香菇多糖脱蛋白工艺及其抗氧化活性研究

采用低共溶剂(deep eutectic solvents,DES)-K2HPO4双水相体系(aqueous two-phase system,ATPS)将香菇多糖水提液中的多糖与蛋白质进行分离萃取,蛋白质富集于DES相,糖类富集于K2HPO4相。综合考察了DES物质的量比、K2HPO4浓度、DES的加入量以及萃取时间对蛋白质脱除率的影响,通过正交试验进一步优化试验条件,得出蛋白质脱除的最优工艺参数:以氯化胆碱/丙三醇(物质的量之比1∶2,2.6 mL)、K2HPO4(0.6 g/mL,3 mL)构建双水相体系,加入2 mL香菇多糖水提液,萃取30 min后,香菇多糖蛋白质的脱除率高达90.8%,香菇多糖回收率为98.0%。在此条件下得到的香菇多糖具有清除DPPH自由基的能力,说明脱蛋白后的香菇多糖具有一定的抗氧化性。     

PEG/(NH4)2SO4双水相体系萃取杏鲍菇多糖

采用PEG/(NH4)2SO4双水相体系萃取杏鲍菇多糖,研究了PEG的分子量、硫酸铵的浓度及PEG的浓度三个因素对杏鲍菇多糖在双水相系统中的分配系数和收率的影响,结果表明：当PEG4000浓度为21.33%,硫酸铵浓度为14%时,多糖的分配系数可达1.9529~2.0152,收率可达60.58~62.82,从而得出一种萃取杏鲍菇多糖的方法。     

响应面法优化植物乳杆菌素的双水相萃取条件

采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系研究发酵上清中植物乳杆菌素的萃取条件.通过单因素试验考察不同PEG分子质量、PEG浓度、硫酸铵浓度、离子强度等对细菌素纯化系数及萃取率的影响.在此基础上,用响应面法对系统进行优化.试验结果表明,植物乳杆菌素萃取的最佳条件为PEG4000-硫酸铵体系,PEG 18%,硫酸铵20%、氯化钠1%,萃取pH 3.75.     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取葡萄糖氧化酶的研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/(NH4)2SO4]双水相体系对葡萄糖氧化酶的萃取进行了研究。以双水相系统的上、下相的酶活、比酶活、相比R、分配系数K和萃取率Y等为参数,探讨了PEG质量分数、不同PEG浓度和不同硫酸铵浓度对葡萄糖氧化酶在PEG/(NH4)2SO4双水相系统中分配行为的影响。实验结果表明:葡萄糖氧化酶在25%的PEG4000和10%硫酸铵的双水相体系中可获得较高的萃取率达81.11%,分配系数为0.134。     

响应面法优化黑豆酯酶的双水相萃取工艺

采用双水相萃取技术对黑豆酯酶进行分离纯化,优化黑豆酯酶在聚乙二醇4000/硫酸铵双水相体系中的分配行为。首先,制作PEG4000/(NH4)2SO4双水相相图;然后考察PEG4000质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取体系p H值3个因素对黑豆酯酶萃取率的影响;最后采用Box-Behnken中心组合试验设计对黑豆酯酶双水相萃取工艺进行优化,确定最佳工艺条件为:PEG4000质量分数为28%、萃取体系p H为7.30、(NH4)2SO4质量分数为17%。此条件下黑豆酯酶萃取率为(93.95±0.24)%,黑豆酯酶酶比活力达到7.893 U/mg。与粗酶液纯度相比,黑豆酯酶双水相萃取工艺提纯倍数为7.363倍。该结果为黑豆酯酶的提纯和进行有机磷农药残留的检测提供科学依据。     

响应面法优化黑胡萝卜红色素双水相萃取工艺

采用聚乙二醇（PEG）/硫酸铵双水相体系萃取纯化黑胡萝中的花青素。通过单因素实验考察了硫酸铵、PEG6000、粗提液的质量分数对花青素选择性系数和萃取率的影响,并以花青素的萃取率为响应值,结合响应面试验优化萃取工艺。结果表明,各因素对萃取率的影响程度由大到小依次为硫酸铵质量分数>粗提液质量分数>PEG6000质量分数。以双水相体系的总质量为基准,实验最佳萃取条件为:硫酸铵质量分数为20.0%、粗提液质量分数为12.0%、PEG6000质量分数为14.0%,黑胡萝卜红色素的平均萃取率为94.17%。此萃取方法得到的黑胡萝卜红色素具有一定的抗氧化活性,对DPPH自由基清除能力的IC₅₀值为30.51 mg/L。     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取α-葡聚糖酶

采用聚乙二醇-硫酸铵(PEG-(NH4)2SO4)双水相体系对α-葡聚糖酶进行萃取,以两相比、酶活、蛋白浓度、比活力以及萃取率为参数进行比较,探讨了使用不同分子量的PEG、不同的PEG浓度以及不同(NH4)2SO4浓度下对酶分配行为的影响。实验结果表明,α-葡聚糖酶在质量分数13%的PEG4000以及13%的(NH4)2SO4的双水相系统中,可获得较高的比活力2364.97 U/mg以及萃取率99.94%。     

双水相体系萃取纯化紫甘蓝色素

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相体系萃取纯化紫甘蓝中的花青素。通过单因素实验优化了硫酸铵、PEG、粗提液的质量分数和体系的pH,通过正交实验确定各因素对花青素选择性系数的影响程度,粗提液的质量分数 pH硫酸铵的质量分数 PEG的质量分数。实验最佳提取条件为:粗提液的质量分数为12%,硫酸铵质量分数为20%,pH为3.5,PEG的质量分数为15%,花青素的选择性系数为750.26。     

双水相体系萃取超氧化物歧化酶(SOD)的研究

采用PEG/硫酸铵双水相体系对啤酒酵母中SOD进行萃取研究。以酶的纯化倍数和回收率为指标,探讨了无机盐种类、PEG分子量、PEG浓度、硫酸铵浓度以及pH对SOD萃取效果的影响。结果表明:PEG4000浓度为14%,硫酸铵浓度为24%,pH 7.5时,下相中SOD回收率达73.4%,纯化倍数达1.76。回收率较PEG/磷酸钾盐缓冲液体系高了37.97%,纯化倍数较PEG/磷酸钾盐缓冲液体系高了21.38%。     

响应面优化葡萄籽中原花青素的双水相萃取条件

采用聚乙二醇-硫酸铵双水相体系分离纯化葡萄籽中原花青素,确定其双水相体系组成为20%PEG4000-10%(NH4)2SO4,并通过单因素实验和响应面分析实验探讨粗提液质量分数、pH和NaCl质量分数对萃取效果的影响。最佳萃取条件为:粗提液质量分数17.2%、pH4.8、NaCl质量分数0.7%。在此条件下,葡萄籽原花青素主要分布在上相,原花青素的萃取率可达96.66%。     

PEG（6000）-Na2HPO4双水相体系在鹰嘴豆蛋白萃取中的应用

对PEG(6000)-Na2HPO4双水相萃取鹰嘴豆蛋白进行研究,考察PEG的浓度、Na2HPO4的量、恒温超声时间、pH、温度等因素对蛋白质萃取率的影响。结果表明:该双水相对鹰嘴豆蛋白的最佳萃取条件:PEG(6000)浓度为10%,PEG与Na2HPO4的质量比为1∶1.5p,H为7.5,温度40℃,在此条件下蛋白质萃取率可达到63.46%。     

苦苣皂甙的PEG/MgSO_4双水相萃取优化及其抗氧化评价

对PEG(聚乙二醇)/Mg SO4双水相萃取苦苣皂甙进行研究,比较双水相萃取的皂甙与其它常用提取方法提取的皂甙的抗氧化性。选取PEG4000浓度、Mg SO4浓度、p H、温度为独立变量,苦苣皂甙回收率为指标,采用Box-benhnken响应面法优化,得到回归模型。结果表明:各变量的影响顺序为PEG4000浓度p H萃取温度Mg SO4浓度;由回归分析得到最佳工艺条件是:PEG4000质量分数21%,Mg SO4质量分数16%,萃取温度51℃,p H 6,此时苦苣皂甙回收率为95.12%。双水相萃取所得皂甙与其它方法所得皂甙的提取率相差不大。苦苣皂甙抗氧化活性强弱与皂甙浓度呈量效关系,且与提取方法有关;双水相萃取所得皂甙抗氧化活性最强。     

香菇柄多酚负压提取、纯化及体外活性评价

为提高香菇柄利用率，通过单因素和正交试验对香菇柄中多酚负压提取工艺进行优化，考察不同溶剂萃取香菇柄多酚粗提物组分的抗氧化活性，评价纯化对多酚降血糖活性的影响。结果表明，香菇柄多酚最佳负压提取工艺条件为真空度0.098 MPa、乙醇浓度40%、料液比1∶35(g/mL)，浸提温度50℃，浸提时间50 min，此条件下香菇柄多酚提取量为3.07 mg/g。香菇柄多酚粗提物经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取后，正丁醇萃取组分多酚得率最高7.61%，乙酸乙酯萃取组分多酚含量最高64.17%，经乙酸乙酯萃取后单位质量浓度多酚对自由基的清除能力显著提升。体外降血糖结果显示，纯化前后香菇柄多酚对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶均具有剂量依赖性抑制活性，表明香菇柄多酚具有一定的降血糖活性，纯化后多酚可显著提高对两种酶的抑制活性，表明纯化可提高多酚的降血糖活性。     

PEG/(NH4)2SO4双水相相平衡数据的关联及木瓜蛋白酶在该体系中分配模型的建立

为了研究木瓜蛋白酶在双水相中的分配行为,用浊点法测定了聚乙二醇(2000、4000、6000)/硫酸铵双水相体系在298.15K下的双节线和液液相平衡数据,采用Merchuk方程、Othmer-Tobisa方程和Bancroft方程对双节线数据、液液相平衡数据进行了关联,并建立了木瓜蛋白酶在PEG/(NH4)2SO4双水相体系中的分配模型。通过相关系数考察双水相各组分浓度与分配系数的相关度,得到分配系数的对数与上下相组分的浓度差相关度较高,提出了木瓜蛋白酶分配系数与双水相成相组分浓度差的经验关系式,木瓜蛋白酶分配系数的计算值与实验值之间的相对偏差小于10%且小于其他同类模型,表明实验建立的模型对木瓜蛋白酶在聚乙二醇(2000、4000、6000)/硫酸铵双水相体系中关联效果较好,可用于木瓜蛋白酶分配系数的计算,为双水相体系中木瓜蛋白酶酶活分配系数的工程计算和双水相萃取过程的设计提供参考。     

PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系萃取金银花中绿原酸的工艺优化

采用PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系优化金银花中绿原酸的提取工艺。以绿原酸萃取率为考察指标,在单因素试验基础上,确定PEG种类、PEG质量分数、(NH_4)_2SO_4质量分数和介质p H等关键影响因素,通过Box-Behnken试验筛选出绿原酸的最佳提取工艺条件。结果表明:PEG/(NH_4)_2SO_4双水相提取金银花中绿原酸的最佳工艺为:PEG4000质量分数28.7%、(NH_4)_2SO_4质量分数9.6%、介质pH 7。在此条件下,金银花中绿原酸萃取率为98.41%,该提取工艺环境友好,条件温和,提取率高,可为金银花资源的开发利用提供理论依据。     

双水相体系萃取分离鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶

采用聚乙二醇(PEG)/磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)双水相萃取技术对鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶进行萃取分离。分别考察PEG分子量、PEG、NaH₂PO₄的质量分数、双水相体系的pH、样品加入量及超声波辅助方法对下相总酶活、纯化倍数及萃取率的影响,并通过单因素实验及正交实验进行优化。结果表明:室温下12% PEG4000+15% NaH₂PO₄双水相组成对粗酶液有最佳萃取效果,目标酶富集于下(盐)相,酶活为1.45 U,萃取率为0.991,分配系数为104,纯化倍数为4.4;该体系自然状态下的pH萃取效果最佳,最大处理量为体系总质量的20%,体系所有组分混匀后超声波180 W处理5 min辅助处理,能略微提高萃取效果。     

双水相法萃取分离猪胰α-淀粉酶体系的初步研究

采用聚乙二醇(PEG1500)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对猪胰α-淀粉酶分离条件进行了研究。探讨PEG质量分数、p H值和(NH4)2SO4质量分数对猪胰α-淀粉酶在PEG1500/(NH4)2SO4双水相中的分配系数Ka及萃取率Y的影响,并通过正交试验优化双水相萃取条件。结果表明,在p H值为7.0,PEG1500质量分数为18%,(NH4)2SO4质量分数为12%的双水相体系中,α-淀粉酶的分配系数Ka为8.48,萃取率Y为80.25%,α-淀粉酶活为1 690 U/m L。     

双水相萃取分离重组毕赤酵母碱性木聚糖酶

利用双水相萃取技术对来源于重组毕赤酵母的碱性木聚糖酶进行了初步分离。研究了聚乙二醇(PEG)分子量、PEG浓度、盐种类及浓度、Na Cl加入量和p H等因素对萃取效果的影响。结果表明,在PEG 4000浓度为20%,Na2HPO4浓度为18%,Na Cl浓度为0,p H6.0的条件下,获得最佳萃取效果,其结果为:分配系数(K)8.51,酶的活力回收率(Y)87.2%,纯化倍数(PF)2.54。     

响应面法优化香菇柄中多酚提取工艺

目的探究超声耦合双水相法提取香菇柄中多酚类物质的最佳工艺。方法采用超声耦合双水相法对香菇柄中多酚进行提取,探讨硫酸铵质量分数、液料比、超声时间、超声功率对多酚含量的影响,在单因素试验的基础上,设计响应面优化试验,确定最佳提取工艺。结果各因素对多酚含量的影响由大到小依次为:超声功率硫酸铵质量分数液料比超声时间。超声耦合双水相法提取香菇柄中多酚的最佳工艺为:超声功率125 W,硫酸铵质量分数40 g/100 m L,液料比30:1(m L/g),超声时间40 min。在此条件下,提取的多酚含量预测值为31.746 mg/g,试验值为(31.746±0.008)mg/g,试验值与预测值基本相符。结论超声耦合双水相法提取条件温和、操作简单,与传统乙醇浸提法相比,不仅节约提取时间,还能提高多酚含量达60%,适于香菇柄中多酚类物质的提取研究。     

盐析和双水相萃取法纯化细菌木聚糖酶的比较

通过对比硫酸铵盐析和双水相萃取两种木聚糖酶初级纯化方法的纯化效率,确定更加适于Paenibacillus sp.B1709木聚糖酶初级纯化的方法。结果显示,双水相萃取较盐析具有更好的木聚糖酶纯化回收效果,并对其主要实验参数进行优化,得出双水相萃取最佳条件为:聚乙二醇(PEG)4000 Da,浓度22%,最佳成相盐(NH₄)₂SO₄,最适浓度18%,最适pH6.0,NaCl 2%。在此条件下,可实现分配系数9.90,酶活力回收率为90.84%,纯化倍数6.13。实验结果显示双水相萃取相较于盐析在大规模纯化尤其针对复杂纯化目标时具备一定技术的优势。