多酚氧化酶的固定化及其酶学性质研究

游离多酚氧化酶在使用过程中容易流失,无法重复利用。文章主要研究了低成本、高效率的两种固定化方法:海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法,确定了其最优固定化条件,分别为海藻酸钠包埋法:2.5%CaCl₂,2.5%海藻酸钠,固定化时间2h;戊二醛交联法:1.25%戊二醛,振荡固定pH 4.5,酶与载体质量比75(mg/g),固定化反应时间6.5h。同时对游离多酚氧化酶及固定化多酚氧化酶的酶学性质进行了研究。结果表明:游离酶、海藻酸钠包埋法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by sodium alginate,A-PPO)和戊二醛交联法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by glutaraldehyde crosslinking,C-PPO)的比活力分别为864,490,371U/mg,A-PPO和C-PPO的酶活回收率分别为18.6%和24.0%。同时,固定化酶在pH稳定性、热稳定性上优于游离酶,戊二醛交联法固定酶的效果优于海藻酸钠包埋法。     

芡实多酚氧化酶的酶学性质

以紫花苏芡和紫花刺芡种仁为原料制备粗酶液,研究多酚氧化酶(PPO)酶学性质。结果表明：紫花苏芡和紫花刺芡PPO最适作用条件均为温度45℃和pH 6.5;铁离子和亚铁离子对芡实PPO酶活性具有较强的促进作用,钙离子低质量浓度时抑制酶活性,较高质量浓度时使酶活性反弹,没有表现出明显的激活作用,铝离子有一定的促进作用,铜离子低质量浓度对酶活性有促进作用,高质量浓度有抑制作用;有机酸柠檬酸、草酸、抗坏血酸和EDTA、还原剂亚硫酸氢钠和硫代硫酸钠对紫花苏芡和紫花刺芡PPO酶活性都有抑制作用。     

八角莲多酚氧化酶的酶学性质

以邻苯二酚为底物,研究八角莲多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）粗提液的酶学特性。结果表明,底物邻苯二酚最适浓度为1.0 mol/L,八角莲PPO的最适pH值为7.0,最适温度为30 ℃,90 ℃高温处理10 min,八角莲PPO酶活力仅剩11.92%。PPO催化的酶促褐变反应符合米氏动力学方程,相应动力学参数Km和vmax分别为0.230 7 mol/L和769.23 U/min。抗坏血酸、甘氨酸、乙二胺四乙酸、柠檬酸对酶活性具有抑制作用,十二烷基硫酸钠表现出激活作用,亚硫酸氢钠对酶活性的抑制作用强于硫代硫酸钠,Al3+和Cu2+对酶活性具有一定的激活作用,Ca2+对酶活性有一定的抑制作用,Mg2+、Fe2+和Fe3+对酶活性影响不显著。     

莲子多酚氧化酶的酶学性质

以新鲜莲子为原料制备莲子多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,PPO)粗酶液,探讨莲子PPO酶学性质。结果表明:莲子PPO的活性最适温度范围为45~50℃、活性最适pH范围为6.5~7.0,即中性时PPO的稳定性最高;而金属离子对其活性的影响显示出Ca2+、Mn2+、Fe3对莲子PPO酶活性具有一定的促进作用,铜离子则表现出较强的抑制作用;还原剂亚硫酸氢钠和亚硫酸钠对莲子PPO酶活性都有抑制作用。本研究旨在为有效抑制鲜莲褐变提供理论依据。     

芋头多酚氧化酶的酶学性质研究

以邻苯二酚为底物,采用分光光度法研究了芋头多酚氧化酶(PPO)的酶学特性。结果表明:芋头PPO的最适温度pH为7.5,最适温度为40℃;90℃高温处理2 min,可使酶完全失活;PPO催化的酶促褐变反应符合米氏动力学方程,相应动力学参数Km=0.0221mol/L,Vmax=46.08 U/min;4种抑制剂对PPO活性均有不同程度的抑制作用,抑制效果由强到弱顺序为:抗坏血酸>亚硫酸氢钠>L-半胱氨酸>柠檬酸;金属离子Sn2+对PPO活性具有较强的抑制作用,A13+、Cu2+、Mg2+、Ca2+和Co2+对PPO活性有一定的抑制作用,Zn2+对PPO活性具有激活作用,Fe3+、Fe2+和Mn2+对PPO活性几乎没有影响。     

莲藕多酚氧化酶酶学性质的研究

系统地研究了底物浓度、pH、温度以及抑制剂对莲藕多酚氧化酶（PPO）的影响.结果表明：以儿茶酚为底物,米氏常数Km为0.01mol/L,莲藕PPO最适宜pH值为7.0,最适温度为35℃,高温可以钝化PPO活性,褐变抑制剂对莲藕PPO活性具有抑制作用.     

紫甘薯多酚氧化酶酶学性质的研究

.采用磷酸缓冲液提取紫甘薯PP0,以儿茶酚为其褐变底物,采用分光光度法对其酶学特性进行了研究.紫甘薯PPO对pH的变化十分敏感,在pH4.1和pH6.0出现两个活力峰,其中pH6.0处为一肩峰.pH值小于3.0或大于7.5时,酶活力迅速降低.最适反应温度为16℃,30℃处有一肩峰.     

蒲菜中多酚氧化酶部分酶学性质的研究

对楚州区蒲菜多酚氧化酶(PPO)的部分酶学性质进行了研究,结果表明:蒲菜中多酚氧化酶的最适pH范围为5.6~6.5,当体系pH>6.6或者pH<4.4时,能有效降低PPO的活性。在30~50℃下PPO具有较高活性,其最适温度为30℃左右。PPO的热稳定性较强,95℃加热2min,酶活丧失80%左右。氯化钠、抗坏血酸、亚硫酸氢钠、柠檬酸等对PPO都有抑制作用。     

丝瓜多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质

从丝瓜中分离纯化出多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）,并对其部分酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级盐析、透析、DEAE-Cellulose DE-52离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析分离纯化丝瓜PPO。纯化所得酶的比活力为957.9 U/mg,纯化倍数为28.3,酶活力回收率为18.5%;十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）检测结果显示该酶蛋白呈单一条带,为单亚基蛋白,其分子质量约为67.8 kD,且无同工酶;该酶最适pH6.0,最适温度30 ℃,以左旋多巴（L-dopa）为底物,其米氏常数（Km）为1.32 mmol/L,最大反应速率（Vmax）为0.22 OD475 nm/min。     

67.8ku丝瓜多酚氧化酶酶学性质的研究

目的:为对67.8ku丝瓜多酚氧化酶(PPO)的酶学性质进行研究。方法:从丝瓜中提取、纯化得67.8ku的丝瓜多酚氧化酶,并分别从温度、pH、作用底物、金属离子、抑制剂及表面活性剂对丝瓜PPO活性的影响等方面对丝瓜PPO的酶学性质进行研究。结果:结果表明,pH为6.0时相对酶活最高,pH3.0~8.0酶活较稳定;其最适作用温度为30℃,对热稳定性较强,70℃保温120min后还具有40%的相对酶活;Co2+、K+、Ca2+等对酶有较强的激活作用,而Na+、Mg2+、Cu2+对酶有明显的抑制作用;抗坏血酸为该酶最好的抑制剂,其次为半胱氨酸、β-巯基乙醇、Na2S2O3、Na2SO3等;十二烷基肌氨酸钠(Laurouyl Sarcosine)、十二烷基硫酸钠(SDS)等对酶有一定的激活作用,而十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、吐温-20(Tween-20)对酶有抑制作用;与l-多巴(l-dopa)的结合力最强,以其为底物时该酶的Km为1.32mmol/L,Vmax为0.22OD475/min。结论:该研究确定了丝瓜多酚氧化酶的最适作用条件及其影响因素,可为控制丝瓜在贮藏、加工过程中的酶促褐变提供理论依据。     

桑叶多酚氧化酶的固定化及酶学性质研究

研究了桑叶多酚氧化酶(PPO)的动力学特性,结果表明,其最适温度为40℃,最适pH为7.0,酶动力学参数Km=0.093mol/L。用浓度质量分数为4%海藻酸钠、体积分数为0.2%戊二醛、0.2mol/L的CaCl2固定多酚氧化酶,固定时间2h,交联时间4h,能使固定化多酚氧化酶的活力达到最大。固定化酶的最适pH为6.0,固定化酶的最佳反应温度为50℃,固定化酶对温度的敏感度降低,温度变化对固定化酶酶活力的影响不大。      

67.8ku丝瓜多酚氧化酶酶学性质的研究

目的:为对67.8ku丝瓜多酚氧化酶（PPO）的酶学性质进行研究。方法:从丝瓜中提取、纯化得67.8ku的丝瓜多酚氧化酶,并分别从温度、pH、作用底物、金属离子、抑制剂及表面活性剂对丝瓜PPO活性的影响等方面对丝瓜PPO的酶学性质进行研究。结果:结果表明,pH为6.0时相对酶活最高,pH3.0⁸.0酶活较稳定;其最适作用温度为30℃,对热稳定性较强,70℃保温120min后还具有40%的相对酶活;Co2+、K+、Ca2+等对酶有较强的激活作用,而Na+、Mg2+、Cu2+对酶有明显的抑制作用;抗坏血酸为该酶最好的抑制剂,其次为半胱氨酸、β-巯基乙醇、Na2S2O3、Na2SO3等;十二烷基肌氨酸钠（Laurouyl Sarcosine）、十二烷基硫酸钠（SDS）等对酶有一定的激活作用,而十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、吐温-20（Tween-20）对酶有抑制作用;与l-多巴（l-dopa）的结合力最强,以其为底物时该酶的Km为1.32mmol/L,Vmax为0.22OD475/min。结论:该研究确定了丝瓜多酚氧化酶的最适作用条件及其影响因素,可为控制丝瓜在贮藏、加工过程中的酶促褐变提供理论依据。      

桑叶多酚氧化酶的固定化及酶学性质研究

研究了桑叶多酚氧化酶(PPO)的动力学特性,结果表明,其最适温度为40℃,最适pH为7.0,酶动力学参数Km=0.093mol/L。用浓度质量分数为4%海藻酸钠、体积分数为0.2%戊二醛、0.2mol/L的CaCl2固定多酚氧化酶,固定时间2h,交联时间4h,能使固定化多酚氧化酶的活力达到最大。固定化酶的最适pH为6.0,固定化酶的最佳反应温度为50℃,固定化酶对温度的敏感度降低,温度变化对固定化酶酶活力的影响不大。     

小麦多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质研究

为了减少多酚氧化酶(PPO)对产品所带来的负面影响,对从苏北红麦中提取的PPO粗提物进行分离纯化。经硫酸铵沉淀、DEAE阴离子交换层析和Superdex 200凝胶过滤层析,最终得到电泳纯化后只有一条条带的PPO,并对该纯化后的PPO进行酶学性质研究。试验结果为:纯化后PPO总酶活回收率为7.03%,纯化倍数22.35,比酶活为373.44 U/mg,电泳分析表明其相对分子质量约为30 000。测得其最适反应p H为6.5,最适反应温度为37℃;金属离子影响的研究表明,K~+、Na~+对其活性基本无影响,Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)略有激活作用,Zn~(2+)、Cu2+激活作用较强;小麦PPO对邻苯二酚的K_m值为6.90 mmol/L,对焦性没食子酸(三酚类)、邻苯二酚(二酚类)底物亲和性较强,对单酚类(苯酚、愈创木酚)、二酚类(对苯二酚、间苯二酚)底物亲和性很低。     

一株产高活性多酚氧化酶菌株筛选鉴定及其酶学性质

采用变色圈法从土壤样品中分离筛选产多酚氧化酶的菌株,对其进行形态学观察、分子生物学鉴定,并对其所产多酚氧化酶的酶学性质进行研究。结果表明,筛选得到1株产多酚氧化酶活性较高的菌株,命名为ZL-2,其被鉴定为竹黄菌属（Shiraia sp.）。菌株ZL-2发酵8 d产多酚氧化酶酶活最高,达到521 U/mL。菌株ZL-2产多酚氧化酶最适底物为邻苯二酚,其最适pH值为6、最适温度为30 ℃;酶活在温度20～40 ℃及pH 3～6范围内稳定。金属离子Cu2+、Mg2+、Mn2+、Fe3+、Zn2+对多酚氧化酶都有激活作用,其中Cu2+激活作用最强;Ca2+、Al3+对酶活有一定抑制作用;L-抗坏血酸和亚硫酸氢钠对该酶抑制作用较强。     

板栗多酚氧化酶的酶学特性

分别就pH值与温度对板栗中多酚氧化酶活性的影响进行研究,结果表明板栗多酚氧化酶的最适pH值分别为4.5和6.5,最适温度分别为25℃和45℃;同时研究抗坏血酸与柠檬酸以及复合抑制剂对板栗多酚氧化酶的抑制效果,结果表明抗坏血酸与柠檬酸的最适作用浓度均为0.30%,复合抑制剂的最佳组合与最适作用浓度分别为0.05%柠檬酸+0.05%抗坏血酸+0.06%乙二胺四乙酸+0.20%氯化钠.     

茶叶多酚氧化酶三相分离纯化及酶学性质研究

为研究一种快速高效的茶叶多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)制备方法,本试验采用三相分离法(three phase partitioning,TPP)获取茶叶PPO,并研究其酶学特性.结果表明,通过两次三相分离纯化后可获得酶比活力210.46 U/mg、纯化15.76倍、回收率8.04％的茶叶PP...     

木枣多酚氧化酶酶学特性研究

从木枣中提取PPO,采用色谱法对其酶促动力学反应机制进行了研究。结果显示:以邻苯二酚为底物,在其浓度0.1mol/L、温度25℃、p H6.4下,292nm处检测到木枣PPO活性最高;不同激活剂对木枣PPO活性的最适激活浓度分别是Mg Cl_2为0.5mol/L、Cu SO_4为0.4mol/L和乙醇为6%,其中Cu SO_4激活效果明显;不同抑制剂对木枣PPO活性的最佳抑制浓度分别是Ca Cl_2为0.6mol/L、芦丁为0.6%、L-Lys为0.2mol/L、L-Glu为0.2mol/L,其中L-Lys对PPO抑制作用最为明显。结论:PPO是酶促褐变的主要原因,在木枣生产和加工过程中可通过添加激活剂或抑制剂来调节PPO活性。     

西葫芦多酚氧化酶酶学特性研究

以邻苯二酚为底物,采用分光光度法对西葫芦多酚氧化酶（PPO）的酶学特性及不同抑制剂对多酚氧化酶活性的影响进行研究。结果表明,西葫芦多酚氧化酶最适pH为6.6,最适温度为35℃,90℃处理5min可使该酶失活。多酚氧化酶催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数为Km=0.0417mol/L,Vmax=208.33U。四种抑制剂对PPO的抑制效果由强到弱依次为:亚硫酸氢钠>L-半胱氨酸>抗坏血酸>柠檬酸。      

佛手瓜多酚氧化酶酶学特性研究

以佛手瓜中的多酚氧化酶为研究对象,对其酶学特性的研究表明：佛手瓜果实多酚氧化酶的最适pH 值为7.5,最适温度为30℃,底物浓度与酶活性呈正相关;该酶迅速催化焦性没食子酸的酶促氧化反应,但对邻苯二酚、对苯二酚和间苯二酚的催化活性较低。抗坏血酸、柠檬酸、四硼酸钠、MgCl2 和EDTA-2Na 对佛手瓜多酚氧化酶的抑制作用依次减弱,抗坏血酸、柠檬酸对佛手瓜多酚氧化酶的抑制作用随着浓度的升高而加强。