Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏制备抗氧化肽

通过Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白制备抗氧化肽,以酶解液的水解度(DH)、DPPH·和羟自由基清除率为指标,比较不同酶添加量、p H值、温度、料液比以及酶解时间对酶解效果的影响,并用响应面法优化Alcalase蛋白酶酶解反应的工艺条件。结果:Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白的最优工艺条件为:酶解p H9.0、底物质量浓度8 g/100 m L、温度62℃、加酶量4.26%、酶解时间3.7 h。在此条件下,蛋白质水解度为30.66%,DPPH自由基清除率为85.97%,羟自由基清除率为75.79%。对优化的酶解液进行氨基酸成分分析表明:大黄鱼内脏多肽含有丰富的组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、酪氨酸(Tyr)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro),具有较高的抗氧化活性。     

栉孔扇贝酶解液制备条件优化及其抗氧化性研究

以栉孔扇贝为原料,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken方法,通过响应面试验优化酶解制备具有抗氧化性多肽的扇贝酶解液工艺,并对扇贝酶解液的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、总抗氧化活力和抗超氧阴离子活力进行测定。研究了蛋白酶种类、酶解时间、酶解温度、加酶量和固液比对栉孔扇贝酶解液抗氧化性的影响。结果表明:扇贝最佳酶解条件为选择中性蛋白酶、酶解时间4.7h、酶解温度43℃、加酶量3.5%、固液比(m/V)1∶5。在此条件下,DPPH自由基清除率达到68.21%,羟自由基清除率为33.74%,总抗氧化活力为0.086U/mg prot,抗超氧阴离子活力为106.27U/g prot。     

蛋白酶水解鸡枞菌制备酶解液工艺优化及抗氧化活性

以鸡枞菌为原料,以DPPH·、ABTS^+·、O2^-·清除率及水解度为指标,采用蛋白酶对鸡枞菌进行水解,制备酶解液。以碱性蛋白酶为水解酶,以DPPH·清除率和水解度为参考值,采用单因素和正交试验分析法研究料液比、加酶量、pH、温度、时间对酶解效果的影响。结果表明:应用碱性蛋白酶制备的鸡枞菌酶解液抗氧化效果最佳,酶解条件为料液比1∶25(g/mL),加酶量3500 U/g,pH 7,酶解温度45℃,酶解时间2.5 h。此条件下所得酶解液的DPPH·清除率为73.23%,水解度为44.6%,酶解液对DPPH·、ABTS^+·和O2^-·3种自由基均有清除作用,其IC50分别为0.25,0.39,1.09 mg/mL,但清除能力明显低于同浓度Vc的清除能力。     

扇贝酶解条件的优化及其抗氧化性的研究

以海湾扇贝和虾夷扇贝为原料,研究了扇贝品种、蛋白酶种类、加酶量、酶解温度、酶解时间、固液比对水解度和DPPH自由基清除率的影响。在单因素试验的基础上,采用响应面法对酶解条件进行优化。结果表明:以海湾扇贝为原料,用中性蛋白酶进行水解效果较好,酶解时间4h,温度40℃,加酶量1.0%。在优化条件下进行试验,得到DPPH自由基清除率为81.76%,与预测值的相对误差为0.45%,预测模型与实际情况拟合良好。在优化条件下对扇贝酶解液的羟自由基清除率、总抗氧化活力和抗超氧阴离子活力进行了测定,得出海湾扇贝总抗氧化能力为0.11U/mg prot,抗超氧阴离子活力为0.37U/g prot,羟自由基清除率为55.31%。     

响应面法优化草鱼皮中有效抗氧化物质提取工艺

以草鱼皮为原料,采用六种蛋白酶酶解,以DPPH自由基清除率和水解度为指标,筛选两种较优的酶,再通过响应面分别优化两种酶制备抗氧化酶解液的工艺条件,并在此基础上进行双酶酶解实验,确定酶解草鱼皮的最优工艺。结果表明:碱性蛋白酶酶解草鱼皮的最适条件为加酶量6.3%、料水比1∶40.6、温度51.3℃、时间115.1 min,此时清除率最高为54.98%。木瓜蛋白酶最适条件为加酶量4.6%、料水比1∶41.2、温度50.5℃、时间133.0 min,清除率最高为41.06%。采用分步酶解(先碱性蛋白酶后木瓜蛋白酶)得到的酶解液DPPH自由基清除能力最高为92.07%,明显优于单酶水解和混合酶解的效果。     

响应面优化虾头壳酶促水解清除DPPH自由基活性的研究

以碱性蛋白酶水解虾头壳蛋白质,在影响水解条件单因素研究基础上,采用响应面方法中心组合设计,建立以DPPH自由基清除率为指标的水解模型,优化得出最佳酶解条件,并测定水解液中多肽的相对分子质量分布。结果表明,最佳酶解条件为pH7.2、温度50.5℃、加酶量415U/g、时间120min。在此条件下水解,水解度达21.8%,DPPH自由基清除率为66.9%,平均肽段长度为4.6,酶解液中大部分肽的相对分子量低于6500u。     

响应面法优化鲢鱼皮抗氧化肽的混合酶解工艺

以鲢鱼皮为原料,采用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶混合酶解法制备抗氧化肽,以1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基清除率为指标,通过响应面法优化酶解条件。结果表明,加酶量和酶解温度对产物的抗氧化活性影响显著,酶解工艺中加酶量与pH,温度与pH存在一定的交互作用。中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶活力配比1∶1(U/U),水解时间4 h时,最佳酶解条件为:加酶量8 257 U/g、酶解温度55℃、pH 7.3,在此条件下,1 mg/m L的鲢鱼皮抗氧化肽DPPH自由基清除率为33.86%。     

猪皮明胶抗氧化多肽酶解工艺优化

在测量猪皮明胶蛋白质含量和氨基酸组成的基础上,采用不同酶水解,根据水解产物对DPPH.自由基的清除率,筛选最适的蛋白酶。进一步在单因素试验基础上采用响应面法对筛选的酶进行水解工艺优化,得到最佳工艺为:酶解温度50.05℃,酶解时间4.2 h,pH 6.16,酶料比0.04,料液比0.043。在此条件下,水解物对DPPH.的理论清除率为89.1%,实验值为87.4%。     

多指标优化珠蚌抗氧化肽制备工艺

采用取珠后珠蚌肉为原料,选用木瓜蛋白酶进行水解。以DPPH自由基清除率、.OH清除率及蛋白水解度作为评价指标,研究珠蚌抗氧化活性肽的制备工艺。在单因素基础上,通过三个指标的综合考虑,设计L18(37)多指标正交试验,对制备工艺进行优化,得出最佳工艺条件。结果表明,最佳条件为:酶解温度60℃、酶解时间5h、料液比3:10(w/v)、酶解pH6.5、加酶量6000U/g,制得的多肽DPPH自由基清除率85.5%,.OH清除率50.7%,水解度23.09%;此时,DPPH自由基清除率EC50为0.4mg/mL,.OH清除率EC50为0.7mg/mL。     

响应曲面法优化鸭肫酶解制备抗氧化肽工艺

在单因素实验基础上应用响应面法对鸭肫抗氧化肽制备工艺进行优化。在前期筛选酶解鸭肫的最佳蛋白实验中得到木瓜蛋白酶为酶解鸭肫蛋白的最佳作用酶,优化的鸭肫抗氧化肽最佳工艺条件为:酶解时间4.0 h、加酶量0.5%、酶解温度55℃、料液比1∶3 g/m L。在此条件下,酶解鸭肫蛋白的水解度可达28.30%,DPPH·清除率为75.10%。结果表明该鸭肫抗氧化肽工艺制备可行,鸭肫蛋白水解度与DPPH自由基清除能力之间不存在相关性。     

南瓜子粕蛋白酶解物的制备及清除DPPH活性的研究

以南瓜子粕蛋白为底物,选取碱性蛋白酶为水解酶进行水解反应,制备酶解产物。方法:以水解度DH为指标,通过单因素试验及正交试验确定最佳酶解工艺条件;以DPPH自由基清除率为指标,测定酶解物的抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶水解工艺条件为:酶解温度55℃,加酶量5%,pH值8.0,料液比4%,反应时间4 h;经6 h酶解后,DPPH.清除率可达到58.89%。     

卵白蛋白多肽的酶解制备及抗氧化活性研究

以DPPH自由基清除率和水解度为指标,采用碱性蛋白酶酶解卵白蛋白制备抗氧化活性肽,考察底物质量分数、酶解时间、加酶量、温度等因素对制备的影响。正交实验结果表明,碱性蛋白酶的最佳水解条件为:底物质量分数4%、酶解时间6h、加酶量5500U/g,温度65℃,此条件下DPPH自由基清除率达到96.92%、水解度为57.14%。酶解时间对DPPH自由基清除率的影响最大,而底物质量分数对水解度的影响最大。     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

大米蛋白抗氧化肽的酶法制备工艺研究及其优化

以大米蛋白粉为反应底物,采用酶解法制备大米蛋白抗氧化肽。以酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶3种蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶为最佳用酶。通过BoxBehnken响应面设计法优化木瓜蛋白酶酶解大米蛋白抗氧化肽的工艺条件为p H值5.25、酶解温度61.4℃、加酶量5.6 U/m L、底物质量浓度5.3 g/100 m L。其酶解液稀释5倍后对DPPH自由基的清除率为94.8%。     

金枪鱼骨抗氧化酶解物的工艺优化

为获得高抗氧化活性的金枪鱼骨粉酶解液。用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶4种蛋白酶对鱼骨粉进行酶解,以酶解液的DPPH自由基清除活性为主要指标,水解度为辅助指标进行分析,筛选出试验最适水解酶为中性蛋白酶。采用响应面设计方法对鱼骨粉酶解工艺进行优化。结果表明,骨粉最佳酶解工艺参数为:酶解温度56.22℃,酶解时间1.88 h,p H 6.15,液料比20.19∶1(m L∶g)。该条件下的鱼骨粉酶解液蛋白质浓度为9.30 mg/m L,水解度为12.34%,DPPH清除率为94.97%,羟基(·OH)自由基清除率为97.89%。骨粉酶解液显示出较强的抗氧化活性,且优于同浓度条件下的VC液抗氧化活性。     

Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的条件优化

本研究以花椒籽蛋白质抗氧化肽水解度(DH)和DPPH自由基清除率为指标,对酶解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的水解用酶及其酶用量、底物浓度、酶解温度、时间等酶解条件进行研究,以期优化得到酶解法制备花椒籽抗氧化肽的最优条件。结果表明Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽效果最好,通过响应面分析法优化出该酶最佳酶解花椒籽制备抗氧化肽的条件为:底物浓度5%,温度55℃,pH 8.5,加酶量4%;该方法可用于花椒籽蛋白制备抗氧化肽,在此条件下花椒籽水解液DPPH自由基清除率可达到61.00%,水解度为12.00%。     

椰肉蛋白酶解及其产物的抗氧化活性研究

将新鲜椰肉粉碎脱脂,利用碱溶酸沉法制备椰肉蛋白。用Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、Papain木瓜蛋白酶酶解椰肉蛋白,以DPPH自由基清除能力和水解度为指标对酶解过程进行分析,筛选出最适合制备抗氧化酶解物的酶为Alcalase碱性蛋白酶。然后采用单因素及多指标正交实验设计优化Alcalase碱性蛋白酶酶解条件,其中酶解温度和底物浓度对DPPH自由基清除率影响最大。优化后的制备参数为:酶解温度50℃,pH值10.5,加酶量14000 U/g,酶解时间7 h,底物浓度2%,该条件下水解液中蛋白含量为15.8 mg/mL,水解度和DPPH.清除率分别为29.16%和89.07%,椰肉蛋白酶解物显示出较强的抗氧化活性,接近同一浓度下谷胱甘肽的抗氧能力,比同浓度Vc的DPPH自由基清除率高3.33倍。     

响应面法优化微波辅助酶解合浦珠母贝蛋白工艺

研究微波对酶解合浦珠母贝蛋白的影响,以水游离氨态氮含量和抗氧化活性为指标,选择较好的作用酶,通过单因素试验确定料液比、加酶量（E/S）、微波温度、微波功率及时间和后续水浴时间等因素水平,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,响应面法优化酶解合浦珠母贝蛋白工艺条件。结果表明,微波辅助蛋白酶酶解合浦珠母贝蛋白工艺条件为微波温度58 ℃、微波功率300 W、微波时间17 min、加酶量5 000 U/g,后续在58 ℃条件下再水浴1.5 h。预测响应值为0.224 4,水解度达到26.15%,验证实验证明与响应优化模型预测值误差不大,二次多元拟合度较好。     

响应面法优化龙须菜蛋白酶解工艺及酶解液的抗氧化活性

为获得高抗氧化活性的龙须菜蛋白酶酶解液,运用响应面(RSM)分析方法对龙须菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素实验基础上,以亚铁离子螯合率和DPPH自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、p H、酶解温度、底物质量浓度、加酶量对龙须菜蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响。结果表明:在所选的5种蛋白酶中,复合蛋白酶是龙须菜蛋白酶解的最适用酶;酶解液抗氧化活性的最优酶解条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50.1℃、p H7.0、底物浓度10 g/L、加酶量0.1%(0.15 AU/g)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为74.61%,DPPH自由基清除率为47.66%,水解度为17.58%。对比常用抗氧化剂,酶解液在亚铁离子螯合能力方面显著高于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05)。优化后的龙须菜蛋白酶酶解液具有一定的抗氧化活性。     

响应面法优化制备南瓜籽抗氧化肽的工艺

以南瓜籽分离蛋白为原料,采用酸性蛋白酶酶解制备南瓜籽抗氧化肽。选用加酶量、酶解温度、pH值、底物质量浓度、酶解时间作为研究对象,以酶解液对DPPH自由基的清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用Plackett-Burman筛选试验确定显著因素,然后通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法优化制备南瓜籽抗氧化肽的酶解工艺条件。结果表明：酸性蛋白酶酶解南瓜籽蛋白质的最佳工艺条件为：酶解温度50℃、pH2.5、酶解时间5h、底物质量浓度0.05g/mL、加酶量6000U/g pro,在此条件下,DPPH自由基清除率可达到92.82%。