冠突散囊菌子囊孢子破壁方法的研究

研究萌发破壁、研磨破壁、浸泡-温差-振摇破壁等方法对冠突散囊茵子囊孢子破壁效果的影响.结果表明:蒸馏水浸泡-温差-振摇法具有操作简单、经济适用、破壁率高(90.8%)的特点,是冠突散囊茵子囊孢子破壁的理想方法.     

冠突散囊菌子囊孢子粗多糖抗氧化活性的比较分析

采用超微粉碎法、超声波法、反复冻融-研磨法,对冠突散囊菌子囊孢子进行破壁处理,探讨不同破壁方法对孢子粗多糖抗氧化活性的影响。结果表明,破壁率由高至低依次为反复冻融-研磨法(93.73%)、超微粉碎法(82.27%)、超声波法(66.54%),粗多糖的提取率分别为2.18%、2.06%、1.84%,均显著高于未破壁孢子(1.15%)。抗氧化试验表明,3种破壁孢子粗多糖均具一定抗氧化活性,且与质量浓度间存在着显著量效关系。以超微粉碎法破壁孢子粗多糖活性为最强,在其质量浓度为2.50 mg/mL时,对DPPH、OH、ABTS~+三种自由基清除能力分别为89.13%、95.22%、80.26%,铁离子还原能力为0.78。反复冻融-研磨组和超声波组粗多糖活性低于超微粉碎组,说明此型号粉碎机低温下的高速剪切作用对冠突散囊菌子囊孢子多糖分子造成的损伤低于超声空化作用与反复冻融,适宜用于冠突散囊菌子囊孢子的破壁。     

破壁方式对冠突散囊菌有性繁殖体提取物抑菌活性的影响

为对比3种破壁方法对冠突散囊菌有性繁殖体(子囊果和子囊孢子)提取物抑菌活性的影响,利用超声法、萌发法和玻璃珠振摇法处理冠突散囊菌有性繁殖体,运用抑菌圈法测定提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性.结果表明,子囊果较易破碎,子囊孢子较难破碎;玻璃珠振摇法提取的子囊果提取物比子囊孢子提取物的抑菌活性更强,子囊果提取物对...     

冠突散囊菌胞外多糖含量测定及提取工艺研究

冠突散囊菌是茯砖茶生产过程中形成茯砖茶独特品质的优势菌。从茯砖茶中分离纯化出冠突散囊菌，进行液体深层发酵，并对其产生的胞外多糖提取条件进行了正交试验。试验结果表明，最优的多糖提取条件为：冠突散囊菌液体发酵液浓缩至原体积的1／4，乙醇浓度95％，乙醇沉淀时间10h。     

冠突散囊菌胞外多糖提取工艺研究

冠突散囊菌是茯砖茶生产过程中形成茯砖茶独特品质的优势菌。从茯砖茶中分离纯化出冠突散囊菌,进行液体深层发酵,并对其产生的胞外多糖提取条件进行了正交试验。试验结果表明,本次试验中最优的多糖提取条件为:冠突散囊菌液体发酵液浓缩至原体积的1/4,乙醇浓度95%,乙醇沉淀时间10h。     

传统发酵牦牛酸乳宏基因组DNA三种提取方法比较研究

微生物区系复杂,自然环境中约95%是无法用常规的培养方法获得的,为了对未能培养或不可培养的微生物进行研究,本实验选用传统发酵牦牛酸乳,分别采用CTAB-SDS-冻融法、液氮研磨法、玻璃珠吸附法来提取宏基因组DNA,然后测得三种方法所提取的DNA的浓度、纯度和片段分布状况,并对总DNA进行16S r RNA基因片段PCR扩增。实验结果表明,本实验所采取的三种DNA提取方法均能提取到适于后续研究质量的DNA,但其中液氮研磨法同时具有提取的总DNA质量较好和步骤简单、成本低的优点,是提取牦牛酸乳宏基因组DNA最合适的方法。     

冠突散囊菌胞内提取物抑制恶臭假单胞菌的作用机制

本实验对冠突散囊菌FS-1菌丝体中抑菌活性物质进行提取和鉴定，并以恶臭假单胞菌LP-3为抑菌模型，利用冠突散囊菌FS-1菌丝体提取物对其进行处理，通过抑菌活性测定、微观结构观察、恶臭假单胞菌LP-3细胞内容物分析以及代谢组学分析，研究冠突散囊菌FS-1胞内提取物的抑菌机理。结果表明，冠突散囊菌FS-1菌丝体的乙酸乙酯提取物(FS-1 ethyl acetate extract,FSEAE)对1×10⁴ CFU/mL恶臭假单胞菌LP-3的半抑制浓度为8 mg/mL。扫描电子显微镜观察结果表明，FSEAE破坏了LP-3的细胞膜；对LP-3上清液中钾(K⁺)含量、细胞代谢途径中的氧化应激酶系(超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶)活性和丙二醛含量测定结果显示，FSEAE的抑菌作用主要发生在LP-3的对数生长期(8～16 h)。基于非靶向代谢组学分析FSEAE处理组和对照组(二甲基亚砜处理)样本，得到124种代谢产物，其中30种具有显著差异的代谢产物，经京都基因与基因组百科全书富集分析得出FSEAE主要通过干扰三羧酸循环影响恶臭假单胞菌LP...     

黑茶益生菌种“金花”菌基因组测序及分析

目的提取"金花"菌基因组并测序分析。方法从黑茶中分离得到一株冠突散囊菌,命名为YKY807,提取其基因组,利用三代测序技术和Pacbio RSⅡ测序平台进行测序和序列分析。结果序列全长为27 701 366 kb,其GC含量为49.87%。总基因数量为8405,总基因序列长度为12 750 105 kb,编码基因占基因组的41.5%,编码基因总长度为11 398 657 kb,编码基因平均长度为1356.1 kb。结论已获得冠突散囊菌基因组序列信息,序列已提交至GenBank数据库,登录号为MAQV00000000。     

冠突散囊菌发酵液对免疫抑制小鼠免疫学指标的影响

目的：探究冠突散囊菌发酵液对免疫抑制小鼠免疫指标的影响。方法：采用剂量为80 mg/kg的环磷酰胺腹腔注射小鼠,建立免疫抑制模型。用低、中、高剂量的冠突散囊菌发酵液,连续灌胃免疫抑制小鼠15 d,检测小鼠脾脏指数、单核—巨噬细胞吞噬指数、半数溶血值、迟发型变态反应、血清中白介素-2（IL-2）质量浓度。结果：与对照组相比,中、高剂量组的冠突散囊菌发酵液能显著升高（P＜0.05）免疫抑制小鼠的半数溶血值、加快迟发性变态反应;低、中、高剂量组均能提高血清中IL-2质量浓度,分别上升至正常组的3.07,3.10,2.87倍,对小鼠单核—巨噬细胞免疫功能作用不明显。结论：冠突散囊菌发酵液对小鼠具有增强免疫力的功能。     

冠突散囊菌发酵产物的抑菌作用及特性研究

目的测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物的抑菌作用、抑菌物质的温度及其p H稳定性。方法依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取冠突散囊菌发酵液,采用打孔法测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物对细菌、真菌及放线菌的抑菌作用及在不同温度及p H值下的稳定性。结果发酵液乙酸乙酯提取相的抑菌作用较其他提取相强。其中,对枯草芽孢杆菌与白色链霉菌的抑制作用最显著,且该抑菌物质在25～121℃,p H 4～8范围内均能保持稳定的抑菌活性。结论乙酸乙酯能有效提取冠突散囊菌发酵液中的抑菌物质,抑菌物质在一定的温度及p H范围内具有良好的稳定性。     

不同破壁方法对丙酮酸激酶活性的影响

目的研究4种不同处理方法对纤维堆囊菌中丙酮酸激酶酶活性的影响。方法分别采用液氮研磨法、石英砂研磨法、超声波法和溶菌酶法将纤维堆囊菌细胞破壁,然后分别测定丙酮酸激酶的酶活性,比较酶活性及操作难易度。结果石英砂研磨条件下酶活性最小,超声波破碎和液氮研磨酶活性相近,溶菌酶法最高;溶菌酶法耗时间最长,其他3种相近。结论超声波破碎法成本低,效率高,是首选的方法。     

冠突散囊菌菌落计数方法的优化

茯砖茶中冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)的数量是评判其产品质量的重要因素,目前大多数检测机构均使用传统的国标法来检测冠突散囊菌的菌落数量。冠突散囊菌有闭囊壳构造,传统国标法中计数方法存在缺陷,不能检测出茯砖茶中冠突散囊菌的真实数量。通过对传统方法的优化和改进,对样品充分粉碎并过60目筛,利用200颗玻璃珠增加振摇强度,延长振摇时间至60min,从而打破冠突散囊菌闭囊壳,释放其中的子囊孢子,能获得茯砖茶中所含冠突散囊菌的真实数量。结果表明:该方法优化效果明显,操作简单、经济实用性好。     

从颗粒污泥中提取DNA的几种不同方法比较

为了从颗粒污泥中提取出DNA,分别采用CTAB法、TENPC法、Takara试剂盒三种方法提取总DNA,通过提取的核酸总量、纯度、片段分布情况指标来评价不同的提取方法对颗粒污泥总DNA质量的影响,并考察了三种不同的溶液洗涤样品以及三种不同的细胞破壁方法对提取的DNA质量的影响.结果表明:采用脱腐缓冲液、PBSbuffer、EDTA buffer洗涤,液氮研磨破壁后TENPC法提取DNA的效果最好,提取的总量最多,大片段提取效果好,这种方法较适合从颗粒污泥中提取DNA.     

冠突散囊菌与木霉混合发酵液醇提物对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节的影响

为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用（LC-MS）技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝（MTT）比色法、中性红吞噬实验及酶联免疫吸附测定方法分别研究冠突散囊菌与木霉混合发酵液活性部位对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖、吞噬以及分泌细胞因子的能力的影响。结果表明,冠突散囊菌与木霉混合发酵液体积分数70%乙醇提取部位有较好的免疫活性,该部位含有大黄素、芥子碱等生物活性成分。与阳性对照组脂多糖相比,500 μg/mL冠突散囊菌与木霉混合发酵液的体积分数70%乙醇提物能够使小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率提高12%,增强小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的能力,并能促进NO及细胞因子IL-6、TNF-α的分泌。     

酒醅微生物总DNA提取方法研究

高质量的微生物基因组DNA是进行微生物分子生态研究分析的基础。目前关于微生物基因组DNA的提取方法较多,根据研究对象的不同而方法各异。本实验针对浓香型白酒酒醅环境,对比了SDS高盐提取法和CTAB提取方法获得酒醅中微生物基因组DNA,对提取DNA进行PCR特异性扩增和DGGE多样性检测,获得适合不同研究目标的酒醅环境微生物基因组DNA提取方法。结果表明,(石英砂+CTAB)法可获得最大浓度总DNA;(液氮+SDS+溶菌酶)法可获得最高纯度总DNA。     

冠突散囊菌发酵对茶汤香气成分的影响

为探讨冠突散囊菌（Eurotium cristatum）发酵对茶叶提取液香气成分的影响,利用冠突散囊菌对中低档绿茶和红茶提取液进行发酵,采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱法分别检测审评用样品以及提取、灭菌和发酵后样品的香气成分,分析香气成分的变化规律。结果表明,绿茶与红茶提取液经冠突散囊菌发酵新产生苯甲酸甲酯、异佛尔酮、对甲氧基苯乙烯、对乙基苯甲醛、香叶酸甲酯、3,4-二甲基苯甲酸甲酯6?种化合物。同时,绿茶茶汤经冠突散囊菌发酵后,芳樟醇、芳樟醇氧化物I、芳樟醇氧化物II、苯乙酸甲酯、α-松油醇、反-2-癸烯醛和α-紫罗酮分别增长了1.30、2.15、2.04、0.29、3.18、0.10?倍和2.08?倍,且香气种类与含量均上升。但红茶茶汤经冠突散囊菌发酵后大部分香气物质含量下降,其中苯乙醇、反-2-壬烯醛、2-苯基巴豆醛、顺柠檬醛、4-甲基-2-苯基-2-戊烯醛、月桂醛、肉豆蔻醛等未检出,表明冠突散囊菌发酵红茶会带来香气总量的损耗,与红茶相比,低档绿茶更适合使用冠突散囊菌开发发酵型饮料。     

四种酵母基因组提取方法的比较

为获得简便高效的提取酵母基因组DNA的方法,分别采用溶菌酶法、蜗牛酶过夜处理法、蜗牛酶反复冻融法和珠磨法处理酵母细胞,在荧光倒置显微镜下观察、比较细胞的破壁情况,提取基因组后利用紫外分光光度计测定样品中DNA的浓度和纯度以及琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测基因组DNA的质量。结果表明,除溶菌酶法外,其他3种方法均能提取出高质量的酵母基因组DNA。珠磨法提取酵母基因组具有质量高、成本低、时间短且操作简单的优点。     

乳酸菌氧化锆珠破壁方法的优化及适用性研究

本实验旨在优化氧化锆珠破壁方法,以期筛选出较佳的破壁条件,提高蛋白得率。实验在菌体重量、研磨buffer和研磨时间这3方面对该破壁方法进行了优化,并通过SDS-PAGE来分析其破壁效果。在优化后的条件下,同时对6株乳酸菌进行破壁处理并通过SDS-PAGE来分析其破壁效果。结果表明:在菌体重量、研磨buffer、锆珠三者的加入比例(W/V/W)为0.013 g∶300μL∶1 g的条件下,研磨15 min,提取的蛋白图谱条带清晰,丰度高;RIPA、PBS、PENP、GUS作为研磨buffer时,提取的蛋白图谱条带清晰且丰度高,而8 mol/L尿素作为研磨buffer时,图谱条带模糊且丰度低;6株乳酸菌经该方法破壁处理后,蛋白图谱条带均具有较高的丰度和清晰度。因此,对于乳酸菌的破壁,氧化锆珠破壁法具有快速、高效的优点。     

冠突散囊菌与茶多酚复合物对免疫抑制小鼠的保护作用

目的:探究冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合物对环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠的影响。方法:用剂量为80 mg/kg的环磷酰胺连续3 d腹腔注射小鼠以建立免疫抑制模型。用高、中、低剂量的冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合，连续灌胃免疫抑制小鼠15 d,检测小鼠血液指标、脾脏指数、巨噬细胞吞噬系数、半数溶血值、迟发型变态反应、血清中白介素-2(IL-2)及肿瘤坏死因子(TNF-α)质量浓度。结果:冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合物能明显提高免疫抑制小鼠白细胞数目、红细胞数目、血红蛋白含量、血清中溶血素水平、IL-2水平，并增强其脏器指数、吞噬细胞的吞噬指数，改善小鼠迟发型变态反应。结论:冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合物对小鼠具有免疫增强的功能。     

不同因素对冠突散囊菌色素的影响

为获得冠突散囊菌生长过程中色素的变化规律及产色素的最佳条件,以冠突散囊菌色素的吸光值为指标,研究营养物质(碳源、氮源、无机盐)和培养条件(温度、p H)对冠突散囊菌产色素的影响。结果表明:冠突散囊菌色素的最佳条件为:蔗糖5%、硝酸钠1%、氯化钠9%、培养温度28℃、p H 7。