酶解海带蛋白制备抗菌肽的工艺优化

为优化碱性条件下海带抗菌肽的制备工艺,以海带蛋白为原料,采用碱性蛋白酶酶解以获得具有抗菌活性的多肽。通过酶解p H、酶底比、酶解时间及酶解温度等单因素试验,探讨了抗菌肽对大肠杆菌抑菌率的影响,并利用响应面法优化制备抗菌肽的最佳工艺条件。结果表明,最佳抗菌肽制备条件为:pH 11、酶底比7.6%、酶解时间4.6 h、酶解温度39.9℃。回归方程预测抑菌率可达30.62%,在最佳酶解条件下, 3次验证试验测得抗菌肽对大肠杆菌的抑菌率为30.14%,与预测结果基本一致。该工艺操作便捷,为海带深加工利用提供理论依据。     

风味蛋白酶水解合浦珠母贝肉制备抗菌肽人工神经网络法优化工艺

利用具有自学习特点的人工神经网络可实现对酶解过程的模拟仿真,研究从合浦珠母贝肉中制备抗菌肽的最佳工艺条件。采用3层(5-9-3)人工神经网络法对风味蛋白酶水解合浦珠母贝肉的工艺过程进行模拟和优化,并通过管碟抑菌法对产物的抑菌性质进行分析。结果表明：pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.6%、水解时间4h、料液比7:5,制备得到肽A,抑制鼠伤寒沙门氏菌最强,抑菌圈直径14.20mm,平均肽链长度2.6;pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.7%、水解时间4h、料液比3:2,制备得到肽B,抑制痢疾志贺氏菌最强,抑菌圈直径23.42mm,平均肽链长度2.8;pH6.5、水解温度60℃、酶添加量2.5%、水解时间4h、料液比7:5,制备得到肽C,对单核细胞增生李斯特菌的抑制效果最强,抑菌圈直径16.60mm,平均肽链长度2.5。3种抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌也具有较强的抑菌效果,抑菌率为74.3%～80.8%。本研究利用人工神经网络优化制备的贝肉抗菌肽克服了纯度低、提取率低等缺点,为合浦珠母贝肉抗菌肽的开发利用提供技术支撑。     

鲢鱼源多肽锌的制备工艺对其抑菌活性的影响

研究了制备工艺中的主要因素对鲢鱼源多肽锌螯合物的抑菌活性影响。以抑菌圈直径为指标,探讨了酶解工艺(蛋白酶种类和酶解时间)和螯合工艺(螯合反应的pH、多肽与氯化锌的质量比、螯合反应的温度和时间)对多肽锌螯合物的抑菌活性影响。结果表明,酶法水解鲢鱼蛋白制备抑菌型多肽锌的最佳条件为风味蛋白酶酶解时间6h、螯合反应pH为6.0、多肽与氯化锌质量比为2:1、反应时间45min、温度30℃,得到的螯合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为12.50mm和12.66mm,螯合物得率38.67%。因此,鲢鱼源多肽锌螯合物具有较好的抑菌活性,有望作为一种潜在的抗菌剂。     

响应面法优化黄粉虫抗菌肽酶解工艺

目的：确定黄粉虫抗菌肽的最佳酶解工艺。方法：以黄粉虫为原料,碱提酸沉法提取黄粉虫蛋白质,再利用筛选出的蛋白酶进行水解,并用琼脂平板扩散法(打孔法)表征制得抗菌肽的抑菌活性。在单因素试验的基础上,应用Box-Behnken中心组合试验设计和响应面(RSM)分析法,探讨酶解温度、pH值、酶解时间、加酶量及底物质量浓度对酶解产物抑菌活性的影响。结果：碱性蛋白酶最适合水解黄粉虫蛋白制备抗菌肽,其最佳工艺条件为：底物质量浓度810g/100mL、酶解时间4.4h、加酶量440U/g pro、酶解温度54℃、pH9.5;酶解物抑菌圈大小理论预测值为15.17mm,实际测量值为15.04mm。结论：碱性蛋白酶水解黄粉虫蛋白能够得到抑菌活性较强的酶解物,优化的工艺条件与理论预测拟合程度较高。     

酸性蛋白酶制备花椒籽蛋白抗菌肽的研究

利用酸性蛋白酶酶解花椒籽蛋白制备抗菌肽,以底物质量浓度、酶与底物比、pH值、酶解温度、酶解时间为影响因子,在单因素试验结果的基础上,应用Box-Behnken方法进行三因素三水平的试验设计,以对大肠杆菌的抑菌率为响应值,应用响应面法对花椒籽蛋白制备抗菌肽工艺进行优化。其最佳工艺条件为：底物质量浓度30 mg/mL、酶与底物比3.0%、酶解pH 4.0、酶解温度51.2 ℃、酶解时间4.7 h,此条件下酶解产生的抗菌肽复合物的水解度为9.05%,对大肠杆菌的抑菌率为56.98%。     

超声辅助酶法制备南极磷虾抗菌肽的工艺优化

采用超声辅助酶法制备南极磷虾抗菌肽,以抑菌圈直径为指标筛选蛋白酶,得到中性蛋白酶为最佳试验用酶。后续采用超声辅助中性蛋白酶酶解法制备南极磷虾抗菌肽,以抗菌肽得率及抑菌圈直径为指标,考察底物浓度、超声时间、超声功率、酶解温度、酶解时间和加酶量六个因素对抗菌肽得率的影响。从中选取影响抗菌肽得率的三个主要因素：底物浓度、酶时间、超声功率,以抗菌肽得率为响应值,采用响应面法进行工艺优化。结果表明：三个因素对得率的影响大小为底物浓度>超声功率>酶解时间,得到最佳制备条件为：底物浓度21%、酶解温度50℃、超声功率120W、超声时间25min、酶解时间4h、加酶量6000U/g,此条件下抗菌肽得率为51.24%,抑菌圈直径为20.8mm,均显著高于常规酶解法（P <0.05）,表明此优化工艺可行。为南极磷虾抗菌肽的潜在开发应用提供了思路和方法。     

金针菇蛋白酶解制备抑菌肽的工艺优化及功能评价

为了研究金针菇蛋白质的最佳酶解工艺和抑菌活性,在单因素试验的基础上,采用响应面设计,研究酶解时间、酶与底物比([E]/[S])和酶解温度对工艺的影响。以大肠杆菌为指示菌,以水解度和抑菌圈直径为响应值,最终确定酶解金针菇蛋白制备抑菌肽的最佳条件是:酶解时间4.59h,[E]/[S]4.73%,温度58.62℃。在此条件下,水解度为45.94%,抑菌圈直径为17.58mm,与理论预测值(水解度45.27%,抑菌圈直径17.45mm)的误差均在1%以内,说明所建模型具有较好的拟合性。酶解液经SephadexG-50凝胶层析法分析,抑菌肽相对分子质量主要分布在260.9～2538.6之间。     

响应面法优化猪血红蛋白抗菌肽的制备工艺

以猪血红蛋白为原料,利用筛选出的蛋白酶水解制备抗菌肽,以酶解液抑菌率和水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、加酶量和酶解时间3个主要工艺参数进行研究,在此基础上,通过响应面优化酶解工艺,建立数学模型.结果表明,胰蛋白酶最适合水解猪血红蛋白制备抗菌肽,其最佳条件为酶解温度49.72℃、加酶量2852.81U/g、酶解时间5.19h,酶解产物抑菌率的理论预测值89.70％,实际测量值90.32％.可见,利用胰蛋白酶水解猪血红蛋白能够得到抑菌活性较高的酶解产物,且该模型能够较好的预测抗菌肽制备最佳工艺条件.     

山羊乳酪蛋白酶解条件优化及其抗菌活性研究

为制备山羊乳酪蛋白抗菌肽,以新鲜无抗山羊乳为原料,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶在最适条件下酶解山羊乳酪蛋白,以沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为指标,筛选最适水解酶,并通过单因素实验和正交实验确定水解酶水解山羊乳酪蛋白的最适条件。结果表明:木瓜蛋白酶是酶解山羊乳酪蛋白的最佳蛋白酶,其酶解物对沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用最强;确定了木瓜蛋白酶水解山羊乳酪蛋白的最佳工艺。     

贯筋藤酶解山羊乳酪蛋白糖巨肽的工艺研究

以山羊乳和自主研发的贯筋藤蛋白酶为材料,在单因素实验的基础上,利用响应面优化贯筋藤蛋白酶酶解山羊乳制备CGMP的工艺条件。结果表明:山羊乳酪蛋白糖巨肽的最佳酶解时间32 min,酶解温度85℃,酶的添加量为底物体积7%;在此条件下山羊乳酶解液水解度为19.21%,CGMP质量浓度为2.991 mg/mL;研制的山羊乳CGMP的纯度为79.2%、蛋白质质量分数为73.327%,糖基化度为321.520μg/mg。     

响应面法优化酪蛋白抗菌肽的制备工艺

以酪蛋白为实验原料,利用胃蛋白酶水解制备抗菌肽。在单因素实验的基础上采用Box-Behnken模型响应面设计,建立了胃蛋白酶酶解酪蛋白制备抗菌肽的三元二次回归模型,确定底物浓度2.6%、水解温度37.7℃、pH2.6、酶浓度3%、酶解时间4h为最佳的酶解条件,在此条件下,酶解液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达到25.8mm。     

羊软骨中Ⅱ型胶原蛋白肽的制备和抑菌活性

以羊软骨胶原蛋白为原料,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶对其进行水解,确定最合适的酶解时间和酶用量以水解液的抑菌率和水解度为指标,比较酶解效果;以大肠杆菌为指示菌,通过双层琼脂平板扩散法检测其抑菌活性。试验表明:碱性蛋白酶酶解羊软骨胶原蛋白得到的水解液的水解度最高,最合适的酶解时间是2h,酶用量(占胶原蛋白的百分比)4%;碱性蛋白酶酶解羊软骨胶原蛋白得到的水解液的抑菌率最大,最合适的酶解时间是2.5 h,酶用量(占胶原蛋白的百分比)4%,水解液对大肠杆菌有抑菌活性,其抑菌圈直径为(26.79±0.16)mm,最后得到的胶原蛋白肽对大肠杆菌、金黄色葡糖球菌、枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌和沙门氏菌都有抑菌作用。     

虎奶菇菌丝体抗菌肽提取工艺优化及活性研究

目的:提高虎奶菇菌丝体抗菌肽得率和抑菌率。方法:将抗菌肽的得率和对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的抑菌率作为评价指标,在蛋白酶筛选的基础上,优化虎奶菇菌丝体抗菌肽的提取工艺,并测定其抗菌肽的最低抑菌浓度。结果:碱性蛋白酶酶解制备虎奶菇菌丝体抗菌肽的最佳工艺条件为酶解温度39.5℃、酶解时间3.2 h、pH值11.1,料液比1∶20 (g/mL),酶添加量6 000 U/g,此条件下虎奶菇菌丝体抗菌肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的实际抑菌率分别为74.17%和86.22%,抗菌肽提取率为22.67%。抗菌肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC值分别为5.0,2.5 mg/mL。结论:虎奶菇菌丝体抗菌肽具有显著的抑菌活性,尤其是对大肠杆菌的抑菌作用更强。     

响应面试验优化酶法制备辣木籽多肽工艺及其抑菌活性分析

以辣木籽蛋白粉为原料,首先筛选蛋白水解效果较佳的蛋白酶,其次考察酶添加量(酶底质量百分比)、料液比、酶解温度及酶解时间对蛋白水解度和肽得率的影响,并结合响应面法优化辣木籽多肽制备工艺,最后研究该酶解产物的抑菌活性。实验结果表明,碱性蛋白酶具有较好的蛋白水解度,酶法制备辣木籽多肽的最佳工艺条件为碱性蛋白酶添加量5.50%、pH9.0、料液比1:30(g/mL)、酶解温度62.50℃、酶解时间143 min,在此条件下肽得率实际值为(84.43±2.31)%、蛋白水解度为(20.69±0.46)%。该辣木籽蛋白酶解产物对单增李斯特菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌等4种致病菌株均有抑制作用,最小抑菌浓度依次为3.00 mg/mL、0.75 mg/mL、0.38 mg/mL、0.75 mg/mL,对培养至4.5 h后的金黄色葡萄球菌呈现较好抑制效果。     

响应面法优化驼乳乳清蛋白酶解制备抑菌肽工艺参数

驼乳具有丰富的营养价值和较高的药用价值,其乳清蛋白中含有丰富的保护性蛋白,且含有较高活性的抗菌因子。该研究首先利用单因素试验,以水解度（DH）为评价指标,研究胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶4种蛋白酶对驼乳乳清蛋白酶解的影响。确定了胃蛋白酶为水解驼乳乳清蛋白制备抑菌肽的最佳蛋白酶。在单因素试验基础上,以对大肠杆菌（Escherichia coli）抑菌率为评价指标,利用响应面法优化技术对胃蛋白酶制备抑菌肽的工艺进行了优化,获得胃蛋白酶最佳酶解工艺参数：酶解温度为40 ℃、酶解pH为3.00、酶解时间为5.3 h,酶解底物浓度为4%,酶与底物浓度比为1∶100。在此最佳工艺条件下,大肠杆菌抑菌率为83.91%。     

蚕豆蛋白酶解工艺及响应面法的优化

以蚕豆为原料,水解度为指标,研究木瓜蛋白酶及Alkaline蛋白酶酶解制备蚕豆多肽的工艺条件。通过单因素试验,初步确定2种酶法的酶底比、温度、pH的试验水平。在Alkaline蛋白酶单因素试验基础上,采用中心组合试验和响应曲面分析法分析各因素对酶解反应的影响,确定酶解反应的最佳工艺条件。结果表明:Al-kaline蛋白酶的酶解水平优于木瓜蛋白酶。木瓜蛋白酶解的参数是:pH6.5,酶底比8000u/g,温度65℃,在此条件下水解度为12.45%。Alkaline蛋白酶,各因素对蚕豆蛋白水解度的影响顺序为pH>酶底比>温度;响应面优化后的最佳参数为pH8.2,酶底比1978u/g,温度64℃,水解度预测值25.48%。验证试验的水解度为25.54%,预测值与试验值十分接近。     

响应面试验优化双酶酶解法制备鱼鳞抗菌肽工艺及其抑菌性能分析

采用双酶酶解法制备鱼鳞抗菌肽,进行酶筛选并通过响应面法优化酶解条件;通过葡聚糖凝胶G-25分离纯化酶解液,研究有效抑菌组分对不同菌的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）。结果表明,当采用碱性蛋白酶结合酸性蛋白酶分步酶解鱼鳞,底物质量浓度为30?g/100?mL时,最适酶解条件为碱性蛋白酶在pH?9.5时首次酶解,酶解时间62?min,酶解温度55?℃;酸性蛋白酶在pH?3.0时再次酶解,酶解时间3?h,酶解温度34.4?℃。此条件下制备的酶解液对副溶血性弧菌的抑菌圈直径为27.72?mm,与预测值基本相符。酶解液经层析后,其抑菌性G2组分对假单胞菌和希瓦氏菌的MIC为1.56?μg/mL,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门菌及副溶血性弧菌的MIC为6.25?μg/mL。可见,双酶酶解法制备的鱼鳞抗菌肽具有较强的抑菌性。     

牛骨胶原蛋白抗菌肽的制备及其抑菌活性

以牛骨胶原蛋白为原料,采用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、动物复合蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对其进行水解,确定最佳的酶解时间和酶用量,并比较酶解效果.酶解液经离心过滤和真空冷冻干燥后,测定其对金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌的抑制活性.结果表明:动物复合蛋白酶酶解牛骨胶原蛋白得到的酶解液的水解度最高,其最佳的酶解时间为4h,最适宜的酶添加量(占骨质量的百分比)为1.25%;风味蛋白酶和中性蛋白酶的酶解液对金黄色葡萄球菌具有抑菌效果,其抑菌圈直径分别为6.03mm和7.97mm;动物复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰蛋白酶对肠炎沙门氏菌具有抑菌效果,其抑菌圈直径分别为8.67、9.10、9.03mm.     

酶解法制备猪肩胛骨降血压肽

以猪肩胛骨为原料,用蛋白酶将其水解用以制备降血压肽。以酶解液的血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为主要指标,筛选出风味蛋白酶为最适的蛋白酶进行酶解优化实验。考察酶解时间、酶解温度、pH、酶底比、底物浓度5个因素对酶解液的水解度和ACE抑制率的影响,并在此基础上通过响应面优化实验,确定最佳酶解条件为:酶底比6900U/g、酶解温度53℃、酶解时间4.5h,此条件下进行验证实验制备出ACE抑制率为65.31%的猪肩胛骨降血压肽,ACE抑制率理论值为66.93%。     

酶法水解乳清蛋白工艺研究

以乳清蛋白为原料,选择碱性蛋白酶水解乳清蛋白.通过四因素三水平正交试验设计方法对碱性蛋白酶水解乳清蛋白的工艺条件[酶-底浓度比(E/S),pH,水解温度,水解时间]进行优化,确定了碱性蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳水解条件为酶-底浓度比0.05,pH8.0,反应温度60℃,水解200min,此条件下水解度为21.92％.各因素对水解度的影响主次顺序为酶-底浓度比(E/S)＞水解温度＞水解时间＞pH.