仿刺参精酶解工艺条件优化及体外抗氧化

本研究以仿刺参精(Apostichopus japonicus spermary,ASJS)为材料,以水解度为指标优化了酶解工艺条件,并考察了酶解产物的体外抗氧化效果。实验选用木瓜蛋白酶(PAP)、复合蛋白酶(PRO)和风味蛋白酶(FLA)作为实验用酶,以双缩脲法结合三氯乙酸法测定水解度,通过单因素与正交实验,优化了单酶酶解工艺条件,并与双酶及三酶复配水解进行了比较实验,最后对不同的水解产物进行了体外抗氧化活性测定。结果表明:单酶最佳酶解工艺条件为PAP:酶添加量3.0%、温度70℃及反应时间4 h;PRO:酶添加量3.0%、温度45℃及反应时间4 h;FLA为:酶添加量2.0%、温度45℃及反应时间4 h。在最佳酶解工艺条件下PAP水解度为32.14%,PRO为31.09%,FLA为11.89%。双酶及三酶的复配水解工艺检测到的水解度均低于单PAP及单PRO。不同水解产物清除羟自由基和超氧阴离子自由基能力结果为,在样品浓度为5 mg/m L和10 mg/m L时,ASJS的PAP酶解产物好于PRO、FLA、双酶、三酶复配,同时也好于仿刺参卵及体壁PAP酶解产物。综上可知,ASJS的PAP水解产物显示出较好的体外抗氧化活性,可以进一步开发利用。      

南方刺参性腺多肽酶解工艺优化及抗氧化活性分析

研究南方养殖刺参性腺多肽的酶解提取条件,并分析南北刺参性腺多肽抗氧化活性。选用复合蛋白酶对刺参性腺进行水解,以酶解多肽得率为指标,选取酶解温度、底物浓度、pH、酶解时间、酶用量等为主要影响因素,在单因素实验基础上应用响应面分析法对以上5个因子进行优化,确定刺参性腺多肽酶解工艺。试验结果表明,刺参性腺多肽酶解最佳条件:温度为56 ℃,底物浓度11.5%,酶添加量0.5 mKat/g,pH7.1,酶解时间4.5 h,此时刺参性腺多肽得率可达到67.97%±0.96%,与预测值相差0.26%。抗氧化试验结果表明,刺参性腺多肽浓度在40 mg/mL时,羟自由基抑制率与超氧自由基抑制率均大于0.1 mg/mL的维生素C溶液,60 mg/mL刺参性腺多肽的FRAP值大于0.1 mg/mL的维生素C溶液,南、北方养殖刺参性腺酶解多肽的抗氧化能力无显著差异。     

响应面法优化仿刺参酶解工艺及其改善睡眠活性的研究

以水解度为主要指标,筛选了动物蛋白酶、海参水解酶、木瓜蛋白酶、水产蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶对仿刺参的酶解效果,考察了酶解温度、加酶量、水解时间、p H等单因素条件对水解度的影响,在此基础上通过响应面分析获得仿刺参的最佳酶解工艺,并对最佳工艺条件下酶解液高、中、低剂量对小鼠改善睡眠的功能进行了研究。结果表明:水产蛋白酶对仿刺参蛋白的水解效果优于其他受试蛋白酶,且响应面结果显示其加酶量对水解度具有极显著影响(p<0.01);响应面法优化得到刺参酶解的最适条件为:p H7、温度49℃、加酶量8%(酶/底物百分比)、时间4h,其水解度达到28.0%;仿刺参酶解液高、中、低剂量组对小鼠没有明显的直接催眠作用,但中剂量组能显著增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率(p<0.05)。     

刺参不同酶解产物的抗氧化活性分析

为了探究刺参不同酶解产物的抗氧化活性,外源添加了3种蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶）酶解鲜活刺参。测定了不同蛋白酶组的水解度、分子量分布、3种自由基（DPPH∙、O2-∙、∙OH）的清除率。结果表明：空白组水解度随着酶解时间的延长没有明显差异,蛋白酶组的水解度与酶解时间呈正相关关系,不同蛋白酶组水解度高低顺序为,中性蛋白酶>碱性蛋白酶>木瓜蛋白酶,中性蛋白酶组最高为19.4%,木瓜蛋白酶组最低为16.1%;酶解后大分子量片段减少,<200 u的氨基酸片段增加;碱性蛋白酶组,酶解时间1 h,粗肽得率最高达到64.2%。酶解时间2 h内,蛋白酶酶解后酶解液的抗氧化能力比未处理的样品明显提高,并且与酶解液浓度呈正相关关系;质量浓度为5 mg/mL的中性蛋白酶组（酶解0.5 h）,DPPH∙清除率可达到79.64%;碱性蛋白酶组3 h,∙O2-清除率为49.58%,0.5 h∙OH清除率最高为21.78%。综上所述,在抗氧化活性方面,中性蛋白酶酶解产物在外源添加的三种蛋白酶中效果最好,外源添加蛋白酶是提高刺参蛋白利用率的有效方式。     

仿刺参肠道组织酶解工艺优化及肽段分析

以仿刺参肠道组织为原料,优化酶解工艺条件,研究梯级肽对小鼠原代巨噬细胞过氧化氢损伤的保护作用。采用单因素试验及响应面试验分析法对酶解工艺条件进行优化,利用超滤法获取不同截留分子质量的肽段,采用噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测细胞活力。结果表明：通过响应面优化得最佳条件为：酶解温度50.10 ℃、酶解时间2.84 h、加酶量2.639万 U时水解度可达41.82%。通过超滤制备,分别得到分子质量小于650、650～1 000 u与1 000～10 000 u肽段,各肽段均能显著提高过氧化氢损伤细胞的细胞活力值,所获肽段对过氧化氢损伤巨噬细胞具有显著保护作用,其中小于650 u肽段更佳。     

响应面法优化龙须菜蛋白酶解工艺及酶解液的抗氧化活性

为获得高抗氧化活性的龙须菜蛋白酶酶解液,运用响应面(RSM)分析方法对龙须菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素实验基础上,以亚铁离子螯合率和DPPH自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、p H、酶解温度、底物质量浓度、加酶量对龙须菜蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响。结果表明:在所选的5种蛋白酶中,复合蛋白酶是龙须菜蛋白酶解的最适用酶;酶解液抗氧化活性的最优酶解条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50.1℃、p H7.0、底物浓度10 g/L、加酶量0.1%(0.15 AU/g)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为74.61%,DPPH自由基清除率为47.66%,水解度为17.58%。对比常用抗氧化剂,酶解液在亚铁离子螯合能力方面显著高于0.01%维生素C和0.01%BHA(p<0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%维生素C和0.01%BHA(p<0.05)。优化后的龙须菜蛋白酶酶解液具有一定的抗氧化活性。      

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。     

响应面法优化双酶提取仿刺参卵粗多糖工艺及其抗氧化性研究

以仿刺参卵为原料提取多糖,在单因素实验的基础上,通过响应面分析优化双酶提取仿刺参卵多糖工艺,并对其体外抗氧化活性进行初步研究。结果表明:仿刺参卵多糖的最佳提取条件为复合蛋白酶与木瓜蛋白酶配比1∶2、加酶量2.78%、酶解温度60℃、酶解时间6 h,在此条件下卵多糖的预测得率为8.84‰,实际得率为8.76‰;仿刺参卵多糖的自由基清除活性呈明显的剂量依赖关系,对DPPH自由基的IC₅₀为1.71 mg/m L,是一种良好的天然抗氧化剂。      

响应面法优化莜麦蛋白的酶解工艺及酶解物抗氧化活性的研究

以莜麦蛋白为原料,采用响应面分析法优化莜麦蛋白制备抗氧化肽工艺。以酶解液的还原能力为指标,研究pH值、加酶量、酶解温度和酶解时间对莜麦蛋白酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素试验的基础上,采用4因素3水平的响应面分析法优化莜麦蛋白制备抗氧化肽工艺,同时研究其酶解物抗氧化活性。结果表明,胰蛋白酶酶解莜麦蛋白的最佳工艺条件为:pH8.1,加酶量16 900U/g,酶解温度55℃,酶解时间2.62h,该条件下制备的莜麦蛋白酶解物具有较好的抗氧化活性。     

鲤鱼鳞酶解工艺优化及酶解液抗氧化活性研究

为得到高抗氧化活性的鲤鱼鳞胶原蛋白酶解液,试验以羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2-·）清除率作为主要检测指标,通过单因素试验研究酶解温度、pH值、加酶量、底物浓度、酶解时间对鱼鳞胶原蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响。在此基础上,采用响应面分析法对酶解工艺条件进行优化。得到试验最优工艺为酶解时间4.4 h,酶解温度66.0℃,pH8.5,底物浓度20 mg/mL,加酶量4%。在此条件下,酶解液的·OH清除率为80.24%,O2-·清除率为65.34%,亚铁离子（Fe2＋）螯合能力为59.73%。对比常用抗氧化剂,在O2-·清除能力方面,酶解液效果低于丁基羟基茴香醚（butylated hydroxyanisole,BHA）和抗坏血酸（P＜0.05）,但在·OH清除能力方面,酶解液已达到BHA和抗坏血酸的水平（P＞0.05）,在Fe2＋螯合能力方面,酶解液显著优于BHA和抗坏血酸（P＜0.05）。     

鹅肉蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

运用响应面(RSM)分析对鹅肉蛋白酶解工艺条件进行优化。在单因素试验基础上,以抗氧化活性为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、pH值、固液比、酶添加量对鹅肉蛋白水解度和抗氧化活性的影响。结果表明:鹅肉蛋白最佳酶解条件为酶解温度53℃、酶解液pH10.5、固液比1:3(m/V)、酶解时间7.2h,加酶量1200U/g,在此条件下,酶解液对Fe3+还原力为0.402,水解度可达34.74%。     

仿刺参卵酶解工艺条件优化

以仿刺参卵为材料,优化出酶解工艺,获得高水解度、风味独特的水解产物。首先,通过实验从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶与风味蛋白酶中筛选出合适的水解用酶。然后通过单因素试验与正交试验,分别考察酶解温度、加酶量及酶解时间对筛选出的各种蛋白酶水解度的影响,获得单酶的优化水解工艺条件。最后进行多酶体系综合酶解实验,综合考虑水解度、生产成本和水解液感官评定结果来确定最佳水解工艺条件。结果表明:最佳酶解条件为:以混合酶(木瓜蛋白酶与复合蛋白酶质量比1:1)在加酶量2.0%、酶解温度75℃条件下酶解4h,煮沸灭酶活后再添加1.5%风味蛋白酶,在酶解温度45℃条件下继续酶解1h,在此工艺条件下水解度达到了77.11%,并且水解液鲜香浓郁,状态均匀澄清,可用于开发风味独特的功能食品。     

酶法水解花生蛋白及产物抗氧化活性的研究

本文以花生粕中提取的花生蛋白为原料,分别使用Alcalase、Protamex和Papain酶解,研究不同酶解时间酶解产物的水解度、三氯乙酸中可溶性氮含量和抗氧化活性的变化规律。结果表明:随着酶解时间的延长,Alcalase、Protamex和Papain酶解花生蛋白的酶解产物的水解度先逐渐增加后趋于稳定,三氯乙酸中可溶性氮含量先增加后减小,超氧阴离子自由基清除能力先增加后有小幅降低。不同酶的酶解产物的抗氧化性能与其水解能力并不直接相关。     

仿刺参精低分子质量多肽的制备及抗氧化作用

本实验以仿刺参精为原料,制备出多肽并考察其体外和体内抗氧化活性。以清除羟自由基（•OH）能力为指标,考察木瓜蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶的5 种酶解方式产生的酶解产物的活性,优化实验用酶。经超滤分级后,测定各级组分的分子质量分布、可溶性蛋白质含量、多肽含量和清除•OH能力。选择清除•OH能力较好的低分子质量多肽组分,测定氨基酸组成,设定低、中、高剂量组（100、200、600 mg/kg（以体质量计,下同））、模型对照组、和空白对照组进行42 d小鼠灌胃实验。实验完成后,检测小鼠血液中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力、谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量和蛋白质羰基含量。结果表明,由木瓜蛋白酶水解,经超滤制备的＜1 000 u仿刺参精多肽具有较好的体外清除•OH能力,其半数抑制浓度为6.02 mg/mL,含量占比为58%,氨基酸组成中谷氨酸等酸性氨基酸和酪氨酸等疏水性氨基酸含量丰富。小鼠抗氧化模型实验表明,实验组生长正常,高剂量多肽组小鼠体内SOD活力显著提高（P＜0.05）,GSH的含量提高极显著（P＜0.01）、GSH-Px活力也呈剂量依赖性升高,但未达到差异显著（P＞0.05）。MDA和蛋白质羰基含量得到有效降低,后者达到差异显著（P＜0.05）。研究结果显示：＜1 000 u仿刺参精多肽具有提高小鼠抗氧化能力的效果,可以作为相关功能产品开发的原材料。     

响应面试验优化基于胶原特性酶解猪皮工艺及其抗氧化特性

以新鲜猪皮为原料,基于凝胶特性以羟脯氨酸含量为指标,对影响胃蛋白酶酶解过程的各个因素进行研究,通过Box-Behnken设计优化酶解工艺;以清除O2－•、•OH、H2O2能力和DNA损伤保护作用为指标研究酶解产物的抗氧化功能。结果表明：最佳酶解条件为加酶量0.25%、料液比1∶2（g/mL）、酶解时间1.65 h、酶解温度41.15 ℃,在此酶解条件下其产物清除O2－•的IC50值为20.19 mg/mL;清除•OH的IC50值为6.36 mg/mL;清除H2O2的IC50值为0.65 mg/mL;对DNA损伤保护作用的IC50值为1.86 mg/mL。     

裙带菜孢子叶仿生酶解工艺优化及酶解肽的抗氧化活性分析

以裙带菜孢子叶为原料,采用仿生酶解工艺制备生物活性肽。以多肽得率和水解度为主要指标,在单因素实验基础上采用响应面分析法优化酶解工艺条件,并评价了酶解肽对三种自由基（DPPH、ABTS、OH）的清除能力。结果表明:裙带菜仿生酶解工艺的最优条件为超声功率720 W、超声破壁时间40 min、料液比1:104 g/mL、胃蛋白酶加酶量为6.1%、酶解时间2.5 h、胰蛋白酶加酶量为5%、酶解时间3 h。在此条件下进行酶解,多肽得率为21.17%,水解度为43.07%。酶解肽对DPPH、ABTS、OH自由基具有较好的清除效果,其IC₅₀值分别为5.71、0.82、1.35 mg/mL。优化的裙带菜孢子叶仿生酶解工艺合理可行,酶解肽具有较好的自由基清除能力,说明其具有良好的抗氧化活性,可作为功能性食品开发的配料。     

核桃蛋白酶解工艺优化与酶解液抗氧化活性分析

采用单因素和正交实验,以水解度为评价指标,研究了加酶量、pH值、酶解温度和料液比对酶解工艺的影响。确定了碱性蛋白酶水解核桃蛋白的酶解条件:酶解温度60℃,料液比1∶25,pH10.0,加酶量7%,酶解时间为2h。对在此条件下制备的酶解液的抗氧化性进行了研究。对于水解度分别为30%、20%、10%的水解液进行了分析。结果表明,3个水解度水解液对二苯代苦味酰基自由基、羟基自由基和超氧阴离子均有较好的清除能力,且还原性较强。     

无花果酶解制汁工艺优化及抗氧化活性

在单因素试验基础上采用响应面法优化纤维素酶和果胶酶制备无花果汁的工艺参数,并通过测定果汁的DPPH自由基清除率、抑制羟自由基活力及总抗氧化能力,评价其体外抗氧化活性。结果表明,无花果最佳酶解制汁工艺参数为纤维素酶添加量2.5%、果胶酶添加量0.6%、酶解温度50℃、酶解时间90 min,此条件下无花果出汁率为75.13%,汁中多酚含量为626.79μg/mL;所制备无花果汁具有较高的抗氧化活性。研究结果可为无花果汁的产业化生产提供理论依据。