桑黄子实体与桑黄菌丝多糖抗氧化活性研究

桑黄是我国一种非常珍贵的功能性真菌,多糖是其的主要生物活性成分,试验提取桑黄子实体多糖和二种不同生长期的菌丝多糖,对其进行抗氧化试验,以总抗氧化能力、清除DPPH自由基能力、清除羟基自由基能力、对Fe~(2+)螯合能力、超氧阴离子自由基清除能力测定5种方法评价其抗氧化活性,试验结果表明桑黄子实体多糖表现出较强的抗氧化活性,对比桑黄子实体多糖与桑黄菌丝多糖,子实体多糖抗氧化效果显著高于菌丝体多糖,不同生长期的菌丝多糖也呈现出不同的抗氧化性,生长期短的菌丝多糖表现出更强的抗氧化性。试验结果为今后桑黄产业提供重要的理论基础。     

碱提桑黄菌丝体多糖的抗氧化活性

为了研究碱提桑黄菌丝体多糖PL-N的抗氧化活性。利用物理、化学方法分析了PL-N的化学组成及基本理化性质,在此基础上,通过体外抗氧化模型、细胞试验和D-半乳糖所致的小鼠亚急性衰老模型综合评价了PL-N对DPPH和羟自由基的清除作用、过氧化氢诱导SH-SY5Y神经细胞的保护作用及体内抗氧化活性。结果表明:PL-N的总糖和糖醛酸含量分别为84.92%和16.92%,不含蛋白质,主要由D-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖和D-半乳糖组成,其分子摩尔比为5.5:7.8:1.8:1。PL-N具有明显的清除自由基能力,且呈剂量依赖关系,在2.0 mg/mL时,PL-N的DPPH和羟自由基清除率分别为72.1%和83.3%。同时,在80 μg/mL时,PL-N预处理对氧化损伤细胞的存活率达到88.7%,揭示其突出的体外抗氧化活性。与模型组相比,灌胃高剂量PL-N的小鼠脏器指数、血清和肝脏中的抗氧化酶活性和总抗氧化能力均极显著增加(P<0.01),丙二醛含量极显著降低(P<0.01)。由此可见,PL-N具有突出的抗氧化活性,可作为功能性食品应用于膳食、理疗中。     

桑黄提取物的体外抗氧化、降血糖及降尿酸活性

为了解杨树桑黄不同提取物的生物活性,采用超声辅助法制备了杨树桑黄粗多糖和醇提物,分析了二者主要成分及其含量,比较了二者体外抗氧化、降血糖及降尿酸活性。研究发现桑黄粗多糖中总糖含量为74.87%,蛋白质含量为6.61%,糖醛酸含量为4.84%,硫酸基含量为2.59%;桑黄醇提物中总酚含量为35.72%,总黄酮含量为8.98%,总三萜含量为5.82%,总甾醇含量为7.36%。此外,桑黄粗多糖和醇提物具有较强的DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基清除能力和一定的还原力。体外降血糖及降尿酸实验表明桑黄多糖和醇提物对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶与黄嘌呤氧化酶均有一定抑制作用,但桑黄醇提物降血糖和降尿酸活性明显优于桑黄多糖;另外桑黄醇提物对α-葡萄糖苷酶抑制作用IC50值为0.43 mg/mL,远低于阿卡波糖IC50值（0.87 mg/mL）。与桑黄多糖相比,桑黄醇提物具有较强的体外抗氧化、降血糖及降尿酸活性,这为充分利用桑黄资源、开发桑黄功能性食品或医药保健品提供了理论依据。     

桑黄菌多糖体外抗氧化作用

采用化学模拟体系测定桑黄菌胞内多糖与胞外多糖体外抗氧化能力。结果表明：清除DPPH自由基时,胞内多糖的EC50值为1.09mg/mL,胞外多糖的EC50值为1.52mg/mL;清除 ·OH时,胞外多糖的EC50值为0.23mg/mL,胞内多糖的EC50值为0.78mg/mL;清除O2－ ·时,胞外多糖的EC50值为20.31μg/mL,胞内多糖的EC50值为29.97μg/mL;螯合Fe2+时,胞内多糖的EC50值为1.36mg/mL,胞外多糖的EC50值为1.66mg/mL;实验范围内胞内多糖、胞外多糖还原能力与质量浓度呈很好的线性关系。可见桑黄菌多糖抗氧化能力有明显的量效关系,且胞外多糖与胞内多糖的抗氧化能力不同。     

桑黄菌丝体多糖的分离纯化及抗氧化、抗肿瘤活性分析

采用水提醇沉法制备桑黄菌丝体粗多糖,分别用终浓度为30%、45%和60%的硫酸铵溶液对桑黄菌丝体中粗多糖进行粗分离,并比较所得各多糖组分的抗氧化、抗肿瘤活性。对其中活性强的组分采用离子交换树脂柱色谱纯化,采用高效排阻色谱-折光示差检测器-多角度光散射仪对纯化多糖进行均一性分析和分子量测定。结果显示,45%硫酸铵分离多糖IPS45显示最强的抗肿瘤活性及较好的清除超氧阴离子活性,IPS45经DEAE-52纤维素离子交换柱纯化得到四个级分,经高效排阻色谱分析,其中蒸馏水洗脱级分（IPS45-W）为均一多糖,重均分子量为79.1 kDa;气相色谱分析其单糖组成为甘露糖:葡萄糖:半乳糖:未知单糖,摩尔比为1.57:8.38:1.09:1.00。IPS45-W可抑制HepG2细胞生长,当浓度为50μg/mL时,对HepG2细胞的抑制率为56.74%,高于前期研究的乙醇沉淀分离所得桑黄菌丝体均一多糖同浓度下11%～35%的抑制率。该结果为不同组成的桑黄多糖的分离和应用提供依据。     

桑黄深层发酵上清液抗氧化活性的研究

通过DPPH.和羟基自由基清除体系来研究体外桑黄深层发酵上清液的抗氧化活性。通过深层发酵得到桑黄发酵液,经过离心和旋转蒸发得到发酵上清液,用乙酸乙酯和石油醚对其进行萃取,得到不同的萃取物和萃余物,研究其抗氧化活性。结果表明,桑黄发酵上清液乙酸乙酯萃余物自由基清除能力最强,且自由基清除率随浓度增加而增强,各组分的抗氧化能力递减顺序为:乙酸乙酯萃余物>乙酸乙酯萃取物>发酵上清液>石油醚萃余物。定性实验初步验证上清液萃余物中抗氧化成分可能为黄酮、酚类、蒽醌类等。      

微孔读板法快速评价桑黄提取物抗氧化活性

目的:以药用真菌桑黄为研究对象,应用甲醇为溶剂提取其有效成分,进一步采用微孔读板法评价桑黄提取物的抗氧化活性。方法:应用多功能读板器,在已有抗氧化活性评价方法的基础上进行适当修改,以满足微量检测的需要,采用96-微孔板法快速评价不同浓度的桑黄提取物对羟基自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的清除能力。结果:通过微孔读板法快速评价桑黄提取物抗氧化活性的结果表明,桑黄提取物对三种自由基(·OH、O_2~-·和DPPH自由基)均有一定的清除能力,并且不同桑黄提取物对自由基清除能力与其浓度存在量效关系。结论:采用修改后适合微量检测抗氧化活性评价方法,应用微孔读板法能够快速评价具有自由基清除活性的物质,该方法快速可行,适合高通量筛选和评价具有抗氧化活性的成分。     

桑黄胞内多糖免疫及抗氧化活性研究

通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠动物模型,考察桑黄粗多糖(SH)、纯化多糖组分(P-47000、P-8700)对增强免疫及抗氧化水平的变化情况,明确不同纯度多糖组分生物活性间的差异。结果表明：SH、P-47000、P-8700对环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠具有不同程度的免疫促进作用,其顺序为：P-8700＞SH＞P-47000;P-47000的还原能力低于SH和P-8700,SH和P-8700还原能力相差不大;P-47000几乎对超氧阴离子自由基(O2－ ·)没有清除效果,P-8700和SH的清除率比较低,且P-8700略大于SH;P-8700对羟自由基( ·OH)具有较好的清除效果,清除率达到53.421%,且P-8700的清除率高于SH和P-47000,P-47000清除率最低;不同纯度多糖对DPPH自由基的清除效果均较高,SH达到93.221%;P-8700清除效果最低,为66.435%。     

不同栽培基质桑黄化学成分及抗氧化活性比较

目的 以杨树桑黄Sanghuangporus vaninii为研究对象,比较分析了应用段木和木屑栽培的桑黄子实体中 水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、总多糖、总黄酮、总三萜含量,麦角甾醇和麦角甾酮的含量差异,并研究了其乙醇提取物的体外抗氧化活性。方法 分别选取段木和木屑栽培的桑黄子实体,依据国家标准对其水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维的含量进行测定,通过紫外分光光度法、高效液相色谱法（HPLC）测定总多糖、总黄酮、总三萜、麦角甾醇、麦角甾酮含量,采用DPPH·自由基清除能力、ABTS+·自由基清除能力评价其乙醇提取物的抗氧化活性。结果 不同栽培基质对上述13个指标均具有影响。段木栽培的桑黄中水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、总多糖、总三萜、麦角甾酮含量均高于木屑栽培桑黄;木屑栽培的桑黄中总黄酮、麦角甾醇含量高于段木栽培的桑黄;段木栽培桑黄的抗氧化活性高于木屑栽培桑黄。结论 段木培养基更适宜桑黄子实体中各种化学成分的积累,从而提高其抗氧化活性,代料栽培产桑黄子实体的培养基需进一步优化,研究结果为桑黄栽培基质的优化和桑黄饮品质量评价提供了科学的参考。     

不同体积分数乙醇沉淀桑黄胞内多糖的理化性质及抗氧化活性

研究桑黄胞内多糖醇沉过程中乙醇体积分数对多糖得率、纯度、理化性质和抗氧化活性等的影响。结果表明：随着乙醇体积分数的增加,沉淀粗多糖的得率增加,而粗多糖中多糖含量呈现不规则的变化;不同体积分数乙醇沉淀获得的桑黄多糖中均含有木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖。扫描电镜图像显示,低体积分数（65%、75%、85%）乙醇沉淀的多糖呈现均匀球状,高体积分数（95%)乙醇沉淀的多糖连成大块片状。桑黄胞内多糖体外抗氧化能力存在明显的量-效关系,95%乙醇沉淀的多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基、2,2’-联氮-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）自由基的清除效果最好,对Fe3＋的还原能力最强,抗氧化活性最高。     

不同生长年份桑黄中活性成分动态分析

以同一桑黄菌种为研究对象,通过与野生桑黄进行比较,分析桑黄菌丝体、一年生、两年生、三年生和四年生桑黄子实体中活性成分的差异.采用苯酚-硫酸法、福林酚法对不同桑黄提取物中的总多糖(水提物)和总多酚(醇提物)含量进行评价,进一步应用液相色谱-质谱联用(liquid chromatograph-mass spectromet...     

桑黄菌胞内多糖的理化性质和体外抗氧化活性

研究液体发酵桑黄菌胞内多糖的理化性质和体外抗氧化活性。结果表明：经DEAE-52纤维素离子交换柱层析分离分级得到多个级分,以较大分子质量的中性多糖为主。凝胶渗透色谱分析表明桑黄菌胞内多糖的重均分子质量范围为5.7×103～6.1×106D,由葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成,其分子物质的量比为15:4:1,多糖含量为41%,特性黏度为12mL/g。通过体外抗氧化模型,发现桑黄菌胞内多糖均能较好的清除 ·OH、O2－ ·和螯合Fe2+,且对O2－ ·具有明显的清除作用。     

桑黄子实体多糖超声波微波协同辅助提取及活性研究

桑黄因具有独特的抗癌等功能,已经成为国内外功能性食品研究的热点,是目前国际所公认的生物抗癌领域中效率最高的真菌。该研究应用超声波微波复合法辅助提取桑黄多糖,试验在不同提取时间、液料比、超声波功率和微波功率等条件下多糖的提取率,选出最佳超声波-微波协同辅助提取工艺。对热水法和超声波微波法辅助提取的多糖进行抗氧化与抗肿瘤活性测定,桑黄多糖表现出很强的抗氧化性,超声波微波法辅助提取的多糖抗氧化活性更强;多糖对人肝癌细胞和人宫颈癌细胞有较强的细胞毒活性,超声波微波辅助提取的桑黄多糖其抗肿瘤活性更强。试验结果表明超声波微波辅助提取法不但效率高,而且未减弱多糖的活性。     

桑黄菌胞外多糖产量的测定

用硫酸-苯酚法检测桑黄菌胞外多糖产量。选葡萄糖为标准单糖,胞外多糖换算因子f=9.59,以处理后的发酵液为对象,检测重现性较好,在3 h内显色稳定,加样回收率为(94.04±3.81)%(n=5)。测定结果表明变异菌株SJZ3产胞外多糖较多,高出出发菌株25.60%。     

桑黄总黄酮超声提取工艺及其生物活性研究

目的：优化提取桑黄总黄酮的最佳工艺条件,测定其体外抗氧化活性和对癌细胞的生长抑制作用。方法：以样品中总黄酮的提取率为指标,采用L9(34)正交试验对桑黄的超声辅助提取工艺参数进行优化;通过测定桑黄黄酮对·OH、O2·的清除能力等指标,探讨其抗氧化活性;采用MTT 法测定桑黄黄酮对大肠癌细胞CX-1 增殖反应的影响,研究其体外抗肿瘤活性。结果：桑黄总黄酮的最佳提取工艺为乙醇体积分数55%、料液比1:20(g/mL)、提取温度70℃、超声提取时间1.5h。桑黄黄酮可以有效清除·OH、O2·,对Fe2+ 诱发卵黄低密度脂蛋白(LDL)多不饱和脂肪酸(PUFA)过氧化反应具有抑制作用。桑黄黄酮提取物能够有效地抑制大肠癌细胞CX-1 的生长。结论：该工艺提取桑黄总黄酮,方法简单、耗时短。桑黄黄酮抗氧化能力强,有抑制癌细胞的作用,是一种有效的天然抗氧化剂。     

不同贮藏年份康砖茶主要成分差异及其抗氧化活性比较

以不同贮藏年份康砖茶为试验材料,检测其儿茶素、没食子酸和茶色素含量,测定其多酚提取物还原铁离子的能力、清除DPPH和ABTS自由基的能力,比较其抗氧化活性。结果表明:随着贮藏年份的增加,康砖茶总黄酮、茶褐素和没食子酸含量呈显著增加的趋势(p0.05)。多酚提取物FRAP·EC50(8.28μg/m L～14.55μg/m L)显著高于DPPH·EC50(4.26μg/m L～4.99μg/m L)和ABTS EC50(5.14μg/m L～5.50μg/m L),且DPPH EC50显著低于ABTS EC50(p0.05)。随着贮藏年份的增加,DPPH EC50显著降低;FRAPEC50先显著增加,后显著降低(p0.05)。贮藏期6年(YA2010)ABTS EC50显著低于其他年份(p0.05)。贮藏时间为15年(YA2001)和23年(YA1993)的康砖茶还原铁离子的能力和清除DPPH自由基的能力高于其他年份康砖茶。相关性分析表明,FRAP EC50和DPPH·EC50均与没食子酸、茶褐素呈显著负相关(p0.05);ABTS·EC50与没食子酸呈显著正相关(p0.05)。因此,康砖茶多酚提取物具有抗氧化活性。贮藏时间越长,还原能力和清除DPPH自由基能力越强,但清除ABTS自由基的能力与贮藏时间没有明显的规律性。     

超声辅助低共熔溶剂提取桑黄多糖及其抗氧化活性

以桑黄多糖提取率为指标,以低共熔溶剂（deep eutectic solvents,DES）摩尔比、DES含水量、液固比、超声功率、超声时间、提取温度为考察因素,进行单因素和Box-Behnken响应面试验,优化超声波辅助DES提取桑黄多糖工艺;通过测定纯化后的桑黄多糖对DPPH自由基、羟基自由基的清除率以及对肿瘤细胞的抑制率考察其体外活性。结果表明,桑黄多糖的最佳提取工艺为氯化胆碱与丙三醇摩尔比1∶2、DES含水量30%、超声时间30 min、液固比为39∶1（mL/g）、提取温度58℃、超声功率90 W,在该条件下桑黄多糖提取率为（13.11±0.16）%,与预测值相对误差为0.91%;体外活性结果显示纯化后的桑黄多糖具有良好的抗氧化活性和抑制肿瘤细胞增殖的能力,且与药物浓度呈量效关系。因此超声波辅助DES提取桑黄多糖不仅提取率较高且提取物具有较强的抗氧化及抗肿瘤活性。     

桑黄菌丝体与子实体成分的比较分析

为进一步开发和利用桑黄（Phellinus igniarius）,通过发酵获得桑黄菌丝体,并对桑黄子实体和菌丝体的一般营养成分及主要功能成分含量进行分析比较,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率和对SW620、HepG2肿瘤细胞的抑制率进行主要成分活性的比较。结果表明,桑黄菌丝体和子实体均含有蛋白质、多糖、氨基酸、脂肪、纤维、矿物元素等多种营养成分,其组成基本一致。主要营养成分中,桑黄菌丝体中水分、灰分含量显著低于桑黄子实体（P＜0.05）,粗纤维含量极显著低于桑黄子实体（P＜0.01）,而粗蛋白、粗脂肪含量极显著高于子实体（P＜0.01）;在所测定的17 种氨基酸中,二者氨基酸种类一致,菌丝体氨基酸总量为25.11%,子实体氨基酸总量为4.69%;多糖、黄酮、三萜3 种活性成分在桑黄子实体中含量极显著高于菌丝体（P＜0.01）,其中子实体多糖、黄酮、三萜DPPH自由基最高清除率分别为77.14%、61.37%、49.97%;桑黄菌丝体、子实体多糖对结肠癌SW620细胞的抑制率最高可达21.45%和32.86%,对肝癌HepG2细胞的抑制率最高可达37.91%和51.29%。这些结果进一步说明桑黄菌丝体和子实体营养成分组成基本一致,含量丰富,液体发酵所得菌丝体可以缓解野生桑黄子实体匮乏的局面,具有同样的应用价值和开发前景。