发酵法生产衣康酸技术的研究—衣康酸生产菌株的选育（I）

以实验室保藏菌种土曲霉No.201为出发菌株，经餐外线，亚硝基胍（NTG），高温，硫酸二乙酯（DES）诱变处理和多次分离获得一支性能稳定的衣康酸高产突变株土曲霉HAT418，36℃摇瓶发酵72h，衣康酸产量72.1g/L，糖酸转化率60.08%，发酵条件优化后，在含糖120～160g/L的培养基上，产酸81.4～101.1g/L，糖酸转化率63.18%～67.83%，发酵液经高压液相色谱分析，衣康酸占总酸的98.6%。     

发酵法生产衣康酸技术的研究（Ⅰ） 衣康酸生产菌株的选育

以实验室保藏菌种土曲霉No．201为出发菌株，经紫外线、亚硝基胍(NTG)、高温、硫酸二乙酯(DEs)诱变处理和多次分离荻得一支性能稳定的衣康酸高产突变株土曲霉HAT418，36℃摇瓶发酵72小时，衣康酸产量72，1g/L，糖酸转化率60．08％。发酵条件优化后，在含糖120—160g/L的培养基上，产酸81．4—101．1g/L，糖酸转化率63．18—67．83％。发酵液经高压液相色谱分析，衣康酸占总酸的98．6％。     

发酵法生产衣康酸技术的研究——衣康酸发酵工艺条件的研究(Ⅱ)

以衣康酸高产菌株土曲霉HAT418为出发菌株 ,研究探讨了不同碳源、氮源、无机盐类以及温度、起始 pH值等因素对衣康酸发酵的影响 ,确定了较优培养基组成和发酵工艺条件。实验结果表明 ,土曲霉HAT418适合于多种原料的衣康酸生产 ,如玉米淀粉、山芋粉、低脂玉米粉、蔗糖、口服葡萄糖等 ;硝酸铵、硫酸铵是衣康酸发酵的最适氮源 ,玉米浆是必要的辅助氮源 ;适宜的发酵起始pH值在 2 5～ 3 0 ;适宜的发酵温度为 3 6～ 3 7℃ ;Mg2 + 对土曲霉HAT418菌株的衣康酸发酵影响显著 ,适量的Mg2 + 是衣康酸发酵必需的 ;Ca2 + 可抑制杂酸的形成 ,培养基中添加 0 1g/L的CaCl2 可以使发酵液中衣康酸占总酸的比例提高 1 2 3 %。土曲霉HAT418菌株以 12 0～ 160 g/L的玉米淀粉双酶水解糖为碳源 ,NH4NO3 为主要氮源 ,摇瓶发酵 80h左右 ,衣康酸产酸率达到 83 0～10 1 1g/L ,糖酸转化率为 63 13 %～ 69 17% ,发酵残糖为 0 9～ 9 7g/L。     

淀粉水解程度对土曲霉发酵生产衣康酸的影响

将玉米淀粉进行酸水解和酶水解,水解液作为土曲霉At394的碳源进行发酵.水解程度直接影响到衣康酸产量,适宜水解糖的DE值为35%.发酵培养基配方为淀粉液化水解糖(DE值为35%)100g/L,NH4NO3 3g/L,MgSO4·7H2O 4g/L,玉米浆2g/L,KH2PO4 0.2g/L,pH3.0.在最适条件下,摇瓶发酵衣康酸产量可达54.1 g/L,糖酸转化率为59.2%.     

发酵法生产衣康酸——高产菌株的选育

以生产使用菌种土曲霉NLYT234为出发菌株,经紫外线、高温、氯化锂诱变处理和多次分离、筛选获得一支性能稳定的衣康酸高产突变株土曲霉NLYT-2—801,在含淀粉糖140g／L的培养基上40-42℃摇瓶72hr,衣康酸产量92．1g／L,糖酸转化率63．18％-67．83％。经100m^3发酵罐生产验证,菌种诱变后酸度较以前上升21％,糖酸转化率上升一个百分点以上。     

发酵法生产衣康酸的工艺条件研究

以土曲霉TN-474为出发菌株,研究探讨了衣康酸发酵工艺条件对产酸的影响。通过试验优化培养基组成及发酵条件为:工业葡糖140g/L,NH4NO33.0g/L,玉米浆干粉0.2g/L,KH2PO40.05g/L,MgSO4.7H2O 0.5g/L,CuSO4.5H2O 65mg/L,初始pH2.0,接种量为10%~12%,装液量为60mL~80mL;在37℃、220r/m in的条件摇瓶发酵144h,土曲霉TN-474发酵衣康酸的产率达到71.83g/L,转化率为56.7%。     

蔗汁直接发酵生产衣康酸的研究

研究了用土曲霉发酵蔗汁生产衣康酸.在蔗汁锤度为10Bx,生长促进剂(微量元素)为0.5%,pH为3.0,发酵4d的条件下,最高产酸率为3.08%,最高糖酸转化率为59.69%,该结果可为进一步研究作参考.     

农用废弃物固态发酵生产衣康酸工艺研究

以土曲霉AS32811为发酵菌种,农用废弃物麸皮7.5g,玉米芯6.0g为出发培养基,在自然pH值条件下采用单因素试验研究碳源、氮源、无机盐对衣康酸产酸效果的影响。结果显示,该菌可以利用实验所选择的碳源生产衣康酸,葡萄糖为碳源时得率最高;氮源实验结果表明,NH4NO3是最适的产酸氮源。在单因素试验的基础上进行了五因素四水平的正交试验以优化产酸工艺。衣康酸生产的优化条件为:250mL三角瓶中加入玉米芯7.5g、麸皮6.0g、葡萄糖4g、营养液25mL(NH4NO3,4g/L;KH2PO4,0.1g/L;MgSO4,6g/L;C6H12O6,4g;ZnSO4.7H2O,0.015g/L),接种量为1mL(1×107孢子/mL)、温度36℃、湿度为65%条件下自然发酵72h,衣康酸产率可达63.5%。以土曲霉AS32811为发酵菌种,农用废弃物麸皮7.5g,玉米芯6.0g为出发培养基,在自然pH值条件下采用单因素试验研究碳源、氮源、无机盐对衣康酸产酸效果的影响。结果显示,该菌可以利用实验所选择的碳源生产衣康酸,葡萄糖为碳源时得率最高;氮源实验结果表明,NH4NO3是最适的产酸氮源。在单因素试验的基础上进行了五因素四水平的正交试验以优化产酸工艺。衣康酸生产的优化条件为:250mL三角瓶中加入玉米芯7.5g、麸皮6.0g、葡萄糖4g、营养液25mL(NH4NO3,4g/L;KH2PO4,0.1g/L;MgSO4,6g/L;C6H12O6,4g;ZnSO4.7H2O,0.015g/L),接种量为1mL(1×107孢子/mL)、温度36℃、湿度为65%条件下自然发酵72h,衣康酸产率可达63.5%。     

衣康酸生产工艺条件优化研究

利用正交试验法对土曲霉发酵生产衣康酸工艺条件进行研究,获得了较优越的工艺条件,使衣康酸得率提高到43.8g/L。     

衣康酸生产工艺条件优化研究

利用正交试验法对土曲霉发酵生产衣康酸工艺条件进行研究,获得了较优越的工艺条件,使衣康酸得率提高到43.8g/L。      

马铃薯淀粉产衣康酸发酵培养基的优化

以马铃薯淀粉为原料,利用土曲霉XL-6发酵生产衣康酸,并对发酵培养基组分进行优化。在单因素基础上,采用Plackett-Bur-man设计法从诸多因素中筛选出显著因素,通过响应面分析方法对其进行优化,建立衣康酸产率的二次多项式回归模型。试验结果表明,在最佳发酵培养基:碳源浓度130g/L,玉米浆2.14g/L,MgSO4.7H2O 2.19g/L,KH2PO4 0.14g/L,NH4NO3 3g/L,FeSO4.7H2O 0.10g/L,衣康酸产率达到7.04%。验证试验的实测值与预测值基本一致,说明模型可较好的反映实际情况。     

两阶段搅拌转速控制策略发酵生产柠檬酸

采用3 L机械搅拌式发酵罐研究黑曲霉发酵生产柠檬酸的培养条件,考察了不同梯度的发酵转速对黑曲霉生长、柠檬酸产量以及残糖的影响。结果显示,在固定控制条件下,固定转速500 r/min时发酵情况最好,产酸均达到12.9 g/dL,糖酸转化率为86%,生物量为42.6 g/L。根据实验结果进行了两阶段转速控制发酵,结果产酸为14 g/dL,转化率94.6%。在此基础上进行了分批补料发酵优化,与两阶段搅拌转速控制分批发酵相比,柠檬酸产量(17.2 g/L)提高了22.8%,糖酸转化率(95.5%)提高了2.2%。     

100L罐中深层发酵生产L-苹果酸的研究

报道了温特曲霉 (AspergilluswentiiF- 891)发酵L- 苹果酸的工艺特点 ,在 10 0L罐上研究了通风量、温度、pH值及发酵培养基中富马酸浓度等因素对深层发酵富马酸生产L -苹果酸的影响。确定了最佳发酵条件 ,其中富马酸浓度 11% ,通风量 1∶1 0 5 (发酵前期 )～ 1∶1 2 8v/v/m(发酵中后期 ) ,温度 30℃ (发酵前期 )～ 2 5℃(中后期 ) ,初始pH值 6. 0～ 6 . 2 ;发酵周期 10 8h左右 ,富马酸平均转化率 83. 5 2 % ,平均产L 苹果酸 10 . 2 3%。     

蔗糖直接发酵衣康酸高产菌株的选育

本文工作以土曲霉NRRLl960为出发菌株，采用Co^60、紫外线、亚硝基胍、光敏试剂8—MOP处理等多种理化方法选育衣原酸高产菌株。所得菌株T730在含蔗糖10％的培养基中，于30～35℃在10L发酵随中培养约66h，产酸率达6．6％，糖酸转化率达66％。该菌株转化率高。稳定性好，具有很大的生产应用价值。     

融合子F3产衣康酸的培养基组成及摇瓶发酵条件的优化

对直接利用生淀粉发酵产衣康酸的融合子F3的发酵条件进行了研究。得到较佳培养基组成及发酵条件为:玉米淀粉110g/L,NH_4NO_3 3.0g/L,玉米浆2.5mL/L,MgSO_4·7H_2O1.5g/L,CuSO_4·5H_2O2.0 mg/L,初始pH3.0～3.5,摇瓶装液量80mL/500 mL三角瓶,接种量10%(种龄44h),34℃振荡(220r/min)培养140h。在此条件下,F3衣康酸产率达到45.3g/L,比优化前提高了4.4g/L;对供给淀粉的转化率达41.2%。     

光滑球拟酵母发酵生产丙酮酸的补料过程优化

为了提高1株光滑球拟酵母(Candida glabrata)高产突变菌株的丙酮酸产量和底物转化率,对发酵过程进行了系统优化。首先,对诱变筛选获得的7株菌株进行发酵验证,确定最佳菌株为C. glabrata 4H2。对种子培养基重要成分及浓度进行优化,确定最佳氮源为大豆蛋白胨,质量浓度为10 g/L。突变菌株在30℃条件下摇瓶发酵52 h,产量达到(48. 56±0. 46) g/L,生产强度为0. 93 g/(L·h),糖酸转化率为0. 46 g/g,比优化前分别提高了25. 0%、52. 5%和43. 8%。基于上述结果,在15 L发酵罐中进行发酵条件优化,确定了以初始葡萄糖质量浓度为80 g/L,当葡萄糖质量浓度剩余55 g/L时,恒速流加70 g/L葡萄糖的补料发酵工艺,最终丙酮酸的产量达到最高,为(86. 63±0. 29) g/L,较摇瓶水平提高了78. 4%,生产强度为1. 07 g/(L·h),糖酸转化率为0. 78g/g。研究表明,发酵过程优化强化光滑球拟酵母生产丙酮酸是一种有效的方法,该研究为进一步提升工业水平丙酮酸发酵性能奠定了基础。     

离子注入选育高产衣康酸菌株及其发酵条件优化研究

采用低聚氮离子束注入衣康酸生产菌株土曲霉ZJB－04173,获得一株衣康酸产量提高的突变株HA90,该菌株在出发培养基37cC℃。PLackett-Burman实验结果表明葡萄糖,硝酸铵和硫酸镁对菌种产酸有显著的影响。然后利用Box—Behnken设计及响应面分析确定这三个主要因素最佳浓度。在优化后的培养基中进行发酵,产酸量最高达到84g／L,比出发菌株提高了50％。     

3-磷酸甘油醛脱氢酶促进谷氨酸棒杆菌发酵生产L-精氨酸和L-鸟氨酸

在谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum) SNK118中表达NADP~+依赖型的3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因,提高胞内NADPH水平,以提高L-精氨酸(L-Arginine)和L-鸟氨酸(L-Ornithine)发酵产量。通过NCBI数据库检索,选取了3个不同来源的3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因。经测定酶活力,最终选择糖丁基梭菌(Clostridium saccharobutylicum) DSM 13864来源的NADP~+依赖型的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(Csgap C)。构建了产L-精氨酸的重组菌SNK118/p XMJ19-Csgap C,当摇瓶发酵70 h时产L-精氨酸11. 55 g/L,糖酸转化率0. 13 g/g,与对照菌SNK118/p XMJ19相比,精氨酸产量和糖酸转化率分别提高了26%和10. 2%。在L-鸟氨酸生产菌株SNK118Δarg FΔargR中重组表达Csgap C,重组菌SNK118Δarg FΔargR/p XMJ19-Csgap C摇瓶发酵70 h产L-鸟氨酸27. 76 g/L,糖酸转化率0. 274 g/g,与对照菌SNK118Δarg FΔargR/p XMJ19相比,L-鸟氨酸产量和糖酸转化率分别提高了20. 1%和15. 6%。结果表明,异源表达Csgap C有助于提高谷氨酸棒杆菌发酵生产L-精氨酸和L-鸟氨酸的水平。     

液体深层发酵法生产L-苹果酸的研究

以延胡索酸为原料，经^60Co诱变后获得优良菌株温特曲霉Aspergillus wentti F-891，在1000L罐中液体深层发酵生产L-苹果酸。试验研究了发酵过程中通气量、温度、pH值以及搅拌转速等因素对延胡索酸转化率、L-苹果酸产率的影响。结果表明，液体深层发酵生产L-苹果酸的最佳发酵工艺条件为：延胡索酸浓度11％，通气量1：0．8v／v／min（48h前）～1：1．20v／v／min（48h后），温度30℃（48h前）～25℃（48h后），初始pH值6．0-6．2，发酵周期96h-108h，搅拌转速200r／min；延胡索酸平均转化率83．07％，平均产L-苹果酸108．72g／L。     

二次接种叠加生物素的谷氨酸发酵工艺研究

由于受到发酵罐溶氧条件的限制,在高浓度生物素的谷氨酸发酵中往往出现产酸与糖酸转化率不协调的现象,针对这一现象,研究了二次接种叠加生物素的谷氨酸发酵工艺。在试验所用的发酵罐中,采用8.0μg/L生物素浓度的培养基作为发酵基础培养,经过一段时间发酵后,接入第二次种子液以及3.0μg/L(发酵液初始体积)的生物素量,通过适当的发酵控制,产酸水平达到139.6g/L,糖酸转化率高达62.80%,单罐谷氨酸产量比一次接种添加8.0μg/L生物素的发酵工艺提高了15.78%。