动物肌肉组织基因组DNA两种提取方法的比较

以猪、牛、羊、鸡等动物新鲜冷冻样品为实验材料,采用SDS法和异硫氰酸胍法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行光密度、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测,比较了这两种方法的提取效果。结果表明：采用SDS法和异硫氰酸胍法均能从动物肌肉组织提取到完整的基因组DNA,均可满足PCR等后继分子生物学实验的要求。但是异硫氰酸胍法提取的基因组在纯度和浓度及稳定性方面优于SDS法,且操作简单,耗时短,更利于快速检测。     

动物肌肉组织DNA的提取方法及实时荧光定量PCR检测

以生鲜羊肉、猪肉、鸡肉、牛肉、鸭肉为实验材料,采用SDS法、异硫氰酸胍法、试剂盒法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和实时荧光定量PCR检测。结果表明,试剂盒法提取的基因组DNA在浓度和纯度方面均优于SDS法和异硫氰酸胍法。通过对三种提取方法建立的标准曲线进行比较,回归系数(R2)按照质量排序为:试剂盒法≥异硫氰酸胍法SDS法,扩增效率按照质量排序为:试剂盒法异硫氰酸胍法SDS法。三种提取方法的羊源性成分灵敏度检测,最低检出限均为80 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.684%,小于异硫氰酸胍法0.734%和SDS法1.075%;猪源性成分灵敏度检测,SDS法的最低检出限为80 pg/μL,异硫氰酸胍法和试剂盒法的最低检出限均为16 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.092%,小于异硫氰酸胍法4.640%;鸡源性成分灵敏度检测,SDS法和异硫氰酸胍法的最低检出限均为3.2 pg/μL,试剂盒法的最低检出限为640 fg/μL,明显高于SDS法和异硫氰酸胍法。综上所述,试剂盒法提取的基因组DNA更有利于运用实时荧光定量PCR技术进行食物掺假和物种鉴别工作。     

豆奶粉基因组DNA不同提取方法的比较

以三种市售不同品牌的豆奶粉为材料,利用CTAB法和SDS法提取豆奶粉基因组DNA,探索从豆奶粉中获得高质量DNA的提取方法。结果表明:CTAB法提取的三种豆奶粉DNA的OD260/OD280值在2.01~2.05,因组DNA纯度较高,符合要求。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示利用CTAB法获得的三种豆奶粉基因组DNA的电泳条带均清晰明亮,而且比SDS法获得的电泳条带更明亮,无弥散拖尾。因此,CTAB法是提取豆奶粉基因组DNA的更好更有效的办法,是理想的提取豆奶粉基因组DNA的一种方法,为进一步开展豆奶粉食物掺假、转基因成分测定奠定基础。     

猪肉类罐头食品中总DNA提取方法的比较

以7种猪肉类罐头食品为研究对象,比较了EE101-02 DNA提取试剂盒、SDS法、CTAB法和异硫氰酸胍法对猪肉罐头食品DNA的提取效果。以4种方法提取的总DNA为模板,根据猪线粒体基因组(mt DNA)16s r RNA基因和Cyt b基因,利用3对通用引物分别扩增片段大小为244 bp(16s r RNA)、376 bp(Cyt b)、472 bp(Cyt b)的目的片段,以评价不同方法提取的总DNA的效果。结果表明:不同提取方法提取效果差异明显——异硫氰酸胍法提取效果最好,其提取的7种罐头的总DNA均可利用16s r RNA和Cyt b通用引物分别有效扩增出244bp、376 bp目的 DNA片段,CTAB法和SDS法次之,EE101-02 DNA提取试剂盒提取效果最差。另外绝大多数猪肉类罐头样品中未能扩增获得472 bp大小的目的片段,表明猪肉类罐头产品中DNA降解严重。     

肉制品中志贺氏菌DNA的快速提取方法

肉制品中致病菌DNA的提取对PCR检测具有重要意义。以污染志贺氏菌的猪肉为材料,比较了沸水浴法、裂解液煮沸法、CTAB/SDS法、改良的碱性异硫氰酸胍法4种提取方法对志贺氏菌DNA的提取效果,并以提取的DNA为模板进行PCR检测。结果表明:改良的碱性异硫氰酸胍法提取志贺氏菌DNA的效果较好,猪肉中志贺氏菌的PCR最低检出限为5×100CFU/g,整个检测时间<8h。经改良的碱性异硫氰酸胍法操作简便、经济省时,可用于肉类的PCR检测。     

几种提取转基因木瓜DNA的方法比较

目的 比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果, 以提高转基因木瓜的检测准确率。方法 对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR, 同时对基因表达零件CaMV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR, 以检测提取DNA的质量。结果 分析电泳产物发现, SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求, 其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示, 3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论 比较3种提取方法及3种木瓜材料, 发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。     

几种提取转基因木瓜DNA方法的比较

目的比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果,以提高转基因木瓜的检测准确率。方法对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR,同时对基因表达零件Ca MV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR,以检测提取DNA的质量。结果分析电泳产物发现,SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求,其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示,3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论比较3种提取方法及3种木瓜材料,发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。     

一种适用于高通量测序的红曲霉基因组DNA提取方法

通过比较5种红曲霉基因组DNA的提取方法,旨在获得一种简便高效、大量提取高质量基因组DNA的优化方法。分别使用改进CTAB法、改进氯化苄法、蜗牛酶法、SDS法、试剂盒法提取红曲霉基因组DNA,结果显示:除蜗牛酶外,其余4种方法均能够提取出红曲霉基因组DNA,其中利用改进CTAB法能够快速、经济地得到大量高纯度的DNA样品,完全满足高通量测序、分子标记等一系列精密分子生物学研究的要求。     

雪蛤基因组DNA提取方法的研究及条形码分子鉴定

高质量的DNA是开展分子生物学研究的基础,雪蛤基质由于含有大量脂肪、蛋白质和多糖,严重干扰其基因组DNA的提取。采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、加酶洗洁精法、十二烷基苯磺酸钠(SDS)法、SDS结合CTAB法提取雪蛤基因组DNA,通过紫外分光光度法、凝胶电泳法及CoⅠ序列扩增法比较了4种提取方法得到的DNA质量。结果显示,加酶洗洁精法、SDS法、SDS结合CTAB法均可提取到雪蛤DNA,其中以SDS结合CTAB法获得的DNA质量最佳。通过与基原物种的DNA条形码进行比对,证明3种方法均可提供符合要求的DNA,为雪蛤的分子生物学研究奠定了基础。     

酒醅微生物总DNA提取方法研究

高质量的微生物基因组DNA是进行微生物分子生态研究分析的基础。目前关于微生物基因组DNA的提取方法较多,根据研究对象的不同而方法各异。本实验针对浓香型白酒酒醅环境,对比了SDS高盐提取法和CTAB提取方法获得酒醅中微生物基因组DNA,对提取DNA进行PCR特异性扩增和DGGE多样性检测,获得适合不同研究目标的酒醅环境微生物基因组DNA提取方法。结果表明,(石英砂+CTAB)法可获得最大浓度总DNA;(液氮+SDS+溶菌酶)法可获得最高纯度总DNA。     

灵芝速溶茶的研制

以灵芝为主要原料,经过浸提浓缩、喷雾干燥等工艺,配以适当辅料调制,研制成热水可溶,溶液透明的灵芝速溶茶。采用单因素正交实验确定灵芝速溶茶的最佳配方为：麦芽糊精25％、CMC0．15％、麦芽糊精和p．环状糊精的比例12：1,蔗糖的含量9‰所制得的灵芝速溶茶颗粒细腻呈黄白色,溶解快速且无沉淀,具有灵芝特有的香味。     

微波法制备抗性麦芽糊精的研究

研究了微波制备抗性麦芽糊精的方法,主要以抗性麦芽糊精的含量和白度作为参考指标,在单因素的基础上,选取微波功率、微波时间、加酸量三个因素进行Box-Benhnken中心组合设计,再通过响应面分析法对实验条件进行优化,结果显示:微波功率630W,微波处理时间10.12min,加酸量是6.43%.得到的抗性麦芽糊精的含量43.30%,白度是76.9%.     

微胶囊化菠萝粉关键技术研究

以菠萝粉为芯材,阿拉伯胶和麦芽糊精为壁材,菠萝粉中总胡萝卜素的包埋率和Vc保留率为主要考察指标,通过乳化、均质、喷雾干燥等工艺,制备菠萝粉微胶囊,探讨喷雾干燥法制备菠萝粉微胶囊的工艺条件。通过单因素试验和正交试验确定最佳的工艺条件为:进风温度180℃,壁芯比8:50,壁材内部的配比(阿拉伯胶/麦芽糊精)1:12,入料流量15mL/min,所得微胶囊产品的包埋率为89.01%。     

猕猴桃籽油的超临界萃取与微胶囊化研究

以超临界CO2萃取猕猴桃籽油并对其进行微胶囊化研究。结果表明,超临界CO2萃取猕猴桃籽油的适宜工艺条件为:萃取压力30MPa、萃取温度45℃、萃取时间120～150min;猕猴桃籽油微胶囊配方中对产品包埋率的影响大小顺序为芯材与壁材配比>壁材配比(阿拉伯胶/麦芽糊精)>料液浓度;正交试验所得微胶囊最佳配比为:阿拉伯胶和麦芽糊精之比为2:1,芯材与壁材比率为1:3,料液浓度为25%(W/V);所得微胶囊产品的包埋率为70%,微胶囊化处理后氧化稳定性显著增强。经最佳配比和工艺制成的猕猴桃籽油微胶囊产品的外形颗粒较圆整,大小分布均匀,表面光滑。     

EFFECT OF KILNING ON MALT STARCH AND ON THE DEXTRIN CONTENT OF RESULTING WORTS AND BEERS

Examination of starches separated from green malt and from kilned malts of colour ranging between 3 and 23 shows that only small amounts of “new” carbohydrate linkages are formed in the starches during kilning, though the colour changes from white to buff and the amount of contaminating protein increases. Nevertheless, standard enzymic treatments show that the higher the colour value of the malt, the less susceptible it is to attack by amylases, and the larger is the content of non-fermentable, non-dialysable dextrin. Although the amount of non-dialysable dextrin rises as the colour value of the malt increases, dextrin content of the derived wort is not directly related to the enzymic activity of the malt. Thus, the non-fermentable dextrin of wort from malt of colour 3 is little higher than that of wort from green malt, despite the considerably higher diastatic power of the latter. Head retention values of draught and bottled beers from the green malt and kilned malts of colours 3, 6 and 13 show no correlation with dextrin content.     

枣粉喷雾干燥工艺研究

以干红枣为原料，经浸提、调配、均质和喷雾干燥工艺生产枣粉，试验研究了不同种类添加剂和添加量对喷雾干燥效果影响。试验结果表明，当麦芽糊精加入量为70％，CMC加入量为1．5％时，喷粉效果好。     

动物明胶中3种DNA提取方法的比较研究

基于DNA水平的分子生物学检测方法,因其高特异性、高灵敏度且简便快速等优点,成为明胶动物来源鉴别检测的有效方法。但明胶的特殊加工工艺给DNA的提取带来了一定的困难。研究中选取了牛皮明胶、牛骨明胶和猪皮明胶等不同动物品种和不同动物组织来源的明胶产品,采用了试剂盒法、蛋白沉淀法和裂解抽提法等3种DNA提取方法,从DNA提取质量、提取效率及明胶动物种类来源PCR扩增等方面对3种方法进行了比较。研究结果表明,裂解抽提法所提取的明胶中的DNA质量优于前2种方法,且适合于进一步的PCR扩增检测,是适合于明胶DNA提取的有效方法。     

可溶性免疫球蛋白微胶囊制备工艺研究

以微孔淀粉和麦芽糊精为壁材,免疫球蛋白为芯材,对免疫球蛋白胶囊化配方和工艺进行研究;试验结果表明,最佳条件为:麦芽糊精:微孔淀粉为1:1,免疫球蛋白含量10%,总固形物含量40%,喷雾干燥进风温度140℃,出风温度80℃。     

喷雾干燥荔枝固体饮料制备工艺及配方研究

研究了喷雾干燥荔枝固体饮料的工艺配方,实验以荔枝汁为原料,麦芽糊精、蔗糖、羧甲基纤维素钠(CMC)、β-环状糊精为辅料,利用均质与喷雾干燥相结合的工艺制成荔枝固体饮料。试验得到荔枝固体饮料的最佳配方为:荔枝汁65%、麦芽糊精27.55%、β-环状糊精2.30%、CMC 0.15%、蔗糖含量为5%。