一株产L-木酮糖菌株的分离筛选及鉴定

通过初筛和复筛从土壤中分离获得1株能够转化木糖醇生产一种稀有糖--L-木酮糖的芽孢杆菌ZN-14。利用该菌株的静息细胞以20 g/L木糖醇为底物,在pH 9.0、37 ℃条件下转化24 h,转化率达到26.62%。通过对菌株ZN-14形态特征观察、生理生化特性鉴定以及16S rDNA基因序列同源性的分析,将其鉴定为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）。     

一株芽孢乳酸杆菌TQ33产芽孢特性及抗性的研究

报道了一株同型发酵乳酸杆菌ＴＱ３３的产芽孢特性及其它抗性，寻找到产芽孢的最佳培养基，获得了Ｋ￣＋、Ｎａ￣＋对ＴＱ３３菌芽孢的产生无明显的促进作用。Ｍｎ￣（２＋）在０．００５％～０．１０％范围内对芽孢的生成有明显的促进作用；ＴＱ３３菌对热、酸和高渗透压有较强的抗性。制成了含活菌数达１０￣７～１０￣８的小样。     

凝结芽孢杆菌发酵产L-乳酸的蛋白组学分析

采用3种碳源(葡萄糖、玉米淀粉糊化液和玉米淀粉)凝结芽孢杆菌BCS13002同步糖化发酵生产L-乳酸,并通过蛋白组学技术分析不同碳源条件下生产L-乳酸差异的生物学机制。结果表明:在葡萄糖、玉米淀粉糊化液和玉米淀粉3种碳源条件下同步糖化发酵,L-乳酸含量分别为(10.23±0.16) g/L,(11.75±0.20) g/L和(0.26±0.02) g/L,共鉴定出454个差异表达蛋白质,这些蛋白质主要与糖酵解/糖异生和三羧酸循环途径有关,还与HIF-1信号通路、丙酮酸代谢、碳代谢、泛酸和辅酶A生物合成、果糖代谢、双组分调节等途径有关。当玉米淀粉为发酵碳源时,凝结芽孢杆菌BCS13002几乎不能通过糖酵解/糖异生产生L-乳酸。导致L-乳酸产量不同的差异蛋白质主要与糖酵解/糖异生和三羧酸循环途径有关。     

凝结芽孢杆菌的筛选及发酵特性的研究

本研究探讨了六株凝结芽孢杆菌耐高温和高效利用玉米粉生产L-乳酸的特性。首先通过平板初筛后,获得了HL1、HL3、HL4、HL5四株菌。然后进行50、53、55℃发酵培养,结果表明HL5的温度耐受性更强。再以玉米粉糖化液为底物进行5L罐50℃分批发酵,发现HL5的L-乳酸产量、产率以及转化率均最高,分别为115g/L、3.59g/L/h、100.1%。基于上述结果,选择HL5作为适合的耐高温L-乳酸生产菌株。最后本文考察了HL5对玉米粉、木薯粉和纤维素来源糖化液的利用情况,它们的产酸速率分别为4.19、3.75、5.00g/L/h,说明HL5对三种来源糖类均能利用。因此,HL5为乳酸的工业生产提供了菌种基础。      

凝结芽孢杆菌的筛选及发酵特性的研究

本研究探讨了六株凝结芽孢杆菌耐高温和高效利用玉米粉生产L-乳酸的特性。首先通过平板初筛后,获得了HL1、HL3、HL4、HL5四株菌。然后进行50、53、55℃发酵培养,结果表明HL5的温度耐受性更强。再以玉米粉糖化液为底物进行5L罐50℃分批发酵,发现HL5的L-乳酸产量、产率以及转化率均最高,分别为115g/L、3.59g/L/h、100.1%。基于上述结果,选择HL5作为适合的耐高温L-乳酸生产菌株。最后本文考察了HL5对玉米粉、木薯粉和纤维素来源糖化液的利用情况,它们的产酸速率分别为4.19、3.75、5.00g/L/h,说明HL5对三种来源糖类均能利用。因此,HL5为乳酸的工业生产提供了菌种基础。     

一株产凝乳酶细菌的分离与鉴定

利用酪蛋白和麸皮培养基从奶牛场土壤中分离出高凝乳活力,低蛋白水解力的细菌.获得22株产凝乳酶细菌,其中菌株BB-23产凝乳酶活力高而蛋白水解活力低,经形态观察、生理生化和16S rRNA鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subalis),该菌株在麸皮培养基发酵72h后产凝乳酶活力达73.80SU/mL,蛋白水解力为16.01U.     

一株产细菌素乳酸菌的分离和鉴定

从市售3种酸乳中分离得到4株乳酸菌,通过发酵液的抑菌实验确定S1菌株为细菌素产生菌,综合S1菌株的形态学特征、生理生化特征将其初步鉴定为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis.)。在排除过氧化氢和有机酸对指示菌的抑制作用后,确定该菌株产生的抑菌物质为细菌素,该细菌素对大肠杆菌具有较好抑制作用。     

产高纯度L-乳酸大肠杆菌基因工程菌的初步研究

本文以鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)基因组为模板,扩增出L-乳酸脱氢酶基因ldh,将其连接到表达载体pSE380,转化到D-乳酸脱氢酶及丙酮酸甲酸裂解酶双缺失的大肠杆菌FMJ144中,摇瓶发酵得到3.5g/L的高纯度为99%的L-乳酸。     

产L-乳酸之乳杆菌的筛选

本研究通过平板划线法及乳酸发酵实验,从干酪及酸菜样品中分离筛选出二株具有较强产L-乳酸能力的乳杆菌。经糖发酵、生长温度、精氨酸发酵产氨、产硫化氢试验及细胞壁中二氨基庚二酸(DAP)成分分析,确认为干酪乳杆菌干酪亚种和干酪乳杆菌鼠李糖亚种。它们在葡萄糖85g/L,乳糖35g/L,酵母膏5g/L,蛋白胨10g/L,NaCl1.3g/L,K2HPO41.5g/L,MgSO4·7H2O0.33g/L,MnSO40.05g/L的培养基中,于37℃下培养48h,产L-乳酸的量分别达到56.50g/L和50.80g/L。     

应用基因工程改良L-乳酸菌株

以大肠杆菌、酵母茼、乳酸细菌和米根霉等具有代表性的乳酸发酵菌种为例，介绍了基因工程方法在提高L-乳酸产量度纯度等方面的研究进展及取得的成果。     

高产酸性脲酶菌株的分离、筛选与鉴定

为了筛选高产酸性脲酶菌株,通过酸性平板的初筛和中性平板的复筛,从土壤中分离到17株产酸性脲酶的菌株。通过比较它们所产酸性脲酶的活性,确定了产酶能力最强的菌株ZJU-5,发酵液中酸性脲酶活性可达(17.17±0.185)U/mL。为了了解该菌株的特性,通过生理生化方法及16SrDNA分子生物学方法对ZJU-5进行鉴定,结果表明ZJU-5为肺炎克雷伯氏菌。     

一株硫化物氧化细菌的分离、鉴定和脱硫效果初步验证

从无锡市某硫酸厂采集的土样中分离到一株具有硫化物氧化能力的细菌,对该细菌的16S rDNA序列进行测定,并根据16S rDNA构建了系统发育树.结果表明,TL-1与硫杆菌属有较高的同源性,与那不勒斯硫杆菌 (Thiobacillus neapolitanus) 同源性为95.3%,结合菌落、细菌形态鉴定菌株为硫杆菌属( Thiobacillus ),并命名为TL-1.同时,对TL-1的脱硫效率进行了初步研究.结果表明,在硫化物为惟一硫源且其质量浓度分别为60,120,180,240 mg/L时,4 h时硫化物去除率分别达到87.92%、71.25%、63.45%和13.31%.     

纤维素分解菌BSX5的分离、鉴定及产酶条件

利用透明圈法从袋装降解的笋干中分离到一株分解纤维素的细菌菌株. 该菌株呈长杆状、革兰氏染色为阳性、产芽孢,命名为BSX5.其生理生化特征和16S rDNA序列同源性分析,发现该菌株与Bacillus subtilis的同源性为99%,系统发育树分析与Bacillus subtilis遗传关系最近,确定该菌株为Bacillus subtilis. 采用以3,5-二硝基水杨酸（DNS）为显色剂、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）为底物,测定不同培养条件下BSX5菌株的酶活力,结果最适产酶时间为8-12 h,最适产酶温度为50 ℃,最适产酶pH值为5.5～6.5.     

腌虾蛄中优势乳酸菌的分离筛选与鉴定

从腌虾蛄中分离49 株疑似乳酸菌株,通过菌株的形态学观察和生理生化实验,初步筛选出L14、L22、L28这3 株乳酸菌菌株。再通过16S rDNA序列测定和分析进一步验证,结果表明,菌株L14与屎肠球菌（Enterococcusfaecium）的相似性达到99%,菌株L22与短乳杆菌（Lactobacillus brevis）的相似性达到98%,菌株L28与棒状乳杆菌扭曲亚种（Lactobacillus coryniformis subsp. torquens）的相似性达到99%。对3 株菌株的生长情况、产酸、耐温和耐盐等性能进行测定,结果表明,3 株菌株在24 h内生长情况OD600 nm值均超过1.0,测定24 h内菌株产酸pH值均在4.0左右,菌株L22最低可达到pH 3.97,3 株菌株在25～35 ℃之间生长性能良好,均能在食盐质量浓度为60 g/L的情况下正常生长。     

镇江肴肉中腐败菌的初步分离鉴定

分离镇江肴肉中腐败菌,并对主要菌株进行鉴定,为研究特定腐败菌的腐败原理,延长产品的保质期打下基础.利用纯培养的方法,根据细菌的菌落形态、菌落颜色、革兰氏染色等特征,从市售冷藏镇江水晶肴蹄中选取菌落形态差别比较明显的8株菌株,通过16S rDNA序列进行分类研究,确定各细菌所属种.试验结果表明:T-1为假单胞菌属的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens),T-2为希瓦氏菌属的渡罗的海希瓦氏菌(Shewanella baltica),T-3、P-1、P-2、V-1、V-2、V-3为拉乌尔菌属的解鸟氨酸拉鸟尔菌(Raoultella ornithi-nolytica)[从前的解鸟氨酸克雷伯氏茼(Klebsiella ornithinolytica)].     

基于16SrDNA的醋酸菌筛选及其发酵特性

醋酸菌是影响纯种液态酿醋效率的关键因素。为获得高质量浓度醋酸生产菌,本研究将常规筛选方法与分子生物学技术相结合进行优良醋酸菌的筛选。采用高质量浓度酒精和醋酸培养基富集,挑取醋酸菌膜初步分离目的菌;借助生理生化特征与16S rDNA保守序列分析方法鉴定并获得一株产酸高的巴氏醋酸杆菌JST-S(Acetobacter pasteurianus JST-S,BJST-S);在与沪酿1.01(Acetobacter pasteurianus HN 1.01)进行发酵特性对比研究时发现,BJST-S在生长速率、产酸速率及耐醇和耐酸等方面均优于沪酿1.01;半连续发酵3批次BJST-S的产酸量维持在58.10~59.68 g/L,发酵强度维持在1.21~1.24 g/(L·h),说明该菌产酸特性稳定。研究结果可为醋酸工业化生产以及优良菌株的选育提供一定的理论参考。     

产耐热普鲁兰酶菌株的分离、筛选与鉴定

从某火山口的土壤样品中分离筛选得到了一株产耐热普鲁兰酶菌株T-10,酶活力为1.22 U/m L。经形态特征观察、生理生化特征实验以及16S r DNA序列同源性分析,确定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。酶学性质研究表明:该普鲁兰酶的最适温度是60℃,在70℃保温4 h后活力残留60%以上;最适p H值为6.0,p H 3.0~8.0在室温保存4 h后相对酶活力大约为70%。目前,鲜有发现产耐热普鲁兰酶的菌株为解淀粉芽孢杆菌,其具备良好的应用前景。     

一株产纳豆激酶菌株的分离筛选及鉴定

对能产生纳豆激酶的菌群进行了筛选,分离得到了1株具有较高纤溶活性的菌株N391,其纳豆激酶相当于1722.4U/mL尿激酶的酶活。利用细菌16S rDNA通用引物对其16S rRNA进行PCR扩增,得到1511bp的片段,该PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过DNA MAN和MAGE3.1软件绘制系统发育树,结果表明,菌株N391的16S rRNA序列(DQ906100)与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的16S rRNA序列的同源性在99%以上,在系统发育树中,菌株N391与Bacillus subtilis在同一分支,且遗传距离最短。结合常规的形态、生理生化鉴定,N391的形态及大部分生理生化特征与Bacillus subtilis极为相似,表明菌株N391属于Bacillus subtilis的1个菌株,由此初步确定该菌在微生物系统发育学上的地位。     

一株产抗菌活性物质解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定

从菜园土壤中分离筛选到1 株产广谱抗菌活性物质的菌株K6,其抗菌活性物质对藤黄微球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、酿酒酵母、匍枝根霉和白色念珠菌均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑菌作用最强,对霉菌的抑制作用相对较弱。通过形态特征、16SrDNA 序列分析和系统发育分析,菌株K6 与B. amyloliquefaciens 位于同一簇群,同源性达99%,将其初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌。     

黄浆水中高产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及鉴定

经初筛、复筛,从黄浆水中筛得一株高产γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）的菌株,对其进行形态学及生理生化鉴定,并与GenBank上已提交的16S rDNA进行BLAST比对,结果表明,其归属于乳酸杆菌属（Lactobacillus）。由MEGA 6.0软件构建的系统发育树结果表明,该菌株与Lactobacillus plantarum 16S rDNA序列同源性达99%,且与生理生化实验结果一致,因此,确定该菌株为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,编号为LP-Dfa301,测得其发酵液中GABA产量为5.833 g/L。