宜宾浓香型白酒窖泥中细菌的系统发育多样性

采用纯培养和免培养(culture-independent)分析方法,对宜宾多家规模以上白酒企业成熟窖泥细菌多样性进行了研究。采用改良牛肉膏蛋白胨培养基(NA)和高氏I号分离培养基分离细菌(包括放线菌),并评价菌株的乙醇耐受能力和低pH耐受能力。构建了窖泥样品总DNA的16S rRNA基因克隆文库。分别挑选不同培养特征的89株细菌纯培养物和427个基因克隆的16S rRNA基因序列,进行系统发育分析。89株纯培养物分属于13个属,以Streptomyces(39株)和Bacillus(27株)为优势属。纯培养菌株中,具备7%浓度乙醇耐受能力和低pH(4.5)耐受能力的分别有16株和10株。挑取的克隆子经测序、去除嵌合体后,得到了406个有效序列,并在97%的序列相似性水平上可将其分为75个OTU(Operational Taxonomic Unit),分属于Clostridia、Bacilli、Acti-nobacteria、γ-Proteobacteria、α-Proteobacteria、Deinococci、Planctomycea、Bacteroidia 8个纲。其中Clostridia为绝对优势菌群,包含50个OTU、227个克隆子;Bacilli包含11个OTU、128个克隆子,为次优势菌群。证明宜宾浓香型白酒窖泥中细菌群落存在丰富的系统发育多样性。     

浓香型白酒窖泥中细菌多样性的免培养技术分析

采用免培养(culture independent)技术直接从浓香型白酒窖泥中提取细菌微生物混合基因组DNA(也叫元基因组DNA),利用细菌16S rDNA通用引物扩增窖泥细菌的序列,根据16S rDNA序列对细菌多样性进行初步分析。采用PCR扩增技术、分子克隆技术以及序列同源性分析等方法测定细菌的16S rDNA,通过与基因数据库中相似菌群序列同源性的比较,得到样品菌种多样性,分别构建系统发育树。结果显示,细菌含有几大类群,表现出高度的细菌多样性。共分为Uncultured bacterium、Clostridium、Lactobacillus、Eubacterium和Syntroph-omonas五个细菌分类。     

不同窖龄浓香型白酒窖泥细菌群落结构及其多样性分析研究

以嘉陵江流域金徽酒厂各车间及四川长江流域上部某酒厂老车间窖泥作为研究对象,对陇、川地区浓香型白酒窖泥微生物通过高通量测序的方式,进行基因组提取、OTU划分、Alpha多样性分析、Beta多样性分析、分类学组成分析,以此为依据对比分析陇、川地区浓香型白酒的窖泥微生物群落组成及多样性差异。样品中共分析出微生物61个纲、289个科和671个属,从分类学组成分析来看金徽酒厂老车间窖泥中优势菌有：Caproiciproducens(25.31%～35.68%)、Petrimonas(15.41%～25.64%)、Syntrophomonas(14.97%～21.68%)、不可培养微生物（10.36%～15.71%）、Proteiniphilum(6.94%～13.85%)、Lactobacillus(8.11%～12.19%)、Sedimentibacter(6.93%～9.74%);四川长江流域某酒厂车间窖泥中优势菌有：Caproiciproducens(21.15%～36.84%)、Petrimonas(2.56%～6.31%)、不可培养微生物（25.23%～32.53%）、不可培养细菌（9...     

浓香型白酒窖泥细菌的分离鉴定

从浓香型白酒窖泥中分离纯化得到5株细菌,对其进行菌落观察、镜检和生理生化检测,参照《伯杰细菌鉴定手册》进行初步鉴定并确定其属名,利用Biolog微生物鉴定系统对其中1株进行鉴定。结果表明,5株细菌分别为Mierococcus(微球菌属)、Staphylococeus(葡萄球菌属)、Pseudomonas(假单胞菌属)、Bacillus(芽孢杆菌属)、Burkholderia glumae(水稻细菌性谷枯病菌)。     

浓香型白酒窖泥中两株细菌的分离鉴定

从泸州老窖浓香型白酒发酵窖池的窖泥样品中分离出了2株细菌。经菌落特征观察和镜检后,利用Bi-olog微生物自动鉴定系统对菌株进行了鉴定,结果表明,XJ-01为Bacillus licheniforims(地衣芽孢杆菌),XJ-02为Bacillus(芽孢杆菌属)。     

浓香型白酒窖泥养护探讨

窖泥是浓香型大曲酒发酵设备的重要组成部分,对浓香型大曲酒的质量和产量有着重要影响。该文阐述了窖泥的功能基础,分析了窖泥老化的现象及原因,总结了窖泥养护的方法,提出了防止功能微生物退化的窖泥养护的措施。只有正确认识窖泥退化的原因和窖泥养护的机理才能实现对窖泥的有效养护,最终提高浓香型白酒的质量和产量。     

浓香型白酒窖泥的培养

对浓香型白酒窖泥的具体培养过程、指标测定结果及注意事项进行了论述。浓香型白酒窖泥的培养从己酸菌选育开始,经过逐级扩大培养后进行窖泥制备,入池发酵后对其各项指标进行检测。结果表明,此工艺条件下制备的窖泥,各项指标均符合标准要求,且活菌数能够达到7.15×106个/g。     

浓香型白酒窖泥理化电化特性分析

为系统判别不同性状浓香型白酒窖泥,测定了新泥、趋老熟泥、老熟泥、趋老化泥、老化泥的物理化学性质和电化学性质。结果表明,不同性状窖泥的理化电化特性存在一定的差异性。通过主成分分析发现对判别不同性状的窖泥方差贡献率大的指标有氧化还原电位、动电电位、总酸、甲酸、乳酸、丁酸和总糖含量,将5种窖泥分为新泥、趋老熟和老熟泥、趋老化和老化泥三类,初步建立了一种判别窖泥性状的方法,为养窖护窖提供一定的参考。     

环境因素胁迫下浓香型白酒窖泥微生物多样性变化规律

采用高通量测序解析了环境因素（温度为物理因素,乙醇、乳酸、乙酸为化学因素）胁迫下窖泥微生物群落结构多样性演替规律。结果表明,经环境因素胁迫发酵后,在目水平下,主要由4个目主导,包括Clostridiales>Thermoanaerobacterales>Lactobacillales≥Bacillales。与培养前相比,Thermoanaerobacterales相对丰度均显著增加;Lactobacillales在28℃和0.2%乳酸胁迫发酵下相对丰度最高,分别为16.5%和28%。在属水平下,主要由6个属主导,包括Sedimentibacter>Caloribacterium>Tepidimicrobium>Lactobacillus≥Tissierella≥Sporanaerobacter。与培养前相比,Sedimentibacter、Tissierella和Sporanaerobacter的相对丰度差异不显著;Lactobacillus在28℃和0.2%乳酸胁迫发酵下相对丰度最高,分别为16.2%和27.65%。相比对照组（34℃培养下）,28℃和乳...     

不同窖龄及位置浓香型白酒窖泥中细菌群落结构的差异性分析

采用高通量测序技术对金徽酒不同窖龄及窖池位置的窖泥细菌群落进行研究,通过聚类分析探寻细菌菌群的时空分布特点,并对窖泥微生物的功能基因进行注释分析。结果表明,14个窖泥样品中,厚壁菌(Firmicutes)是细菌群落的绝对优势菌门,平均相对丰度达73.39%。乳杆菌(Lactobacillus)是5年和7年窖龄窖泥(84.48%)的第一优势菌属。随着窖龄的增加,优势菌属由单一Lactobacillus占优势演变为己酸菌(Caproiciproducens,4.61%)、拟杆菌(Bacteroides,3.16%)等11个细菌属共存的复杂微生态环境。窖泥细菌菌群多样性与窖龄呈显著正相关(P<0.01),且池底窖泥的细菌菌群多样性高于池壁泥。30年和50年窖龄的窖泥细菌群落相似性较高,且细菌菌群之间大多呈正相关关系。同现网络中共出现9个枢纽,各枢纽均与Lactobacillus呈负相关关系。KEGG功能注释图说明影响白酒产量和质量的主要功能基因在窖泥主体特征代谢分类上。该研究为解析甘肃金徽酒窖泥中的细菌群落结构及其时空分布规律奠定了基础。     

浓香型白酒窖泥可培养好氧细菌群落结构分析

采用稀释涂布法分离了浓香型白酒窖池窖泥中的好氧细菌,并利用形态学特征结合16S rRNA基因序列分析技术对分离的细菌进行鉴定,探讨窖泥可培养好氧细菌的群落结构。结果表明,根据菌落和细胞形态特征,分离到了1株无芽孢短杆菌和18株芽孢杆菌,均为革兰氏阳性;采用16S rRNA基因序列分析,将19株细菌鉴定为9个种:米氏解硫胺素芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、菠茨坦短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、Paenibacilluslautus、耐寒短杆菌和P.cellulositrophicus;其中波茨坦短芽孢杆菌、米氏解硫胺素芽孢杆菌和P.lautus鲜有浓香型白酒窖泥中分布的报道。本研究揭示了浓香型白酒窖泥可培养好氧细菌的群落结构,为改善窖泥质量、提高白酒品质等提供了理论依据。     

浓香型白酒窖泥微生物研究综述

浓香型白酒以泥窖为发酵载体,优质老窖泥中含有大量的功能微生物,决定着浓香型白酒的产量和质量,窖泥微生物一直都是白酒科研领域的研究重点,论述了近年来关于浓香型白酒窖泥微生物的相关研究及发展现状,并进行了分析和展望。     

浓香型白酒窖泥培养液的制作方法

介绍了以优质老窖泥、提取混合物、大曲、黄粘土、生长因子、酿酒副产物等为原料,通过科学的组分及含量、合理的发酵温度和发酵周期制备浓香型白酒窖泥培养液的方法,并研究总结了窖泥培养液对提升窖泥活性及白酒质量的作用效果。     

不同质量浓香型白酒窖泥腐殖质组分的研究分析

本文以不同质量窖泥为研究对象,分析其腐殖质碳量及腐殖质组分碳量随窖泥质量的变化规律。研究结果显示腐殖质碳量、胡敏酸碳量、富里酸碳量随窖泥质量的提高而呈上升趋势,但不同质量窖泥中胡敏素碳量无明显的规律性,实验结果为制定窖泥腐殖质评价标准奠定了基础。     

浓香型白酒窖泥微生物群落研究进展

窖泥微生物是决定浓香型白酒风格的关键因素。多种分子生物学新技术（如以聚合酶链式反应（PCR）为基础的技术、基因组学技术、高通量测序技术等）已用于窖泥微生物群落结构及功能研究,检测到越来越多的窖泥微生物,发现微生物多样性越来越高。老窖泥中的标志性优势微生物,在门水平为厚壁菌门（Firmicutes）、广古菌门（Euryarchaeota）、拟杆菌门（Bacteroidetes）,在纲水平为梭菌纲（Clostridia）,在属水平为梭菌属（Clostridium）、沉积微生物属（Sedimentibacter）、甲烷杆菌属（Methanobacterium）等。氢营养型甲烷菌既可以促进窖泥的老熟,又对浓香型白酒的香味物质的生成也有重要作用。有些环境因子对窖泥微生物有明显影响,且与有益微生物呈正相关。     

浓香型白酒窖泥中酵母菌的分离鉴定

从泸州老窖浓香型白酒发酵窖池的窖泥样品中分离出了1株酵母菌。经菌落特征观察和镜检后,利用Biolog微生物自动鉴定系统对该酵母菌进行鉴定,结果判定,该酵母菌为Pichia jadini（i杰丁毕赤酵母）。     

浓香型白酒窖泥中乳酸含量的测定

建立了浓香型白酒窖泥中乳酸含量的检测方法。样品经超声波提取、离心、过滤,Waters Acquity UPLC T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)分离,以20 mmol/L磷酸二氢钾溶液为流动相,流速：0.1 m L/min,进样量：1μL,PDA检测器,γ=208 nm。在100～1000 mg/L范围内呈线性相关,相关系数R²=0.999。窖泥样品中加班回收率98.65%～102%,重现性RSD=3.35%。     

浓香型白酒窖泥中酵母种类的研究

对从我国东北地区某著名酒厂窖泥中分离出的98株酵母菌株进行耐高温、TTC染色和10%耐酒精的三级筛选,最终选出5株耐高温、耐酒精和呼吸强度较高的菌株,进而通过光学显微镜观察其细胞形态、子囊孢子形态、菌丝等特征,并进行麦氏血球板计数、掷孢子的形成实验及一系列生理生化实验,表明上述5株菌分别属于粟酒裂殖酵母,耐热克鲁维酵母、多形汉逊酵母、酿酒酵母、鲁氏接合酵母。      

浓香型白酒窖泥中酵母种类的研究

对从我国东北地区某著名酒厂窖泥中分离出的98株酵母菌株进行耐高温、TTC染色和10%耐酒精的三级筛选,最终选出5株耐高温、耐酒精和呼吸强度较高的菌株,进而通过光学显微镜观察其细胞形态、子囊孢子形态、菌丝等特征,并进行麦氏血球板计数、掷孢子的形成实验及一系列生理生化实验,表明上述5株菌分别属于粟酒裂殖酵母,耐热克鲁维酵母、多形汉逊酵母、酿酒酵母、鲁氏接合酵母。     

浓香型大曲白酒窖泥微生物研究进展

基于传统微生物技术和现代生物学技术对白酒窖泥微生物的研究,阐述了研究白酒酿造微生物所运用生物学技术的各种方法、原理及对窖泥微生物的研究现状。主要对宏基因组、聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）技术、高通量测序技术等现代分子生物技术在窖泥微生物代谢活动和群落代谢机制研究中的应用进行了综述,为解决白酒生产中遇到的实际问题提供了理论指导。