紫花芸豆清蛋白水解物及其膜分离产物抗氧化活性研究

应用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解紫花芸豆清蛋白,并通过膜分离技术将水解物分离成4种不同分子质量大小的多肽组分(1 kDa、1～3 kDa、3～5 kDa和5 kDa);评价水解物和其膜分离组分的抗氧化活性(DPPH自由基清除率、还原力、羟自由基抑制率、亚铁离子螯合能力和ABTS自由基清除率)。结果表明,碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶均能显著提高紫花芸豆清蛋白的抗氧化活性。其中ABTS自由基清除率、羟自由基和亚铁离子螯合能力提高较大,但是碱性蛋白酶降低了芸豆清蛋白的还原力。经过超滤膜分离后,不同分子量大小的各组分均具有一定的抗氧化活性,但是各组分的抗氧化能力不同, 1 kDa以下组分具有更佳的抗氧化活性,可进一步分离并鉴定获得单一抗氧化肽段,从而用于功能食品和保健品的开发。     

复合蛋白酶水解玉米谷蛋白产物的抗氧化活性研究

以玉米谷蛋白为原料,利用复合蛋白酶对其进行限制水解,探讨不同水解时间所获得的谷蛋白酶解物的分子量分布和抗氧化活性。结果表明:不同水解时间获得的酶解物分子量分布差异较大。水解时间为120min的酶解物中,分子量分布为6 511.51~307.32Da的肽段占94.36%,此时获得的酶解物的抗氧化活性最高,其对DPPH自由基、O-2·、·OH的清除率分别为58.86%,82.64%,37.21%;还原力为0.236;与亚铁离子的螯合能力为29.92%。     

裙带菜多肽的制备及其抗氧化活性的研究

实验以裙带菜为原料制备裙带菜蛋白,通过单因素和正交试验确定了碱性蛋白酶为裙带菜抗氧化肽制备的最佳酶,最优酶解条件为:料液比4%、酶解温度55℃、酶解时间3.5h、加酶量7500U/g、pH 10.0,该条件下制备的裙带菜多肽的还原能力最强,700nm处的吸光值为0.411。对制备的裙带菜多肽进行超滤分级,从O_2~-·清除率、·OH清除率、DPPH自由基清除率、Fe~(2+)螯合率4个方面,探究了不同分子量裙带菜多肽的抗氧化能力。结果表明:裙带菜多肽对Fe~(2+)的螯合能力和DPPH自由基的清除能力较强,对O_2~-·和·OH的清除能力相对较弱,且总体呈现低分子量肽段的抗氧化活性较强,高分子量肽段的抗氧化活性较弱的趋势。     

杏鲍菇多糖锌螯合物的制备工艺及其抗氧化活性

以杏鲍菇为原料,通过水提法提取杏鲍菇多糖(Pleurotus eryngii polysaccharide,PEP),研究杏鲍菇多糖锌螯合物(Pleurotus eryngii polysaccharides-zinc(II)chelate,PEP-Zn)的制备工艺。以螯合率为指标,研究螯合时间、螯合温度和螯合pH值对螯合率的影响,进一步采用响应面试验设计对PEP-Zn的制备工艺进行优化,通过测定DPPH自由基、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O_2~-·)的清除能力,对PEP和PEP-Zn的抗氧化活性进行评价。结果表明:PEP-Zn最佳制备工艺条件为,螯合时间3.73 h,螯合温度58.5℃,螯合pH值为4.29,在该条件下,PEP-Zn螯合率可达64.3%。抗氧化活性结果表明:PEP-Zn与PEP相比,对·OH和O_2~-·的清除作用显著增强,对DPPH自由基的清除作用减弱。     

桃仁多肽螯合亚铁的抑菌活性及结构表征

分别对亚铁离子与不同分子质量桃仁多肽和不同植物多肽形成的螯合物,以及亚铁、锌、钙和镁离子与桃仁多肽形成螯合物的抑菌活性进行比较,并对螯合物进行结构表征。结果表明：小分子质量（小于5 000 Da）桃仁多肽PKP3组分与亚铁离子螯合后的抑菌活性强于大分子质量（大于10 000 Da）桃仁多肽亚铁螯合物,桃仁多肽与亚铁离子和锌离子螯合后有较强抑菌活性;4 种植物多肽与亚铁离子所形成的螯合物间的抑菌活性存在显著性差异（P＜0.05）,其中桃仁多肽螯合亚铁和小麦多肽螯合亚铁的抑菌活性最强,对大肠杆菌的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）均为5.0 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC分别为2.5、5.0 mg/mL;傅里叶变换红外光谱分析表明亚铁离子与4 种植物多肽分子的—COO－、N—H、C＝O形成配位键,多肽与亚铁离子能有效地螯合形成多肽螯合亚铁。     

莜麦谷蛋白-1酶解物螯合亚铁离子影响因素的研究

采用连续提取法提取莜麦球蛋白、谷蛋白-1、水溶性清蛋白和谷蛋白-2,分析4种蛋白质对亚铁离子的螯合能力,最终筛选出莜麦谷蛋白-1的螯合能力最高(螯合率为29.55%)。以莜麦谷蛋白-1酶解物(naked oat glutelin-1 hydrolysates,NOG-1H)为原料制备肽-亚铁螯合物,并探讨酶的种类、亚铁离子用量、螯合时间等因素对NOG-1H亚铁离子螯合能力的影响。结果表明,莜麦谷蛋白-1经碱性蛋白酶结合风味蛋白酶水解后,水解产物的水解度(15.32%)和亚铁离子螯合能力(45.26%)均最高;当螯合时间为90 min,pH值为2.0、温度为30℃、亚铁离子浓度为1.25 mg/mL时,NOG-1H均表现出较高的亚铁离子螯合率。     

羊骨多肽亚铁螯合物的制备工艺优化及结构表征

为探究羊骨多肽亚铁螯合物的最优制备工艺及结构的表征,本试验采用羊骨粉为原料,制备出羊骨多肽,并超滤分离得出螯合效果最好的肽段为0～3 KDa,再与FeCl_2进行螯合,得到羊骨多肽亚铁螯合物。以螯合率为指标,通过单因素与响应面试验,得到最优条件为反应的肽铁质量比为3∶1,底物浓度为30 mg/mL,pH为5.2,螯合时间为30 min,螯合温度为35℃,最终螯合率为78.00%。以羊骨多肽为参照,试验结果表明,定性检测确定了螯合物的形成,紫外光谱显示亚铁离子与多肽作用,红外光谱表明螯合位点为氨基,羟基和C=O,扫描电镜可看出羊骨多肽与亚铁离子发生了吸附作用,结构紧密。通过氨基酸分析可得出,氨基酸组成符合胶原多肽的成分特征,螯合后天冬氨酸与谷氨酸含量增加显著。     

屎肠球菌JT_1的抗氧化特性

检测课题组前期分离鉴定得到的屎肠球菌JT_1(Genebank登录号:KM233626)的体外抗氧化能力。以样品对超氧阴离子(O_2·)、羟自由基(HO·)、亚铁离子(Fe~(2+))和1.1-二苯基苦基苯肼(DPPH)的清除率为指标,对其抗氧化性进行定性及定量研究。经研究发现,屎肠球菌JT_1的无细胞提取物和菌体细胞对O_2·、HO·、Fe~(2+)和DPPH都有一定的清除能力,其中屎肠球菌JT_1的无细胞提取物对超氧阴离子(O_2·)的清除率为6.132%,对羟自由基(HO·)的清除率为72.772%,对亚铁离子(Fe~(2+))的螯合率为95.523%,对DPPH的清除率为8.281%;其菌体细胞对超氧阴离子(O_2·)的清除率为17.246%,对羟自由基(HO·)的清除率为25.940%,对亚铁离子(Fe~(2+))的螯合率为50.110%,对DPPH的清除率为23.873%。研究表明,屎肠球菌JT_1的无细胞提取物对HO·和Fe~(2+)有较强的清除能力;其菌体细胞对HO·和Fe~(2+)的清除能力也很强,对O_2·和DPPH的清除能力比无细胞提取物更强。这一结论证实了屎肠球菌JT_1的抗氧化特性,为其在功能性食品中的应用提供了有力的理论依据。     

米糠肽-铁锌螯合物制备工艺研究

目的 研究米糠蛋白制备米糠肽-铁锌螯合物的工艺。方法 以米糠蛋白为原料,优化米糠肽-铁锌螯合物制备工艺。以亚铁离子与锌离子的螯合率和水解度为评价指标,考察蛋白酶种类、反应物质量比、温度、时间及pH值对米糠酶解产物铁锌螯合率的影响。在单因素试验的基础上,结合JMP软件进行定制试验设计,确定米糠肽-铁锌螯合物的制备工艺。结果 碱性蛋白酶较适宜制备米糠肽-铁锌螯合物,其最佳螯合工艺条件为时间70 min、温度70 oC、反应物质量比3:1、pH 5.0;在此条件下,其产物亚铁离子螯合率达到38.29%、锌离子螯合率达到57.2%,与预测值接近。结论 本研究采用米糠肽同时螯合铁锌2种金属离子,不仅可以充分吸收米糠肽的营养成分,提高消化率,发挥其降血压、降血脂、抗氧化等功能特性,还可以同时补铁、补锌,对人体具有积极作用。     

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。     

罗非鱼多肽-Ca、Cu螯合工艺及其产物的结构特征

以罗非鱼多肽为原料,研究多肽与钙、铜金属离子在不同质量比、pH、温度和时间等条件下合成多肽-钙及多肽-铜螯合物的螯合反应工艺条件,并通过红外分析螯合物的结构特征。结果表明:pH和质量比是影响多肽-金属螯合反应的主要因素,制备罗非鱼多肽-钙螯合物和罗非鱼多肽-铜螯合物的适宜工艺分别为质量比4:1、pH9、温度45℃、时间45 min和质量比3:1、pH4.5、温度50℃、时间45 min,螯合率分别达43.06%和53.36%。     

罗非鱼皮胶原蛋白肽亚铁螯合修饰及螯合物性质的研究

以罗非鱼皮为原料制备胶原蛋白肽(TSGP),胶原蛋白肽与亚铁盐进行螯合反应,对TSGP亚铁螯合物的理化性质及功能特性进行研究。实验优化得出最佳螯合反应条件是m多肽∶mFeCl2·4H2O=500∶1,pH为6.0,反应时间50min,温度35℃。通过荧光光谱、紫外光谱和红外光谱测定发现Fe2+与TSGP的羧基与氨基均可发生配位反应。抗氧化活性测定实验表明,螯合物具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+自由基的能力。     

利用废革屑制备不同分子量肽-Zn螯合物的工艺探究

本文主要通过不同用量的碱对废革屑进行水解,制备不同分子量的多肽1、多肽2、多肽3,利用GPC测定3种多肽分子量,并将多肽和Zn(CH3COO)2进行螯合反应来制备多肽-Zn金属螯合物。设计单因素实验,考察了pH、反应温度、反应时间、多肽-Zn质量比等因素对螯合反应的影响。确定了Zn(CH3COO)2与多肽螯合的最佳条件。多肽1的最佳螯合条件:多肽-Zn比为7∶1,反应时间60 min,反应温度为60℃,pH为8,最佳条件下的螯合率为66.83%;多肽2的最佳螯合条件:多肽-Zn比为7∶1,反应时间60 min,反应温度为60℃,pH为8,最佳条件下的螯合率为75.33%;多肽3的最佳螯合条件:多肽-Zn比为6∶1,反应时间60 min,反应温度为60℃,pH为7,最佳条件下的螯合率为82.56%;最后,对多肽-Zn螯合物进行红外光谱分析表征,结果表明Zn离子成功螯合到多肽上,得到Zn肽螯合物。     

辣木籽粕多肽亚铁螯合物的制备及结构分析

为探究辣木籽粕多肽亚铁螯合物的制备工艺及其结构特性。本实验以辣木籽粕多肽和氯化亚铁为原料制备多肽亚铁螯合物，同时以亚铁螯合率为指标对辣木籽粕多肽-亚铁螯合物的制备条件进行优化，得到了最佳螯合反应条件：肽铁质量比为4.1:1，多肽浓度为7.9 mg/mL，pH=4.70，反应温度为40 ℃，反应时间为20 min，在此条件下亚铁离子螯合率为（88.27±1.49）%。紫外、红外、荧光光谱以及扫描电镜和能谱分析等方法对螯合物进行结构分析表明，亚铁离子能够与多肽氨基酸上C=O 、N-H、—COO-等官能团结合生成多肽亚铁螯合物，表面疏水性与氨基酸组成分析表明极性氨基酸能够在螯合反应中起到重要作用。     

橄榄酚类提取物的抗氧化性能

为进一步开发利用橄榄中的酚类物质,文中通过测定橄榄酚类提取物的铁离子还原能力、亚铁离子螯合能力,及对2,2'-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)自由基(ABTS+.)、1,1-二苯-2-苦基苯肼自由基(DPPH.)、羟基自由基(.OH)和超氧阴离子自由基(O2-.)的清除能力,以考察橄榄酚类提取物的体外抗氧化性能,并与食品抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)和Vc进行对比。结果表明:橄榄酚类提取物具有较好的体外抗氧化性能,其ABTS+.、DPPH.清除率分别高达99%和95%以上,.OH、O2-.清除率可达50%左右,铁离子还原力约1 700μmol/L Trolox,亚铁离子螯合率最高为14.9%。且提取物ABTS+.、DPPH.和.OH清除能力及铁离子还原能力均强于BHA和Vc,而O2-.清除能力强于BHA但弱于Vc。另外,橄榄酚类粗提物和纯化物相同浓度下的ABTS+.、DPPH.、.OH清除能力和铁离子还原能力相当(P>0.05),而其O2-.清除能力和亚铁离子螯合能力表现有所差异。     

玉米醇溶蛋白肽钙螯合物的制备及其抑菌性能研究

以玉米醇溶蛋白为原料,制备蛋白肽钙螯合物,并对螯合工艺和螯合物的抗氧化和抗菌特性进行研究。结果表明:螯合温度30℃、时间30 min、p H8.0、多肽与氯化钙的质量比4:1时,螯合率可达60.3%。肽钙螯合物的DPPH自由基清除率为85.6%,能明显抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。螯合物影响金黄色葡萄球菌的正常生长曲线,通过破坏其细胞膜的完整性发挥作用。研究结果为玉米醇溶蛋白肽钙螯合物的开发和应用提供理论基础。     

四川传统泡菜中乳酸菌的分离鉴定及抗氧化评估

四川泡菜中含有丰富具有抗氧化能力的乳酸菌,为评估其抗氧化活性,本研究以2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基清除能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力、亚铁离子螯合能力为指标,探究了从泡菜中分离出来的6株乳酸菌的体外抗氧化活性。结果表明,16S rDNA基因序列鉴定的6株菌均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),6株乳酸菌在ABTS~+和DPPH自由基清除、亚铁离子螯合方面均具有一定的作用,其中发酵上清液组菌株SPC-3-1、SPC-1-3、SPC-3-1,完整细胞组菌株SPC-1-1、SPC-3-1、SPC-1-4,无细胞提取物组SPC-3-1、SPC-3-1、SPC-1-3分别在ABTS~+自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、亚铁离子螯合能力中最高,分别为89.33%±1.27%、71.88%±0.16%、38.58%±0.85%、15.49%±3.78%、18.65%±1.49%、91.56%±1.73%、14.33%±0.50%、21.06%±1.14%和90.40%±4.58%。在6株植物乳杆菌对ABTS~+和DPPH自由基清除作用中,发酵上清液组的清除率均高于完整细胞组和无细胞提取物组,而在对亚铁离子的螯合能力中,完整细胞组和无细胞提取物组的螯合能力大于发酵上清液组。     

?微生物法制备松仁肽-锌螯合物及其抗氧化功能的研究

实验研究了微生物法制备松仁肽-锌螯合物及抗氧化性质,利用松仁粕为原料制作培养基,选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ls-45为发酵菌种,以硫酸锌为锌源,运用微生物法进行螯合,微生物将大分子的松仁蛋白分解为小分子肽的同时与锌离子螯合,以硫酸锌的添加量、发酵温度、发酵时间、pH 4个因素进行单因素实验和响应面实验对螯合工艺参数进行优化,以螯合率为指标,确定最佳的工艺参数为:硫酸锌添加量为0.6 g,时间为50.36 h,温度为38.46℃,pH值为7.41。得到最佳螯合率90.60%。通过体外抗氧化实验对松仁肽-锌螯合物、松仁肽、VC等物质的不同浓度进行DPPH自由基清除率、还原能力、羟自由基清除率等3个指标的测定,实验结果表明松仁肽-锌螯合物的抗氧化性均高于松仁肽,并随着质量浓度的增加而呈现量效关系,由此可以初步判断松仁肽-锌螯合物具有良好的抗氧化功能。     

动物蛋白水解酶法制备南极磷虾多肽及其抗氧化活性

实验以南极磷虾虾糜和蛋白为原料,通过动物蛋白水解酶制备南极磷虾多肽,研究了酶解的工艺参数,分析了多肽的分子量分布,并评价了多肽的抗氧化活性。结果表明:通过动物蛋白水解酶对南极磷虾虾糜和蛋白进行水解,最优的酶解温度为50℃,pH为8.0,加酶量为2000U/g,酶解时间为3h。此条件下得到的2种南极磷虾多肽分子量范围为311～2963Da,且此2种南极磷虾多肽具有一定的抗氧化能力,能清除羟基自由基和还原铁离子。     

木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性研究

目的:研究木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物的抗氧化特性.方法:测定不同酶解时间下的酶解液的抗氧化性;用葡聚糖凝胶分离活性肽段并测定其抗氧化性.结果:在酶用量6 000 U/g 底物、底物质量分数3%、pH7.5、温度55℃的酶解条件下酶解210 min,酶解液的抗氧化活性较高,0H·清除率55.43%,O2-·清除率64.23%,DPPH·清除率79.32%,总抗氧化能力98.74%单位/mL;通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照,木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性多肽的分子质量主要集中在1321～607 Da,该分子质量片段活性多肽对0H·的清除率为42.26%,对02-·的清除率为57.33%,对DPPH·清除率为74.43%,总抗氧化能力88.43单位/mL.结论:木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白210 min时酶解液的抗氧化活性较高,抗氧化活性多肽分子质量主要集中在1 321～607 Da之间.