酿酒酵母丙酮酸脱羧酶活性测定的研究

丙酮酸脱羧酶是酿酒酵母代谢中非常关键的酶,其催化的反应是利用丙酮酸生成乙醛.研究构建了一种分光光度法测定酿酒酵母中丙酮酸脱羧酶活性的方法,在25℃和pH6.0的条件下测定反应液5min内在波长340nm处每分钟吸光度值的变化.以在25℃和pH6.0的条件下每分钟转化1.0μmoi丙酮酸生成乙醛来定义酶的活性.     

优选酿酒酵母菌株发酵性能研究

对从新疆楼兰酒厂筛选出的3株优良酿酒酵母菌株进行发酵性能研究,通过对菌株的酒精耐受性、二氧化硫耐受性、絮凝性、发泡性、自溶性和酿酒特性的综合比较,结果显示,菌株CEC524的综合性能最佳,具有应用于我国地区特色葡萄酒生产的潜能。     

TPK3基因敲除对酿酒酵母耐受性的影响

酿酒酵母是乙醇发酵时常用的微生物,在发酵过程中会受到高温、乙醇、渗透压、乙酸等胁迫环境的影响.为增强酵母对胁迫环境的耐受,该试验以AY12a为出发菌株,利用胞内同源重组,敲除编码蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)催化亚基的TPK3基因,构建TPK3基因敲除菌株AY12a-2.利用敲除TPK3基因的分...     

乙醇脱氢酶I基因敲除的酿酒酵母重组菌构建的初步研究

本实验根据酿酒酵母乙醇代谢途径,构建一株低乙醇产量的酿酒酵母基因工程菌株,以满足人们对低醇啤酒的需要。利用抗性基因筛选基因敲除突变体的方法,通过引物L1和L2扩增潮霉素B基因(两翼与酿酒酵母同源),按常规醋酸锂法转化酵母细胞后,筛选标记与酵母adhI基因发生同源重组,得到一株ADHI酶活性降低的工程菌株。发酵实验结果表明,转化菌株乙醇含量平均值为1.8%(V/V),较原始菌株低了65%。说明转化菌株体内乙醇生成途径受到干扰。     

野生猕猴桃酿酒酵母的筛选及其发酵特性

以大别山野生猕猴桃为原料,经由猕猴桃汁初筛,YEPD培养基复筛获得酵母菌株。通过WL培养基观测形态,采用杜氏管发酵法、猕猴桃果汁发酵法等进行发酵能力评估,并进行了耐受性研究,然后对其酿酒特性进行测定,通过监测猕猴桃酒的发酵情况变化、测定酒液的酒精度、总酸以及澄清度、香味、口感等感官指标,筛选出最佳酿酒酵母。结果表明:M5菌株发酵活力强,可耐受14%vol的酒精度、300 g/L的糖和300 mg/L SO₂,发酵周期短、酒液清澈、酸度为0.8 g/100 mL,酒精度可达9.8%Vol,V_C含量可达40.8 mg/100 mL,感官品质在五株菌中最佳,有望驯化为酿造猕猴桃酒的优良酵母。     

弱化乙醇途径关键酶活性减少酿酒酵母在丙酮酸发酵过程中副产物乙醇的积累

C4二元羧酸广泛应用于食品、医药和化工等产业。酿酒酵母被认为是生产C4二元羧酸的潜在最适微生物,但在高糖浓度及有氧条件下,它会产生大量的乙醇,对于以C4二元羧酸为目标产物来说,这会导致碳代谢流和辅助因子的损失。通过敲除PDC1和ADH1两个关键基因可同时弱化Pdc和Adh的活性,但导致菌体生长较弱。在最佳的培养基组成和培养条件下,双基因突变株的最大生物量与野生型菌株接近,发酵48 h时,最大乙醇产量为2.1 g/L,较野生型菌株最大乙醇产量下降了63.8%,此时,丙酮酸产量为2.0 g/L,而野生型菌株几乎不产丙酮酸。通过弱化乙醇途径关键酶活性可以有效减少乙醇形成,为解决利用酿酒酵母生产C4二元羧酸及其它有机酸中副产物问题提供了一个可供选择的策略。     

固态发酵用耐高温酿酒酵母YH_4的筛选及其特性研究

Saccharomyces cere(?)isiae YH(?)是从洋河酒厂处于顶火期的酒醅中分离出来的耐高温酵母,最适生长温度为35～38℃,最高生长温度为47℃。最适生长PH为4～6,对黄水中复合有机酸有较强的耐性。酒精发酵能力中等,发酵速度较慢。在实验室模拟固态发酵条件下,当对酒醅的接种量在2％以下时,将会使酒精产量明显增加,而且酒中的己酸乙酯含量不受显著影响,因此,该菌株在克服或减轻浓香型白酒夏季生产“掉排”现象中较有应用前途。 本文介绍了YH(?)的微生物学特征及应用特性,同时,探索和改进了一些实验室进行固态模拟发酵的方法。     

BAT2缺失酿酒酵母基因工程安全菌株的构建及其杂交育种

为了获得低产高级醇基因工程安全菌株,首先将带有Cre重组酶编码基因的pGAPZA质粒转入BAT2缺失单倍体突变株A8-B和C22-B中,利用Cre/loxp系统去除G418抗性基因(KanMX),获得酿酒酵母单倍体突变株ΔBAT2a和ΔBAT2α。然后将这2株单倍体杂交成双倍体菌株ΔBAT2,该菌株具有良好的遗传稳定性。以野生菌株AY15和2株单倍体出发菌株为对照,对基因工程安全菌株进行白酒发酵试验,实验结果显示,基因工程安全菌株ΔBAT2与出发菌株相比,CO2失重高,残糖低,乙醇含量高;与野生菌株AY15相比,异丁醇、异戊醇、总高级醇生成量分别降低50.00%、33.40%和30.57%。     

酿酒酵母对贮存期发酵乳特性的影响

通过添加酿酒酵母,研究了酿酒酵母对贮存期发酵乳特性的影响.结果表明,乳酸菌和酿酒酵母存在相互促进作用,这有利于发酵乳中活菌数的稳定;添加酿酒酵母后,发酵乳的坚实度、稠度和黏度均产生了变化,在贮存中后期稠度和黏度具有显著性差异;添加酿酒酵母的发酵乳与乳酸菌单独发酵的发酵乳相比pH值较低.     

绿原酸对酿酒酵母发酵特性的影响

以模拟苹果汁为发酵体系,添加质量浓度为0(对照组)、0.01、0.1、1.0 g/L的绿原酸,通过考察发酵过程中酿酒酵母CICC31084的生物量、葡萄糖消耗、CO2释放、发酵液乙醇生成以及发酵液关键香气物质变化,研究发酵过程中绿原酸对酿酒酵母发酵特性的影响.结果 表明:高质量浓度绿原酸能够促进酵母细胞生长,加快CO2...     

丙酮酸羧化酶对酿酒酵母积累琥珀酸的作用探究

为探究丙酮酸羧化酶及微量元素Ca~(2+)和生物素对酿酒酵母积累琥珀酸的作用,敲除了琥珀酸脱氢酶编码基因(SDH2)并过量表达来自米根霉的丙酮酸羧化酶基因(Ro PYC)。琥珀酸产量由(0. 011±0. 002) g/L提高至(0. 841±0. 020) g/L,较表达前提高了75. 45%。随后,外源添加不同浓度Ca~(2+)和生物素考察其对琥珀酸发酵的影响,结果发现,Ca~(2+)的添加促进了菌体的生长但不利于琥珀酸的积累,而外源添加浓度为16、32、64、96μg/L生物素时,琥珀酸产量分别提高75. 04%、84. 26%、69. 28%、66. 79%。其中生物素质量浓度为32μg/L时,琥珀酸产量达到最大为(0. 964±0. 02) g/L,且丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC)酶活提高14. 42%,说明PC酶活的提高促进了酿酒酵母中琥珀酸的积累。该研究为解决酿酒酵母琥珀酸合成过程中前体碳代谢流不足问题提供了新的解决思路。     

酿酒酵母蔗糖关键代谢途径基因的敲除及其生长特性的变化分析

该研究以酿酒酵母（Sacchromyces cerevisiae）IMX581为出发菌株,利用Crispr-Cas9基因编辑的方法敲除其蔗糖消耗途径中的蔗糖转化酶基因Suc2和麦芽糖酶基因MAL32、MAL12、MAL22,构建工程菌株IMX581△Suc2和IMX581△Suc2△MAL32△MAL12△MAL22,并对其生长特性及蔗糖消耗情况进行分析。结果表明,当初始OD600 nm值为0.1时,菌株IMX581△Suc2在以蔗糖为唯一碳源的培养基上仍然可以生长,但培养56 h时,生物量是出发菌株IMX581的52%,而菌株IMX581△Suc2△MAL32△MAL12△MAL22几乎不生长。当初始OD600 nm值为0.1、5.0及10.0时,菌株IMX581△Suc2和IMX581△Suc2△MAL32△MAL12△MAL22培养72 h后,蔗糖的消耗率较出发菌株IMX581均显著下降,分别为28.5%、35.5%、38.5%和7.0%、18.4%、22.5%。因此,成功构建了显著降低蔗糖消耗的菌株IMX581△Suc2△MAL32△MAL12△MAL22,为研究酿酒酵母对蔗糖的利用及调控提供了参考。     

酿酒酵母CHS3基因缺失对热耐受性的影响

研究真菌细胞壁几丁质合成酶CHS3基因在酵母热耐受性中的功能.采用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)技术构建酵母CHS3基因缺失菌株:比较野生型与CHS3因缺失菌株的几丁质含量;梯度生长实验检测CHS3基因缺失菌株的热敏感性.结果显示,与野生型菌株相比,CHS3基因缺失菌株表现出热胁迫敏感性表型,此表型可被抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)弥补,表明该热敏感表型可能与热胁迫条件下活性氧积累引发的氧化损伤.     

耐高温工业酿酒酵母的筛选和发酵性能研究

以工厂生产线中分离得到的工业酿酒酵母为出发菌株,通过基因组的改造和实验室的适应性进化,在30％葡萄糖、8％乙醇、40℃下筛选获得了5株耐受性较强的酿酒酵母菌株.通过摇瓶验证其发酵性能发现,其中S.C D12在工业物料中的发酵性能显著优于对照菌株.为了进一步对S.C D12进行发酵性能的综合评估,对其在不同工业物料中的发...     

利用基因敲除技术破坏酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因的初步研究

文中采用醋酸锂转化法，将一段目的基因转入到酵母体内，破坏酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因的表达。通过对目的基因的扩增和乙醇脱氢酶Ⅱ酶活检测验证基因敲除情况，并通过传代抗性试验验证突变株遗传稳定性良好。     

适应性进化提高酿酒酵母糠醛耐受性及其机理研究

燃料乙醇的原材料多样、对环境污染小,是一种真正意义上的可再生绿色能源。为了加大生物质能源的工业化进程,并克服预处理过程中产生的抑制剂对酵母的抑制作用,本研究以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） CEN. PK 1B-7D为出发菌株进行适应性进化培养,得到了对糠醛耐受性高且生长延滞期明显缩短的进化菌株CEN. PK 1B-7D 385。进一步比较原始菌株和进化菌株在4 g/L糠醛条件下细胞膜的通透性、膜电位变化情况和细胞内活性氧含量（ROS）。结果发现,相对于原始菌株,碘化丙啶（PI）染色细胞数降低了45.2%,去极化细胞数量减少了66.7%,说明在糠醛胁迫下进化菌株的细胞膜更加完整。同时,进化菌株胞内ROS含量从原始菌株的9.1%降低为6.5%,说明在糠醛胁迫下进化菌株胞内ROS有所下降。结合生物量、乙醇产量、细胞膜通透性及膜电位等诸多因素,进化菌株CEN. PK 1B-7D 385对糠醛的耐受性较原始菌株有明显提升。     

山楂酿酒酵母的筛选及其发酵性能测定

以山楂为原料,利用平板划线分离法,得酵母9株。利用杜氏小管实验对酵母进行筛选,获得4株发酵力较强酵母。将其进行酒精、酸度、糖度的耐受性试验,表明总体耐受性较好。将其与1450酿酒酵母共同进行发酵性能测定,确定了⑤号酵母是优良菌株。在60 mg/L SO2和28℃的条件下,可酿造出11.3(体积比)酒精度,3.0 g/L还原糖,8.1 g/L总酸度,0.21澄清度,酒色鲜红、口感纯正、香味浓郁的山楂干红酒。     

酿酒酵母发酵条件的研究

以实验室前期筛选的培养基为发酵培养基,通过单因素试验和正交试验,得到酿酒酵母的最佳培养条件为温度26℃、转速150 r/min、初始pH 5.5、培养时间36 h、接种量4%、装液量20 mL/100 mL,在此优化条件下进行发酵,其OD560nm为1.370,菌体密度为1.54×108个/mL,菌体干质量可以达到18.48g/L,比初始条件下菌体干质量提高了将近10%。     

赤霞珠葡萄自然发酵过程中的酿酒酵母筛选及其发酵特性

采用孟加拉红选择性培养基筛选烟台产区赤霞珠葡萄自然发酵醪液中的酵母菌,并经WL培养基鉴定获得9株酿酒酵母。酿酒酵母经发酵性能和耐受能力(酒精度、SO2、酸、高糖)测定,选育3株酵母用于酿造赤霞珠干红葡萄酒,结果显示,菌株YCF2的发酵指标较好,部分指标优于商品化酿酒酵母,具备工业化发酵应用潜力。     

酿酒酵母与产香酵母发酵特性及其相互作用规律

为提高米香型白酒的品质,将筛选得到的克鲁维毕赤酵母(Pichia kudriazevii)、异常维克汉逊酵母(Wickerhamomyces anomalus)、扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera) 3株产香酵母与1株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为供试菌株,研究了其菌株形态、生长周期、抗逆性以及发酵特性,并探索了菌株间的相互作用对菌体生长与代谢的影响规律。结果显示,各菌株进入稳定期的时间存在明显差异。在抗逆性方面,4株菌均表现出良好的耐热性、耐酸性、乙醇耐受性与糖耐受性。产酸、产酯、产乙醇能力最强的菌株分别是S.fibuligera、P.kudriazevii、S.cerevisiae。相互作用方面,S.cerevisiae会抑制其余3株产香酵母的生长(P <0.05),而产香酵母对S.cerevisiae的生长无明显影响;此外,P.kudriazevii会显著抑制W.anomalus(P <0.05)。4株菌最优的接种比例为106∶106∶106∶106CFU/m L,在接种3株产香酵母8 h后再接种S....