α-乙酰乳酸脱羧酶的磁性固定化条件研究

采用分散聚合法,在Fe3O4磁流体存在下,通过PVA分子单体共聚制备出磁性聚乙烯醇微球。微球粒径分布在2.5×10-2~5×10-2μm,其中3.7×10-2~4.1×10-2μm的微球占总微球的44%,制备微球粒径分布均匀。以磁性聚乙烯醇微球为载体,通过戊二醛交联法进行ALDC的固定化,制备固定化酶,并对其固定化条件进行了初步研究。结果显示,在酶固定化过程中,自由酶的添加量为20 mL/g微球,戊二醛的添加量为0.98%。在其固定化最佳条件下,制备的固定化ALDC的活力为65 180 U/g,而且其比活、活性回收率分别可达872.32 U/mg和42.33%。     

α-乙酰乳酸脱羧酶的3种固定化方法的比较

用磁性淀粉微球作为载体 ,采用溴化氰活化法、戊二醛交联法及物理吸附法固定化α 乙酰乳酸脱羧酶 (ALDC) ,并对它的理化性质进行了对比 ,得到的结果是戊二醛交联法固定法ALDC的各种理化性质最为理想 ,它的总活力为 1 660U/g ,蛋白载量为 1 2 3 .1 7mg/ g ,比活为 1 6.4 8U/mg ,活性回收率为 1 4 .92 %。它的催化最适温度为 3 0℃ ,最适pH为 5 ,连续 1 0次催化底物后其活力仍保持 77.2 % ,且其半衰期为 2 1 6d。     

磁性β-环糊精聚合物微球的制备及表征

制备了可用作靶向药物载体的磁性β-环糊精聚合物微球.以环氧氯丙烷为交联剂,使β-环糊精包裹在Fe3O4表面上,制得了磁性β-环糊精聚合物微球.用正交实验法确定磁性微球的最佳制备条件:搅拌速度500 r/m in;OP浓度,w=4%;β-CD 8 g;环氧氯丙烷35mL.最佳条件下磁性微球的粒径和Fe3O4含量(质量分数)分别为1.62μm、72.3%,磁响应性较强,磁化率为8.56×10-4cm3/g.同时采用TEM、IR、XRD对磁性微球结构进行了表征.     

Fe_3O_4磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

研究了磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶,旨在增加脂肪酶的重复利用率.利用悬浮交联法制备出粒径为40~60μm的磁性壳聚糖微球,微球经接枝、叠氮化修饰后用于固定化脂肪酶.通过响应面法考察反应条件对固定化酶的影响,得出最优固定条件:酶浓度4 mg/mL,反应时间8.4 h,反应温度39.3℃,pH值为7.0.结果表明,最优条件下载体微球实际载酶量为64.4 mg/g,与预测值相接近,证明该方法可以用于固定化脂肪酶.     

磁性壳聚糖微球固定化漆酶催化肾上腺素

用交联法制备磁性壳聚糖微球，对微球的形貌和结构进行表征和分析，结果表明：微球呈规则的球形，分散比较均匀，粒径在3μm左右。磁性粒子矫顽力为210．6A／m，接近超顺磁性。以戊二醛为交联剂，将漆酶固定在此磁性壳聚糖微球表面，分别研究了该固定化漆酶和游离漆酶催化肾上腺素的性质。结果表明：固定化漆酶催化肾上腺素的最适温度为55℃，比游离酶升高了10℃，最佳pH值为5．2，游离酶为5．0。在60℃下保温300min后，固定化酶的催化活性仍保持为原来的75％以上，而在相同条件下游离酶仅保持为原来的10％。固定化酶连续催化肾上腺素10次以后．催化活性仍保持为原来的85％。     

α—乙酰乳酸脱羧酶的3种固定化方法的比较

用磁性淀粉微球作为载体，采用溴化氰活化法、戊二醛交联法及物理吸附法固定化α－乙酰乳酸脱羧酶（ALDC），并对它的理化性质进行了对比，得到的结果是戊二醛交联法固定法ALDC的各种理化性质最为理想，它的总活力为1660U／g，蛋白载量为123.17mg/g，比活为16.48U/mg，活性回收率为14.92％。它的催化最适温度为30℃，最适pH为5，连续10次催化底物后其活力仍保持77.2％，且其半衰期为216d。     

磁性壳聚糖表面离子液体固定化及其对丙烯酰胺吸附性能研究

以Fe3O4作为磁性纳米粒子,悬浮交联法制备磁性壳聚糖微球;以戊二醛作为交联剂在磁性壳聚糖微球表面固定离子液体;利用紫外分光光度法研究磁性壳聚糖固定化离子液体对丙烯酰胺的吸附性能.吸附动力学实验表明：2 h吸附容量为1.45 mg/g,3 h吸附基本达到平衡.结果显示：制备的磁性壳聚糖固定化离子液体对丙烯酰胺具有良好的吸附性能.     

壳聚糖微球固定化脂肪酶催化性质研究

以壳聚糖微球为载体制备固定化脂肪酶制剂并研究其催化性质.首先,制备壳聚糖微球,用2%醋酸溶液溶解壳聚糖,以液体石蜡为分散剂制成壳聚糖微球;然后,通过戊二醛交联制备固定化脂肪酶制剂,并研究其催化性质.结果表明:壳聚糖微球在2%戊二醛浓度下常温下交联9 h,脂肪酶固载率可达60%.与游离脂肪酶相比,壳聚糖微球固定化脂肪酶的最适底物、最适p H值及最适温度分别转变为4-硝基苯基辛酸酯,p H 8.57及50℃.固定化脂肪酶重复实验6次后仍保留有47.7%的催化活性,置于60℃下4 h酶活保留73%,其金属离子K+和Mg2+最适浓度分别为0.15 mol/L,0.10 mol/L.     

纸纤维固定木瓜蛋白酶的研究及应用

利用纸纤维为载体,制备高活性的固定化木瓜蛋白酶并应用于抗HCG抗体的水解.利用戊二醛交联法,制备固定化木瓜蛋白酶,并通过一系列优化,得到最佳固定化条件,包括pH﹑给酶量﹑温度﹑戊二醛体积分数,将制备的固定化木瓜蛋白酶应用于抗HCG抗体水解并制备F(ab′)2片段.研究表明:反应温度为40℃时,固定化酶在pH 5.0,0.01mol/L的醋酸缓冲液条件下,给酶量为46mg/g载体,戊二醛体积分数为0.01%时,固定化酶的酶活达到最高19 250U/g,相对于优化前1 940U/g提高了近10倍,成功应用于抗HCG抗体水解制备F(ab′)2片段:经SDS-PAGE电泳检测,F(ab′)2片段达到电泳纯.ELISA反应检测表明:片段仍保留较高的活性,效价为1∶12 000.     

响应面法优化固定化碱性蛋白酶工艺

采用多孔壳聚糖微球吸附和戊二醛交联的方法,将碱性蛋白酶固定于壳聚糖上.在pH、加酶量、温度、戊二醛体积分数和固定化时间5个单因素试验的基础上,利用响应面分析法对固定化碱性蛋白酶的工艺条件进行了优化.结果表明:在pH 9.20、加酶量7 512 U/g、固定化温度44.58℃、戊二醛体积分数0.20%、固定化时间8.11 h的最佳工艺条件下,酶的回收率高达56.73%.     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶的研究

以纳米级磁性壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂固定化脂肪酶,对固定化脂肪酶条件进行优化,同时对固定化脂肪酶的理化性质、活性回收率、热稳定性和储存稳定性进行研究.结果表明,固定化脂肪酶的最佳时间为7 h,最佳pH为8,最佳温度为50 ℃,最佳酶加量为每100 mg磁性微球加酶10 mg.和自由酶相比,脂肪酶被磁性壳聚糖固定...     

戊二醛交联壳聚糖球固定化脲酶的制备

在微波辐射下以戊二醛为交联剂,将壳聚糖球交联引入醛基,然后将交联的壳聚糖球浸泡在脲酶溶液中24 h,制备了壳聚糖球固定化脲酶,其酶比活为10.83 U.g-1载体。最优固定化条件是戊二醛的体积分数φ(GA)1%,脲酶与湿壳聚糖球的质量比m(E)∶m(CB)为0.01,固定化时间为24 h,固定化所用溶液的pH值为6.5。研究表明,固定化脲酶具有良好的重复使用性和贮存稳定性。戊二醛交联壳聚糖球可作为酶固定化的优良载体。     

正交设计优化酵母RNA的磁性固定化条件

以纳米级磁性壳聚糖微球为载体、戊二醛为交联剂,固定化酵母RNA。以反应体系中的总磷含量和无机磷含量的对比,进行正交设计,对酵母RNA的磁性固定化条件进行优化。结果表明,酵母RNA磁性固定化最佳反应时间为4h,最佳反应温度为40℃,最佳反应pH为5.5,最佳RNA添加量为20mL(2mg/mL),最佳戊二醛添加量为100μL(质量分数为50%)。     

啤酒酵母RNA提取条件的优化及其磁性固定化

通过浓盐法对啤酒酵母RNA进行提取,以磁性壳聚糖微球为载体,戊二醛交联法对RNA进行磁性固定化。通过比较反应体系中的无机磷和总磷的质量分数,对RNA的提取条件和固定化条件进行优化。结果表明,RNA提取温度对提取率的影响最为显著;在提取时间4h、提取温度100℃、氯化钠质量分数为10%和酵母质量分数为8%的最优条件下,RNA提取率达到6.13%。戊二醛交联法磁性固定化RNA的最佳条件为:反应时间4h,温度40℃;RNA最佳添加量为30mL(质量浓度2mg/mL)。     

磁性PF微球的制备及性质

运用缩合聚合法制备出PF凝胶，并在此基础上以共沉淀法合成出磁性PF微球，该微球呈珠状，平均粒径为10-20nm，具有较大的蛋白质固载量，可作为载体对多种酶及蛋白质加以固定。结果表明：当PF凝胶的制备条件为：对笨二酚11．1g、甲醛30mL和盐酸4mL时，所制PF凝胶的蛋白固载量最大；当磁性PF微球的制备条件为：PF凝胶添加量2g，pH值在3—4之间，固定时间2h，磁性PF微球能取得最高的蛋白固载量，同时研究了磁性PF微球的磁学性能。     

磁性固定化纤维素酶的交联法制备及其磁致酶学性质

以磁性壳聚糖微球为载体,采用交联法制备磁性固定化纤维素酶.分别研究了活化剂乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)与戊二醛的活化时间及活化温度对酶固载量的影响.比较磁性固定化纤维素酶与游离纤维素酶在外加磁场作用下,其酶活力的变化.结果表明,磁性固定化纤维素酶的酶活受磁场作用影响较小;当磁场强度<500 mT与曝磁时间<60 min时,游离纤维素酶的酶活随着磁场强度与曝磁时间的增加而增加,但超过这范围,酶活就急速下降.     

壳聚糖／明胶磁性微球的反相悬浮乳液包埋法制备研究

在油包水（W／O）体系中,采用反相悬浮乳液包埋法,以戊二醛为交联剂,实现了壳聚糖和明胶（Gs／Gel）微球对Fe304磁性粒子的包裹．其制备的磁性微球粒径在3～8μm范围,分散性和磁响应性良好;磁性微球可较好地吸附BSA和亲和层析兔抗β-CNIgG,对后者的吸附率在48h稳定后可达到42．75％,为实验室制备高质量免疫磁性微球奠定了基础．     

Fe3O4磁性纳米粒子固定化胰蛋白酶

以Fe3O4@mSiO2@nSiO2介孔材料为载体,γ-氨丙基三乙氧基硅烷接枝,戊二醛交联,研究胰蛋白酶的固定化及其在蛋白酶解中的应用。对蛋白酶固定化条件的优化研究表明,φ（戊二醛）=1.875%、给酶量为0.3 mg/mL、反应时间为4 h时酶的固定化效率可达50.5%,且保持77.3%相同含量酶的活性。对牛血清蛋白的酶解实验表明,在微波辅助作用下,磁性微球材料固定化酶可快速高效地酶解牛血清蛋白,酶解液在λ=280 nm处有较明显的吸收信号变化,HPLC分析表明酶解液中多肽片段吸收值变化明显,同时有新的多肽片段生成。     

微米级壳聚糖微球的制备

利用液体石蜡作有机分散介质、戊二醛作交联剂,通过反相悬浮交联法制备了微米级壳聚糖微球,并研究了反应条件对壳聚糖微球制备的影响。结果表明,壳聚糖溶液质量分数为4.5%、液体石蜡和壳聚糖溶液两相体积比1∶1.5、Span-80在油相中的质量浓度为9.0mg/mL、戊二醛和壳聚糖溶液体积比1∶20、搅拌转速大于800r/min时,SEM表明所制备产物是粒径10μm的壳聚糖微球。壳聚糖微球对活性物质具有一定的吸附能力。     

含锰磁性纳米粒子固定脂肪酶的研究

用无皂乳液聚合制备了P(AM-co-St)-Mn(Ⅱ)磁性高分子纳米微球,在此基础上通过共价键合固定脂肪酶。结果表明,固定脂肪酶后的磁性纳米微球具有优异的磁分离能力;锰离子对固定化酶有明显的激活作用,当锰离子质量分数为1.4%时,偶联率和活力回收率分别提高88%和71%;脂肪酶被固定化后其pH稳定性比自由酶明显提高。