脱脂蛋黄蛋白粉酶水解实验研究

蛋黄蛋白粉是提取药用卵磷脂生产的副产物,用酶解方法将蛋黄蛋白转化为氨基酸或寡肽是回收利用脱脂蛋黄蛋白粉的重要途径之一.从研究水解反应入手,通过单因素试验和正交优化试验研究胃蛋白酶的最佳水解条件,考察了底物浓度、水解时间、反应温度、pH、酶浓度对脱脂蛋黄蛋白粉水解度的影响,然后根据正交试验结果对胃蛋白酶胰蛋白酶组合水解进行研究.研究结果表明,胃蛋白酶水解的最佳工艺条件是:温度为38 ℃,pH为2.0,底物浓度为5％,酶浓度为2％,水解时间为4h,此条件下水解度为15.76％.胃蛋白酶-胰蛋白酶组合酶水解的最佳工艺条件是:先加胃蛋白酶水解4h,而后调节pH为7.5,温度55℃,再加入浓度为0.5％的胰蛋白酶水解4h,此时水解度高达20.41％,明显高于胃蛋白酶单酶水解.     

酶改性蛋白制备水溶性蜂王浆的研究

以胃蛋白酶和碱性蛋白酶为实验用酶,对蜂王浆蛋白的最佳水解条件及两种酶解液的特性进行了研究.结果表明:胃蛋白酶的最佳水解条件为pH=2,温度为37.C,料液比为1:3,酶浓度7‰,反应时间为8h;碱性蛋白酶的最佳水解条件为pH=8,温度为50%,料液比为1:4,酶浓度7‰,反应时间为8h.碱性蛋白酶其酶解产物的澄清度、苦味值及氮溶解指数均优于胃蛋白酶酶解产物,可用于制备水溶性蜂王浆.     

鮰鱼皮明胶抗氧化肽的制备工艺研究

通过测定鮰鱼皮明胶蛋白酶解物对Fenton 体系产生的羟自由基的清除效果,筛选得出胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解物具有较高的清除羟自由基(·OH)的活性;用正交试验L9(34)对胰蛋白酶的水解条件进行优化,确定最佳的水解条件为温度40℃、pH7.5、酶与底物质量浓度比(E/S)3.5%、底物质量浓度2.5g/100mL、酶解时间3h。此外,本研究还采用胰蛋白酶和胃蛋白酶进行了复合酶解试验,确定复合酶解的最佳水解条件为先用胰蛋白酶酶解3h,然后用胃蛋白酶酶解3h,此时得到的酶解液自由基清除率最高,达到47.38%。     

酶解猪血浆蛋白粉制备ACE抑制肽的工艺优化

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解猪血浆蛋白粉,通过单因素和正交试验考察其水解产物对ACE的抑制活性,并优选酶解工艺条件。结果显示:胃蛋白酶适宜水解血浆蛋白粉,制备ACE抑制肽;影响胃蛋白酶水解的4个因素主次顺序为底物质量浓度>酶解时间>pH值>酶与底物质量比(m酶:m底物),其中底物质量浓度和酶解时间的影响显著(P<0.05),pH值和m酶:m底物的影响不显著(P>0.05);适宜胃蛋白酶水解的条件为pH2.3、水解时间1.5h、底物质量浓度1g/100mL、m酶:m底物1:6。     

双酶水解螺旋藻藻胆蛋白制备ACE抑制肽的工艺优化

以螺旋藻为原料,采用反复冻融和超声波解冻结合法提取藻胆蛋白,利用等电点分离藻胆蛋白,采用SDS-PAGE电泳确定分离蛋白的种类。采用胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶先后水解藻胆蛋白。通过单因素实验和正交实验优化胃蛋白酶和胰蛋白酶水解藻胆蛋白制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的工艺,研究表明:胃蛋白酶水解藻胆蛋白最佳酶解工艺条件是水解温度为37℃,底物质量浓度为6%(w/v),酶与底物比为5220 U/g,此时ACE抑制率为82.07%。胰蛋白酶水解藻胆蛋白最佳酶解条件是温度为42℃,底物质量浓度为6%(w/v),酶与底物比为5220 U/g,此时ACE抑制率为80.35%。利用超滤离心管获得分子量小于3 kDa的藻胆蛋白ACE抑制率94.30%。     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

猪血红蛋白酶解制备ACE抑制肽的研究

本实验选用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶等六种商业蛋白酶在各自最适反应条件下分别水解猪血红蛋白12h,研究其水解产物对血管紧张素转换酶抑制率和蛋白水解度的影响。结果显示:采用胃蛋白酶酶解获得的产物ACE抑制率最高。胃蛋白酶的酶解条件为底物5%(质量分数),酶与底物浓度比E:S=3%,温度37℃,pH2.0,水解4h后其ACE抑制率为81.10%,水解度为6.64%。     

木瓜蛋白酶酶解7S大豆球蛋白的研究

采用实验室提取的7S大豆球蛋白为底物,以水解度为试验考察指标,选择底物浓度、温度、时间、pH值、木瓜蛋白酶酶添加量进行试验.结果表明,木瓜蛋白酶酶解7S大豆球蛋白的最佳工艺条件为:底物浓度4.5%,酶解时间3 h,体系pH值7.2,酶解温度50℃,酶用量为6 000 U/g.原7S大豆球蛋白氮溶解指数(NSI)为40.6%,经最佳酶解条件处理后其NSI值为78.5%.     

响应面法优化油菜花粉谷蛋白酶解条件

本研究在底物浓度、酶底比、pH值、酶解时间和温度五个单因素试验的基础上,利用响应面分析法对油菜花粉谷蛋白最佳酶解条件进行了研究。结果表明,Alcalase碱性蛋白酶水解花粉谷蛋白的最佳水解条件为底物浓度6%,pH值9.0,水解温度50℃,酶底比1460U/g蛋白,水解时间2h。     

二次酶解麦谷蛋白制备富含谷氨酰胺(Gln)活性肽营养液的研究

确定了Gln活性肽的水解用酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶以及酶解过程中最佳酶解条件.通过两次酶解工艺制备Gln活性肽,胰酶的选用条件为底物浓度3%、酶浓度3%、pH 8.0、温度48℃和反应时间2 h;碱性蛋白酶的条件为底物浓度3%、酶浓度3%、pH 8.0、温度68℃和反应时间1.5 h.酶解液通过透析(10 ku以下)后产品有效Gln为213.5 mg/g.产物的分子质量在900～2.4×104 u之间.     

胃-胰蛋白酶联合酶解阿魏菇蛋白制备抗氧化多肽

为了建立酶解阿魏菇蛋白制备抗氧化多肽的最佳优化条件,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶分步水解的方法。运用四因素三水平的正交试验确定胃蛋白酶的酶解优化组合,以水解度和DPPH自由基清除能力为响应值,最终确定酶解的最优组合为:酶解时间1 h,酶添加量8 000 U/g,底物浓度1%,p H2。在此基础上,采用响应面分析法研究胰蛋白酶酶解时间、酶添加量、p H、底物浓度对工艺的影响,以羟自由基(·OH)为响应值,确定的酶解最优条件为:酶解时间1.42 h,酶添加量7 744.93 U/g,p H7.96,底物浓度1.35%,此条件下的·OH清除率为74.7%,与理论值75.59%相对误差在1%以内,说明所建立的模型具有较好的拟合性。     

胃蛋白酶胰蛋白酶水解酪蛋白的研究

主要研究胃蛋白酶、胰蛋白酶水解酪蛋白的过程.首先通过正交试验研究了胃蛋白和胰蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件,分别为酶浓度0.15%、温度55℃、pH7.5、底物浓度6%和酶浓度1%、温度55℃、pH=1.6、底物浓度1%.然后对于胃蛋白酶胰蛋白酶组合水解进行研究,最后通过层析分离和液相色谱初步验证了水解产物含有β-啡肽-7等生物活性多肤.     

双酶水解乳清蛋白ACE抑制肽的制备工艺优化

以乳清蛋白为原料,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶先后水解乳清蛋白,通过单因素试验和正交试验优化胃蛋白酶和胰蛋白酶水解乳清蛋白制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的工艺,将水解物以3 kDa超滤膜过滤,研究表明,胃蛋白酶水解乳清蛋白最佳酶解工艺条件为水解温度37℃、底物质量浓度6 g/100 mL、酶与底物比3 728 U/g,此时乳清蛋白ACE抑制率为86%;胰蛋白酶水解乳清蛋白最佳酶解条件为温度55℃、底物质量浓度6 g/100 mL、酶与底物比3 480 U/g,此时ACE抑制率为72%。利用超滤离心管获得分子量小于3 kDa的乳清蛋白ACE抑制率96%。     

碱性蛋白酶水解鸭骨泥的工艺条件研究

用碱性蛋白酶对鸭骨进行单酶水解研究。在单因素分析的基础上采用正交试验对鸭血的酶解条件进行优化,得到最佳的水解条件为:pH值8.0、温度55℃、底物浓度为3.5%、酶底比为3.5%,水解4h,在此条件下水解度为20.37%。     

青蛤边下脚料的酶解工艺优化研究

以蛋白质水解率为评价指标,从木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶6种蛋白酶中筛选出胰蛋白酶作为最佳水解用酶,通过单因素实验和正交实验确定胰蛋白酶酶解青蛤边下脚料的最佳工艺条件为:加酶量2000 U/g、底物浓度10%(10g/100 m L)、反应p H 8.0、反应温度40.0℃、反应时间4.0 h。在该条件下对青蛤边下脚料的水解率均值为33.84%。研究为青蛤边下脚料的开发和利用提供了理论依据。     

变性脱脂豆粕酶解物的特性研究

为探讨变性脱脂豆粕在胰蛋白酶作用下的水解特性及酶解物的特性,选用国产胰蛋白酶为水解酶对变性豆粕进行水解。研究了变性豆粕中多肽溶出率随温度、pH值、时间、底物浓度及酶用量的变化规律。用正交实验法找出水解变性豆粕的最佳实验条件,并对脱脂豆粕酶解物的性质进行初步研究。结果表明:胰蛋白酶水解变性豆粕的最佳条件为:温度50℃、时间6h、底物质量分数5%、用酶量10000U/g、pH值8.0。在最佳酶解条件下的多肽溶出率为69.34%。脱脂豆粕蛋白酶解物的溶解度比大豆分离蛋白有很大提高,粘度明显低于大豆分离蛋白。此外脱脂豆粕蛋白酶解物有一定的乳化性和乳化稳定性。     

玉足海参仿生酶解的工艺研究

研究玉足海参仿生酶解的最佳工艺。以玉足海参水解蛋白含量及干膏得率的综合分数为指标,在单因素试验的基础上,运用正交设计筛选出最佳仿生酶解参数。最终确定了玉足海参仿生酶解最佳工艺条件:料液比为1︰8 (g/mL)、反应温度为40℃、胃蛋白酶的pH为1.5、胰蛋白酶的pH为8.5、胃蛋白酶用量为底物的1.0%、酶解时间为0.5 h、胰蛋白酶用量为底物的1.5%、酶解时间为3.5 h。在优选出的酶解工艺条件下,测定的玉足海参水解蛋白含量及干膏得率的综合分数最高,该工艺合理、可行、提取率高。     

胃蛋白酶水解大豆蛋白的研究

以大豆分离蛋白为底物,通过单因素分析、正交实验以及水解蛋白曲线的分析,确定了胃蛋白酶水解大豆蛋白的最佳水解条件;蛋白酶水解大豆蛋白的最佳水解条件：pH值为2．0,水解温度为37℃,酶与底物比为7．0％（质量百分比）,底物质量浓度为0．04kg/L,反应时间为24h。     

凡纳滨对虾过敏原酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶对凡纳滨对虾虾肉水解,消减其过敏原。通过间接酶联免疫吸附实验对过敏原消减情况进行检测,以492nm 波长处的OD 值为指标确定最佳水解条件。结果表明：胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0、酶与底物质量比1:100、水解温度45℃、底物质量浓度5g/100mL、水解时间3h,水解物OD 值为0.085;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物质量比1:100、水解温度为60℃、底物质量浓度5g/100mL、水解时间3h,水解物OD 值为0.049。     

复合酶解制备核桃多肽工艺条件的优化

采用复合酶酶解核桃蛋白,以水解度为考察指标,研究了底物质量浓度、复合酶配比、加酶量、pH、酶解温度、酶解时间对酶解的影响,并采用响应面法优化了Alcalase2.4L与胰蛋白酶复合酶解核桃蛋白的工艺参数。最佳酶解条件为:底物质量浓度40 g/L,Alcalase2.4L与胰蛋白酶的复合配比3∶1,pH7.4,酶解温度60.46℃,加酶量5.71%,酶解时间5.05 h。最佳条件下核桃蛋白水解度可达14.54%。