries) Keissler]有明显抑制作用的枯草芽孢杆菌Ata28菌株,经温室控病试验,能显著降低赤星病的发病率;将其用于烟草种子的细菌化处理,以无菌土盆栽的方式测试其对烟草幼苗的促生效果,分别测定其地上部鲜重,最大叶长、宽,真叶数。结果表明,拮抗细菌Ata28对烟草幼苗有明显促生效应。控病、促生试验的Ata28菌液处理与对照间差异均达到显著水平,表明拮抗细菌Ata28兼具防病作用和促生效应。     

A_2菌产蛋白水解酶的分离纯化

利用A2菌种液态摇瓶发酵产蛋白水解酶,后采用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤层析、DEAE离子交换层析对粗酶液进行分离纯化后,蛋白酶比活力达到521.47U/mL,纯化倍数是粗酶液的3.52倍,回收率为8.71%。通过SDS-PAGE凝胶电泳得到单一条带,并测得其相对分子质量约为30kDa。     

拮抗细菌活性蛋白诱导烟草对CMV的抗性研究

从烟田耕作层土样中分离到对CMV有拮抗作用的细菌菌株B6,通过离子交换层析和凝胶过滤层析初步确定其活性物质是分子质量大小为40．6kD的蛋白质。活性蛋白诱导后,对烟草叶片的病毒含量、过氧化物酶（POD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）和多酚氧化酶（PPO）的活性变化进行研究。结果表明,拮抗细菌活性蛋白诱导后烟草叶片内CMV含量明显降低,随着诱导天数的增加病毒的含量呈由多到少再增多的变化趋势,POD,PAL和PPO等细胞防御酶的活性增强。     

抗烟草花叶病毒(TMV)生防菌的鉴定及其发酵条件优化

为有效防治烟草普通花叶病毒病(TMV),从土壤中分离筛选到1株抗TMV的细菌菌株Z5,经形态学、生理生化和分子生物学鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),该菌培养液对TMV体外抑制率达到96.40％,田间小区试验对烟草普通花叶病毒病的防效为50.43％.通过单因素法优化Z5发酵体系,最适培养基...     

烟草疫霉拮抗菌筛选、鉴定及发酵条件研究

从毕节8个县市种植烟草的田地采集土壤样品122份,筛选出5 株对烟草疫霉有较强拮抗作用的菌株。其中一菌株抑菌活性最强且拮抗效果稳定,综合形态学、生理生化及分子生物学实验可以将其鉴定为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus ）,记为1205。该菌株现已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO.M2012382。经过对1205菌株的液体摇瓶发酵条件研究,结果表明,1205菌株摇瓶振荡的最适培养条件：培养基为NYBD,接种量为1%,初始pH值为6.0,培养温度为28℃,装液量为20mL/100mL,摇床转速为160r/min,培养时间为28h。     

致病性尖孢镰刀拮抗菌的筛选与鉴定

该研究从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）拮抗效果最好的拮抗菌株,采用形态观 察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对其进行鉴定,并绘制该菌株生长曲线、考察其培养液中的蛋白类及脂肽类物质的抑菌效 果。 结果表明,从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌拮抗效果最好的拮抗菌株,编号为P9,其抑菌圈直径达到20 mm 左右。 经鉴定,拮抗菌P9为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;生长曲线结果表明,拮抗菌P9在第9小时生长速率达到最大;抑菌物 质提取实验表明,拮抗菌P9能分泌具有抑菌作用的蛋白类物质及脂肽类物质。     

乳酸菌生物学特性与其拮抗空肠弯曲杆菌在小鼠肠道定植能力的分析

采用3周龄C57BL/6小鼠建立了空肠弯曲杆菌感染模型,评价了8株在体外具有抑制空肠弯曲杆菌生长能力的乳酸菌在体内拮抗空肠弯曲杆菌定植的能力,同时对该8株菌生长速率、产酸能力、生物膜形成能力、黏附能力等生物学特性进行了测定,通过主成分分析对8株乳酸菌生物学特性的评价以及皮尔森相关性系数对乳酸菌生物学特性及其在体内拮抗空肠弯曲杆菌定植能力相关性的分析,发现8株乳酸菌种间生物学特性差异明显大于种内生物学特性差异,且乳酸菌在小鼠体内拮抗空肠弯曲杆菌定植的能力与其细胞黏附能力呈正相关。具有最高黏附指数的植物乳杆菌N8、N9可有效清除模型小鼠肠道内的空肠弯曲杆菌,对保护人体免受空肠弯曲杆菌感染具有潜在的应用价值,同时也为具有拮抗致病菌能力的益生菌的筛选提供了理论依据。     

水霉拮抗菌HJ010拮抗物质代谢分析

水霉病是鱼体因水霉菌寄生所感染的疾病,发生广泛,危害较大,目前尚无很好的防治方法。以从河鲈肌肉中分离获得的一株水霉拮抗菌HJ010为实验材料,探讨了水霉拮抗菌的拮抗机制,初步定性了拮抗活性物质,为水霉病的生物防治奠定基础。研究结果显示,HJ010对水霉菌的菌落形成和孢子萌发都有明显抑制效应,其拮抗活性不稳定,可以随着传代丧失拮抗活性,但经水霉菌丝诱导可使丧失的拮抗活性恢复;该菌的拮抗机制是在水霉病原菌的诱导下,将代谢拮抗物质分泌到胞外发挥拮抗效应。拮抗活性物质对低pH、高温和胰蛋白酶敏感,初步定性为小分子肽类。     

烟草普通花叶病毒抗血清的吸附纯化及应用

为了检测烟草普通花叶病毒(TMV),使用提纯病毒免疫小白鼠,制备TMV抗血清,对抗血清进行了吸附纯化,并建立了基于自制TMV抗血清的ELISA检测体系.蛋白电泳研究结果表明,提取的TMV纯度和浓度都很高;经过烟草总蛋白吸附纯化后,有效去除了非特异性反应;通过效价测定,确定TMV抗血清的效价高达1:40960;正交连续稀释法确定的ELISA检测最佳试剂浓度为:酶标二抗稀释度1:20000,TMV抗血清稀释度1:2000,病叶样品的稀释度为1:20.     

烟草青枯病颉颃细菌的筛选及其防病效果研究

从安徽、浙江等地的烟草、蕃茄和辣椒等茄科作物根标、根围土壤和病、健植株组织中,分离纯化到168个细菌菌株,通过室内异步培养法和平板扩散法,筛选出17个对烟草青枯病菌具有一定颉颃作用的菌株,其中,AQB-46和AQB-33两菌株抑菌能力最强,抑菌圈直径分别为33.7mm和30.6mm。盆栽防病结果表明,这2个菌株对青枯病的防治效果在接种青枯菌后的30d内一直维持在54.2%~64.7%。菌株AQB-62室内抑菌试验效果明显低于AQB-46和AQB-33,但盆栽防病的效果在接种后的20d内也一直维持在49.9%~53.0%的水平。接种前3d喷施颉颃菌的各处理,其防病效果远高于接种后3d喷施颉颃菌的各处理,前者防效最高为64.7%,而后者最高仅为15.0%,说明颉颃菌对烟草青枯病的防治主要表现为预防。此外,颉颃菌的防病作用主要表现为减轻发病程度,而对发病率没有影响。颉颃菌除具有直接的抑制青枯菌定殖、繁衍、扩展外,有的菌株如AQB-62还具有一定的诱导抗性作用。AQB-46,AQB-33和AQB-62等3个菌株可望研制成生物农药,使之更有效地防治烟草青枯病。      

扩展青霉拮抗菌的选育及抑菌机制初探

为选育有效抑制扩展青霉（Penicillium expansum）的拮抗菌,并初步探讨其抑菌机制。从苹果表面分离到拮抗扩展青霉的菌株BA-16,经形态学、生理生化及16S rRNA基因序列分析,对该菌进行鉴定,并采用低能N+注入技术对其进行诱变选育。采用双酶反应体系检测野生株和突变株对扩展青霉分泌磷脂酶的抑制效果以检测突变效果并探究其抑菌机制。经鉴定,BA-16-8该菌被鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。低能N+注入技术诱变选育出的突变株BA-16-8抑菌性能显著提高且遗传性能稳定。磷脂酶活性结果显示,相对于野生株,突变株代谢产物可显著抑制病原菌所分泌的磷脂酶A的活性,且其抑制效果随浓度的增高而增强,故推测拮抗菌可能通过该机制起到抑制扩展青霉的作用。本研究对于苹果采后青霉病的生物防治具有良好应用开发前景。      

桃果实褐腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其拮抗活性

以桃褐腐菌(Monilinia fructicola)为靶菌,采用稀释分离法和平板对峙法从桃园土壤中筛选出对病原菌有较强拮抗作用的菌株12a和14b。通过离体和活体实验对拮抗菌抑菌活性进行研究,经菌株形态、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析进行菌株鉴定。结果表明:菌株12a和14b分别鉴定为死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)和高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis),其无菌发酵滤液和挥发性代谢产物对桃褐腐菌的生长有显著的抑制作用,其中12a挥发性代谢产物对其菌丝生长的抑菌效果更为显著(p<0.05)。两株拮抗菌的菌液浸泡和熏蒸桃果实,延缓了桃褐腐病发病时间,有效地控制了病斑的扩展。