基于SSR分子标记的部分烤烟种质资源遗传多样性研究

为准确评价部分烟草种质资源的遗传多样性,利用42对已发表多态性较好的烟草SSR标记引物对38份烤烟种质资源进行分析,筛选出22对引物在这些种质间存在多态性,平均等位位点数为3.68个,Nei's多样性指数平均为0.451,Shannon信息指数平均达0.789。UPGMA聚类分析表明,红花大金元有明显特异性。遗传结构分析显示,参试材料可分为2个类群,类群1和类群2分别包含16份和22份种质材料,且类群1变异范围大于类群2,类群2材料多表现为自然株高在210 cm以下,叶数20~25,茎围10~11 cm,田间赤星病较严重,青枯病发病相对较轻。研究结果为提升SSR分子标记筛选效率和部分烤烟种质创新应用提供理论依据。     

云南烤烟品种资源的收集与分类研究

对云南省收集编目的291份烤烟种质资源材料,依据来源、品种类别筛选出104个烤烟品种。应用计算机系统对104个国内外烤烟品种的14个性状进行聚类分析,形成了烤烟品种的系统分类。烤烟可分为4个品种群和6个品种亚群。Ⅰ.优质烟品种类群(内含2个品种亚群,39个品种);Ⅱ.低烟碱多叶品种类群(内含13个品种);Ⅲ.低糖高蛋白品种类群(内含13个品种);Ⅳ.高糖碱比品质欠佳类群(内含4个品种亚群,39个品种)。      

烟草种质资源遗传多样性与群体结构分析

发掘优良基因,为改良烟草品种提供理论依据。采用ABI-3500xl遗传分析仪对87份烟草种质材料进行多态性检测。在87份烟草种质中,41对SSR引物共检测出241条多态性位点,平均为5.88个位点。遗传相似系数为0.47~0.91,PIC值为0.23~0.91,平均为0.63。群体结构分析表明,当K=2时,△K值最大,即87份烟草材料可划分为2个类群P1和P2,P1类群又可划分为5个亚类,P2类群可划分为2个亚类。烟草种质资源遗传多样性丰富,群体结构划分与种质类型不完全相关。     

同科植物SSR引物在烟草遗传差异分析中的应用研究

为丰富分子标记类型,加速烟草种质资源遗传多样性的研究利用,从番茄、辣椒的SSR引物中选择22对SSR引物,用遗传差异较大的14个烟草材料筛选引物,应用筛选出的引物对24份烤烟材料进行扩增,分析其遗传差异性。22对SSR引物中筛选出8对重复性好、多态性高的引物。8对引物在24份烤烟材料中共检测到98条遗传多态性带,引物多态信息量变化范围为0.451～1,平均0.646。品种间的遗传相异系数变异范围为0.3445～0.8626,平均0.6052。引物9扩增的谱带可把24个品种完全区分开。在遗传距离为0.62水平可将24份材料聚为四大类,其聚类结果与实际亲缘关系基本一致。因此,同科植物的SSR引物能较好地从分子水平上揭示烟草种质资源遗传背景和亲缘关系,可以应用于烟草品种资源的遗传差异分析。     

利用DH群体构建烤烟分子标记遗传连锁图

以烤烟品种SpeightG-28和NC2326杂交得到的137个DH系为作图群体材料,通过ISSR和RAPD标记的遗传连锁分析,构建了包括27个连锁群、由10个ISSR标记和147个RAPD标记组成的烤烟分子标记遗传连锁图。该图谱覆盖长度1838.2cM,平均图距14.1cM。连锁群上有22个分子标记表现偏分离,其中10个集中在连锁群LG9上,其余分散在不同连锁群。这是国内外构建的第一张烤烟分子标记遗传连锁图,为烤烟性状的基因定位及分子标记辅助选择奠定了良好基础。      

江苏中烟核心原料产区烤烟品种遗传分析及分子身份证构建

烟叶原料的稳定性、一致性是保障烟草工业公司产品高质量发展的关键，有效区分和鉴别烟叶原料是当前工业公司亟需解决的难点。本研究以江苏中烟核心原料产区主栽的23个烤烟品种为材料，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，从212对SSR引物中最终筛选出12对多态性高且条带清晰的引物，等位基因数介于2～5，多态性信息含量介于0.333 8～0.571 1。聚类分析发现，各品种按照遗传背景聚为4类；群体遗传结构和主成分分析均将供试材料划分为2个亚群，且类群内各品种的分布结果高度一致，与种质亲缘关系吻合度较高。该组引物高效可靠，可用于烤烟品种的DNA指纹图谱构建和遗传多样性分析。本研究可为江苏中烟核心产区主栽烤烟品种的育种利用和烟叶原料鉴定提供理论依据。     

云南品牌卷烟主体烟叶原料的ISSR多态性分析及标记

为考察云南品牌卷烟主体烟叶原料的遗传多样性,从27个ISSR引物中筛选出7个引物,分别在17份烟草材料中进行PCR扩增。结果显示,能够产生40条稳定的条带,其中多态性带28条。通过UPGMA聚类分析,将17个烤烟品种分为2类。品种间遗传相似指数范围为0.50~1.00。同时,利用1个多态性强的ISSR引物、通过聚丙烯酰胺凝胶可以将这17份烤烟材料区分开,每个品种均有各自独特的指纹图谱,表明ISSR标记适于烟草品种鉴定和遗传多样性分析。     

烤烟品种的RAPD分析

利用RAPD标记研究了29个烤烟品种的分子指纹和遗传关系。100个随机引物经10个品种筛选,选出18个随机引物对29个品种基因组DNA进行扩增,得到了29个烤烟品种的分子指纹图谱,参照这些图谱,可对不同烤烟品种进行真实性鉴定。以扩增到的79条多态性DNA片段为基础计算29个品种间遗传相似系数,利用UPGMA法作聚类图,可将参试品种分为3个类群。云南省主栽品种K326与近年选育的品种V2、云烟85、云烟317等被归为一类,遗传基础过于狭窄,建议选用一些遗传关系较远的品种进行亲本选配、品种布局;北方烟区主栽品种NC89、地方品种净叶黄及G140等则归为另一类。      

油菜杂种及亲本指纹图谱构建和杂种纯度鉴定

利用SSR分子标记技术对43份贵杂系列甘蓝型杂交油菜品种(组合)及亲本材料进行研究,筛选出了一批在贵杂系列亲本和杂种上具有较高多态性的SSR引物,构建了贵杂系列油菜亲本及杂交组合的指纹图谱.通过对24份甘蓝型油菜的SSR分析,从100对SSR引物中筛选到21对多态性很强且极易识别的引物,从中筛选出4对核心引物(Na12C06、Na10B04b、0110A05、Na10D03),构建了贵杂系列常用油菜亲本的指纹图谱;对这些亲本组配的19个杂交组合进行SSR分析,从100对引物中筛选到22对适合油菜杂交种的多态性引物,从中选取4对核心引物(Na12C06、Na10D03、Na10E02c、0110A05),构建了贵杂系列常用油菜杂交组合的指纹图谱;利用核心引物组合扩增的方法,可以鉴定油菜杂交组合及其亲本的真实性和纯度.     

抗TMV烤烟育种高世代材料的分子标记辅助选择

为建立烟草抗TMV分子标记辅助选择育种体系,加速抗TMV烤烟品种的培育,以优质但易感TMV的烤烟品种K326为受体亲本,以抗TMV烤烟育种材料CV87为供体亲本,通过多次回交和自交,并结合分子标记辅助技术把来源于CV87抗TMV的N基因导入到优质易感TMV的烤烟品种K326中。结果表明,在293份BC_2S_3高世代材料(K326×CV87)中,有108份材料含有抗TMV的N基因。其中,107份材料抗感分离比的P值0.05,即这107份材料的N基因型为显性纯合。因此,烟草抗TMV分子标记辅助选择育种体系可靠性高,能提高烟草抗TMV的育种效率。     

中国莲子种质资源遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD标记对收集自全国不同地区的22个莲子(NympheaceaeNelumboAdans)栽培品种及野生品种的遗传多样性进行了分析。结果表明:筛选出的14个随机引物扩增出109条DNA指纹谱带,其中83条为多态性片断,为总数的76.1%。应用PhylTools统计数据软件进行差异条带的遗传距离系数分析,构建遗传距离系数矩阵,然后用PHYLIP软件包(版本3.573c)非加权配对算术平均法(UPGMA)进行聚类分析并绘制聚类树状图,供试品种可以划分为五大类,其中江苏水选1号、建宁莲3号、建瓯莲分别单独为一类,其它19种聚为二类。从中可看出品种间的遗传距离与收集地区没有直接的关联,该研究为莲子育种提供重要的信息。     

RAPD标记在烟草研究中的应用

随机扩增多态DNA(Randomly Amplified Polymorphic DNAs,RAPD)分子标记技术的诞生,为分子生物学技术在农业研究中的应用注入了新的活力,并为传统农业研究向分子水平发展提供了捷径。本文重点综述了RAPD分子标记技术在烟草群体分离分析和鉴定、标记辅助选择、遗传变异的识别、烤烟品种分子指纹分析、黑胚病菌全基因组DNA多态性标记、根结线虫种类鉴定、赤星病菌的分类地位等方面的研究进展,以及这些领域的研究发展和应用前景。      

高烟碱烤烟种质资源再鉴定及遗传多样性分析

低糖、高烟碱烟叶对降低卷烟焦油和提高卷烟劲头、香气至关重要,也是电子烟、口含烟等新型烟草制品的重要原料。为筛选高烟碱烤烟种质资源,对国家烟草种质资源中期库30份原标记为高烟碱的烤烟种质资源进行了化学成分再鉴定,筛选得到春雷一号、毕金一号、8100、I-35、广东黄（1）、辽烟十四号和NC729共7份高烟碱、低糖种质。同时基于农艺性状和化学成分等表型性状对30份高烟碱种质材料进行遗传多样性分析表明,供试种质数量性状的变异系数为12.79%~44.60%,遗传多样性指数为1.97~2.35,具有较高的遗传多样性。对表型数据进行主成分分析和聚类分析,将供试群体聚类成5个类群,每个类群的种质均具有显著的表型特征,其中类群Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ可作为低糖、高烟碱品种的候选群体。     

双孢蘑菇RAPD标记的遗传多样性分析

随机抽取108个随机引物对40个双孢蘑菇栽培菌株的DNA进行RAPD-PCR扩增实验,发现有71个随机引物能够扩增出清晰的、稳定的、具有多态性的RAPD条带。结果表明,71个随机引物共扩增出567条DNA带,平均每个引物扩增出7.99条DNA带,其中434条DNA带具有多态性,占总数的76.5%。基于RAPD-PCR扩增资料,采用欧氏距离平方系数和组间连接法,应用SPSS 11.0软件进行聚类分析,探讨40个品种间的亲缘关系与类群划分。当取欧氏距离平方系数阈值为20.5时,所有品种分为三大类;当取欧氏距离平方系数阈值取8.5时,40种双孢蘑菇菌株可被分为6个类群,此结果与双孢蘑菇菌株群的同工酶分类研究结果相当吻合。     

烟草RAPD反应体系优化及品种多态性标记研究

利用鲜烟叶材料对RAPD反应体系进行了优化,建立了一个适合烟草的比较稳定的RAPD反应体系,并对影响RAPD反应的主要因素进行了探讨.利用该稳定体系,对具有两对相对性状差异的两个烤烟品种进行了多态性标记研究,从500个引物中筛选到4个有多态性的引物,这4个引物扩出的多态性片段可作为鉴定两个品种的分子标记.初步分析认为,两个品种的多态性标记可能与香气性状和抗病性状连锁.     

钝裂银莲花居群遗传多样性及其与生态因子相关性

采用RAPD技术分析了4个地区(合作、碌曲、玛曲、阿孜)不同花色(黄、浅、白)11个钝裂银莲花居群的遗传结构。结果表明:钝裂银莲花居群遗传多样性较高,Shannon多样性指数(I)为0.6025,Nei’s基因多样性指数(H)为0.4166,Nei’s基因分化系数(Gst)和AMOVA分析表明钝裂银莲花居群间分化程度较低,大部分变异存在于居群内(67%),居群间占一小部分(33%)。对不同居群进行UPGMA聚类分析,结果显示11个亚居群可以归为3大支。相关性分析表明遗传多样性与地理分布和土壤营养状况有相关性。      

烤烟品种的RAPD引物筛选

本试验筛选出了45个引物,可产生遗传多样性,其中OPA-08、OPA-16、OPC-10、OPC-12、GENMES'S 36号、78号、112号、181号引物其扩增结果稳定性好、多态性强。这些引物的RAPD扩增结果都可作为烟草烤烟品种的遗传多样性分析、基因定位及分子标记等。经凝胶电泳比较,GENMED'S 36号引物可作为烟草品种的最适宜的引物;1.8kb条带被初步认为与抗黑胫病基因相关。这些结果为以后对烟草烤烟品种在分子水平上的研究奠定了基础,加速烟草烤烟品种分子水平上的研究进程      

RAPD在灰平菇菌株亲缘关系研究中的应用

采用RAPD技术分析了5个不同来源的灰平菇栽培菌株的DNA多态性。筛选出的8条随机引物共扩增得到107条带,其中多态性片段为69条,多态性比率为64.4%,说明收集到的灰平菇菌株具有一定的遗传多样性,它们之间存在一定的遗传差异。进一步聚类分析结果显示,当相性达到0.470的水平时,5个菌株聚成2组,第1组为1号(PL-72)、2号(PL-2)、3号(烟平2106)、4号(PL-A2);第2组为5号(PL-AD28)。当相似性达到0.570的水平时,第1组又被分为两个亚组,1号和3号菌株聚为一个亚组,而2号和4号菌株聚为一个亚组。本研究为灰平菇优良品种选育和亲缘关系的研究提供分子生物学依据。