逆流超声辅助酶解法制备大米ACE抑制肽

研究逆流超声预处理大米蛋白对其碱性蛋白酶酶解制备血管紧张素转换酶(Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE)抑制肽的影响。首先从米渣中提取大米蛋白,以ACE抑制率为主要指标,水解度为辅助指标,运用单因素逐级优化法对酶解反应的底物浓度、时间、温度、加酶量和pH进行参数优化,在此基础上筛选逆流超声模式的最佳超声参数。结果表明最佳酶解参数为底物浓度30 g/L、加酶量(E/S)7.5%、温度50 ℃、pH8.5和酶解时间60 min,此时酶解产物ACE抑制率为45.59%,水解度为21.49%。最佳超声参数为超声频率20 kHz、功率密度170 W/L、时间12.5 min。此时酶解液ACE抑制率达72.24%,水解度为21.64%,相较于未超声组ACE抑制率提高了57.42%,相较于传统超声组,ACE抑制率提高了11.36%。结果表明逆流超声波辅助酶解法能有效提高酶解效率、减少能耗、促进ACE抑制肽制备。     

超声预处理大米蛋白对其酶解产物ACEI活性的影响

以酶解产物ACEI活性为指标筛选最佳超声预处理模式,在最佳的超声波模式条件下采取单因素逐级优化方法优化超声预处理工艺参数。结果表明:采取20/28/40 kHz同步模式,在超声时间7.5 min、温度40℃、工作间歇比6∶3 (s/s)和功率密度66.7 W/L条件下,大米蛋白酶解所得产物ACEI活性最高,为48.39%,与对照组相比提高了35.20%。说明发散型三频超声对大米蛋白进行预处理能有效的提高酶解产物的ACEI活性。     

高压处理-酶解大米蛋白抗氧化肽的制备及其分子量分布

本文以酶解物的抗氧化活性为指标,通过正交试验方法优化了3种高压(0.1 MPa、300 MPa、500 MPa)预处理大米蛋白的酶解条件,用高效液相色谱分析了主要酶解产物的分子量分布。结果表明,三种预处理蛋白在各自优化条件下制备的酶解物在1.0mg/mL时的最大还原力分别为0.125、0.149、0.158。常压对照组(即0.1MPa)中15-10 ku、10-1 ku和 1 ku以下等三段分子量组分所占比例分别为26.6%、46.9%、26.5%;300MPa组中的含量分别为16.5%、39.3%和44.2%;500MPa组中的含量分别为11.8%、33.1%和55.1%;可见,酶解物还原力大小与其分子量的分布之间有明显的关联性。     

超声辅助酶解海带蛋白制备抗氧化肽及其活性研究

海带是一种食药两用的海生褐藻植物,营养丰富,其蛋白质含量高、氨基酸种类齐全、比例适当,是酶法制备生物活性肽的理想蛋白原料。实验以海带蛋白为原料,以DPPH自由基清除率为评价指标,采用单因素试验和响应面试验优化超声辅助酶解海带蛋白制备抗氧化肽工艺,探讨酶种类,超声时间、酶底比、酶解温度、pH和超声功率对制备抗氧化肽的影响,并采用Box-Behnken试验设计的响应面（response surface methodology,RSM）分析方法优化工艺。结果表明,中性蛋白酶为最佳酶,酶解海带蛋白制备抗氧化肽的最佳工艺条件为酶底比2.3%、超声时间91min、超声功率240、酶解温度44℃,所得的DPPH自由基清除率为84.25%。对所得抗氧化肽DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、还原能力、羟基自由基清除率测定,结果表明其具有较好的抗氧化活性。本实验为酶解海带蛋白制备抗氧化肽工艺优化及海带蛋白抗氧化肽在抗氧化保健食品中的开发应用提供了依据。     

高压酶解大米蛋白抗氧化活性及其分子质量分布

以大米蛋白为原料,经不同压力(0.1、300、500 MPa)处理后,用Alcalase酶水解.以酶解物的还原力为指标,通过正交试验方法分别优化了3种压力条件下的酶解条件;用高效液相色谱分析了主要酶解产物的分子质量分布.结果表明,3种预处理蛋白在各自优化条件下制备的酶解物在1.0 mg/mL时的最大还原力分别为0.125、0.149、0.158.常压(即0.1MPa)对照组中10～15 ku、1～10 ku和1 ku以下等3段分子质量组分所占比例分别为26.6％、46.9％、26.5％;300 MPa和500 MPa组中的含量分别依次为16.5％、39.3％、44.2％和11.8％、33.1％、55.1％;可见,酶解物还原力大小与其分子质量的分布之间有一定的关联性.     

大米蛋白的木瓜酶酶解及其水解物的抗氧化活性

以大米蛋白为原料,研究其酶解工艺及其水解物的抗氧化活性.选取底物浓度、加酶量、酶解pH、酶解温度为考察因素,进行了酶解工艺的单因素及正交试验.试验结果表明,底物浓度([S])10%,加酶量([E] /[S])5%,酶解pH 6.0,酶解温度60℃,酶解时间90 min为最佳酶解参数,在此条件下大米蛋白水解物的固形物含量为25.6mg/mL,对DPPH自由基清除率为54.5%.抗氧化试验显示,大米蛋白水解物具有一定的清除DPPH自由基和羟自由基能力,其IC50分别为1.738和0.238mg/mL.大米蛋白水解物同样也具有较强的还原能力.由此得出,大米蛋白水解物是一种天然的抗氧化肽.     

超声辅助酶解制备红豆多肽及其抗氧化性的研究

采用超声辅助酶解法制备红豆多肽,并对其抗氧化性进行研究。在单因素实验基础上,采用响应面分析法对超声辅助酶解制备红豆多肽工艺进行优化,确定最优超声辅助酶解工艺为:碱性蛋白酶添加量3.5%,超声功率346 W,反应温度60℃,反应时间92 min,反应p H8.4。在最优工艺条件下,红豆多肽得率为85.84%。体系的抗氧化能力随着多肽浓度的增加而增强,当多肽达到一定浓度后,多肽浓度不再是抗氧化能力的主要影响因素。      

碱性蛋白酶Alcalase酶解大米蛋白制备小分子肽的动力学研究

以大米蛋白为原料,用碱性蛋白酶Alcalase2.4 L酶解大米蛋白制备小分子多肽。采用单因素试验方法优化酶解条件,考察酶解过程中pH、加酶量、底物浓度和温度酶解初速度的影响,并建立了酶解动力学方程。研究了最优酶解条件下酶解过程中酶解产物的分子量分布状态。结果表明,Alcalase2.4 L酶解大米蛋白的最优pH 8.5、温度65℃、酶底比0.096 AU/g(底物),在酶解过程中存在产物抑制,在研究的底物浓度范围内(90 g/kg)不存在底物抑制。主要动力学参数为:Km为5.76(g·min)/mmol,Vmax为0.67mmol/(kg·min),k2为0.28 mmol/(AU·min)。酶解动力学方程为:1/V0=56.29/[S0][E0]+1/0.28[E0]。酶解至3 h时水解度达到16%,酶解产物的分子量在264~584 u之间的组分达到94%,酶解3 h后酶解产物的分子量分布基本保持不变。本研究结果为制备大米蛋白小分子活性肽奠定基础。     

亚硫酸钠辅助酶解蛋壳膜制备抗氧化多肽的工艺

禽蛋壳膜蛋白含量丰富,蛋白质约占蛋壳膜干重的90%,然而蛋壳膜在食品工业中通常被作为废弃物丢弃,造成了资源浪费和环境污染,因此高效地利用蛋壳膜资源是极为必要的。本研究使用亚硫酸钠辅助酶解法制备禽蛋壳膜抗氧化肽,研究了酶种类、酶添加量、亚硫酸钠浓度和酶解时间对禽蛋壳膜多肽抗氧化性和水解度的影响。结果表明,亚硫酸钠辅助下碱性蛋白酶酶解禽蛋壳膜,效果优于其他四种酶;亚硫酸钠辅助碱性蛋白酶酶解禽蛋壳膜的最佳条件是:碱性蛋白酶添加量12 U/mg,亚硫酸钠浓度40 mM,时间4 h。在最优工艺条件下,禽蛋壳膜多肽的总抗氧化能力为245.88μg/m L,水解度为8.58%,表明禽蛋壳膜的亚硫酸钠辅助碱性蛋白酶酶解产物具有很好的体外抗氧化活性。SDS-PAGE表明禽蛋壳膜多肽的分子量主要在3.3~14.4 ku之间。     

桑叶蛋白活性多肽的酶解制备

该研究旨在探讨蛋白血管紧张素转换酶（angiotensin I-convening enzyme,ACE）抑制肽及抗氧化肽的酶解制备方法。选取3种蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶及芽孢杆菌蛋白酶）酶解制备桑叶功能活性多肽,以ACE抑制活性为主要指标并辅以水解度（degree of hydrolysis,DH）评价ACE抑制活性,以DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）为指标评价其抗氧化性能。运用单因素逐级优化法对酶解反应的酶解pH值、底物浓度、加酶量、酶解温度和酶解时间进行参数优化。结果表明,3种蛋白酶的酶解产物均具有ACE抑制活性,中性蛋白酶酶解产物效果最佳,酶解工艺条件为底物浓度20 g/L、加酶量7.5%、酶解时间50 min、酶解温度55℃、pH7.0时,酶解产物的ACE抑制活性为81.23%,DH为21.41%。在不同蛋白酶优化条件下测定3种酶解产物的抗氧化能力,中性蛋白酶DPPH自由基清除率和总抗氧化能力均为最高,分别为80.702%和4.717 mmol/g。     

超声预处理辅助酶解玉米胚芽ACE抑制肽的研究

旨在研究不同工作模式的超声预处理对玉米胚芽蛋白酶解制备血管紧张素转换酶(Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE)抑制肽的影响。以蛋白转化率和高活性肽占比为指标,利用聚能逆流双频、发散三频和对振双频的超声设备,对玉米胚芽粕进行预处理,得到最优的超声预处理模式;采用单因素逐级优化法来确定最佳超声预处理参数;在最优超声处理条件下,优化酶解反应条件。结果表明分子量在300~1000 Da的多肽ACE抑制活性最高,IC₅₀值为0.78 mg/mL;最优的超声模式为20/40 kHz交替双频,最佳超声预处理参数为功率密度100 W/L、底物浓度为8%、超声时间20 min、超声温度30 ℃,酶解条件为加酶量2000 U/g蛋白、酶解时间2.5 h。在最优条件下,蛋白转化率为85.00%,相比于未超声组的73.01%提高了16.42%;高活性肽占比为29.63%,相比于未超声组的26.00%提高了13.96%。因此,逆流双频超声波辅助酶解法能有效提高蛋白转化率和产物ACE抑制活性,有利于ACE抑制肽的制备。     

酶解对大米理化性质的影响

糙米营养全面但口感差,精米口感细腻但营养流失严重,为使大米营养全面和口感细腻,以抛光处理的东北珍珠米为原料,采用α-淀粉酶作用于整粒大米表面,探讨酶解对大米表面结构的影响。研究结果表明：大米质量25.0 g、酶添加量1.4%、酶解温度40 ℃、酶解时间120 min 时,大米淀粉的水解度为4.54%;酶解后的大米表面有明显的疏松孔洞结构,吸水指数提高0.069 倍,硬度减小,延展性增大,晶型无变化,但结晶度降低。热分解的同步热分析试验结果显示,酶解前后大米的降解温度无明显变化,但酶解后大米的焓值增高,表明其淀粉的结晶区更加稳定。对酶解处理的大米进行富硒性能研究,发现在硒添加量3.0 μg,富硒时间30 min,温度为30 ℃,酶解处理的大米富硒量0.26 μg/g。该研究为精制大米负载功能性成分提供新理念,可全面提高大米的附加值,具有非常好的应用前景。     

大米蛋白的提取及抗氧化肽的制备工艺

本文以DPPH清除率为指标,研究不同蛋白酶、酶解温度、酶解时间和加酶量等因素对大米蛋白酶解产物的抗氧化活性影响,并采用L9(34)正交试验优化其酶解工艺。研究结果表明:中性蛋白酶是制备大米蛋白抗氧化肽的最佳水解用酶,其最佳酶解工艺为:酶解时间20 min,酶解温度50℃,加酶量4000 U/g。在此条件下,大米蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率可达80.17%。     

高固形物浓度对酵母酶解及其产物抗氧化性的影响

高固形物浓度的酶解是近年来国际食品探究的热点之一。本文利用木瓜蛋白酶水解不同固形物浓度的活性面包酵母,并对酶解液的氨氮、总氮、可溶固形物含量、还原糖、总糖、渗透压、抗氧化活性以及褐变程度进行了检测,探究高固形物浓度对酵母酶解及其产物抗氧化性的影响。结果表明,随着固形物浓度的提高,酵母酶解液中的氨氮、总氮,可溶性固形含量、还原糖、总糖、渗透压随之提高,提高固形物浓度有利于提高酵母酶解效率。通过对酵母酶解液抗氧化活性的测定发现,固形物浓度为30%时,酶解液具有较高的DPPH和羟自由基清除活性,酶解13 h时,其IC50值分别为0.83±0.09 mg/mL和21.53±1.18 mg/mL;酶解21 h时,其IC50值分别为1.01±0.13 mg/mL和23.17±1.33 mg/mL。在高浓度固形物酶解液中,适当添加SDS有助于降低其褐变程度。     

酵母蛋白肽酶解制备工艺研究

利用碱性蛋白酶-Alcalase酶解酵母细胞制备酵母蛋白肽,系统研究了酶用量、pH、反应温度、反应时间等因素对短肽得率的影响,建立了总氮及氨基态氮得率与各影响因素之间的回归模型,确定了Alcalase酶解制备酵母蛋白肤的最适工艺条件为:pH8.7,水解温度50.8℃,加酶量为0.17%(以酵母量计),水解时间24h.在此条件作用下,酶解产物的总氮得率为50.17%.氨基态氮得率为32.80%.     

基于超声预处理的大米降血压多肽的制备及其功能评价

采用酶法制备大米降血压肽。本文研究大米降血压肽制备中底物蛋白的超声预处理、酶解产物的超滤提取纯化、大米降血压肽的抗消化道酶降解及原发性高血压大鼠(SHR)一次性灌胃试验等。试验结果表明,最优超声预处理的参数为每升处理液施加超声功率250 W、超声时间10 min、工作间歇比1:2、循环转速30 r/s。经过超声预处理,酶解产物对ACE的抑制率由未经超声预处理的69.8%提高到92.8%。5 kDa为最佳的超滤提取纯化截流分子质量。经过超滤,滤液的IC50值随大米多肽分子质量的降低而降至1.71 mg/mL。大米降血压多肽具有良好的抗消化道酶降解能力,对SHR大鼠具有明显的降血压效果。     

超声辅助复合酶酶解制备大豆多肽工艺的优化

以大豆分离蛋白为原料,采用超声辅助复合酶酶解制备大豆多肽,以单因素实验为基础,选择复合酶添加量、酶解时间、酶解温度以及酶解p H为自变量,大豆多肽得率为响应值,采用响应面分析法研究各自变量及其交互作用对大豆多肽得率的影响,并对大豆多肽的相对分子质量分布进行测定。结果表明,影响大豆多肽得率的各因素强弱顺序为:酶解温度复合酶添加量酶解时间酶解p H;超声辅助复合酶酶解制备大豆多肽的最佳工艺条件为超声功率180 W、超声时间10 min、超声温度35℃、碱性蛋白酶与中性蛋白酶质量比3∶1、复合酶添加量2.04%、酶解时间4.0 h、酶解温度59℃、酶解p H 8.0,在此条件下大豆多肽得率为63.27%,相对分子质量大部分集中在1 000以下。     

超声辅助酶解制备黑莓清汁工艺及其协同效应

针对黑莓果汁加工过程中存在的出汁率低、品质不稳定等问题,运用响应面法研究超声波辅助复合酶（果胶酶＋果浆酶）制备黑莓清汁的优化工艺条件,并对超声波辅助酶解提高黑莓果汁品质的协同效应进行解析。结果显示,超声辅助酶解制备黑莓清汁的最佳工艺条件为超声功率200 W、加酶量0.3%、酶解时间1.5 h、酶解温度45 ℃,在此优化条件下制备的黑莓清汁具有较高的出汁率（80.89%）和透光率（68.21%）,对其品质和色泽稳定性分析得出,其花色苷含量和总酚含量明显高于单一酶解组,且色泽呈红色,在贮藏过程中具有较好的稳定性。采用扫描电子显微镜对处理后原料进行观察,结果表明,超声与酶产生协同效应,加速原料组织结构的破坏,提高黑莓清汁的制备效率。     

蛋清酶解多肽的制备及其清除自由基活性

为探索蛋清酶解多肽体外清除自由基活性,开发功能性蛋制品,本文采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶,通过对比实验、单因素实验和正交实验确定了蛋清酶解多肽的制备方法,采用体外清除自由基对比实验研究了蛋清酶解多肽的体外清除自由基活性。结果表明:蛋清蛋白浓度调整至4 g/100 mL(m/V),用18000 U/g蛋白的碱性蛋白酶在pH9.0于60 ℃水解7 h,制备的蛋清多肽清除DPPH自由基能力最强;用碱性蛋白酶制备的蛋清多肽在体外对超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基清除能力和Fe³⁺还原能力均明显优于蛋清,但远不及V_C。证明蛋清经碱性蛋白酶控制水解能明显增强其清除自由基能力,提高其保健性能。     

小麦蛋白肽的酶解制备方法及研究进展

小麦蛋白肽具有多种生物活性,具备很好的保健功能,且具有成本低的优势,因而在功能性食品领域、保健品领域市场前景广阔。其制备方法已由原本制备效果较差的酸水解逐渐转向酶解。综述国内外几种酶解小麦蛋白制备多肽的方法及研究进展。