鱼藤素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用与途径

目的探讨鱼藤素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用及其与线粒体凋亡途径的关系。方法用不同浓度的鱼藤素处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;罗丹明123单染法观察细胞线粒体膜电位的变化;Western blot法检测细胞cyt-c、caspase-3蛋白的表达水平;分光光度法检测细胞caspase-3蛋白活性。结果鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖性;800和1200nmol/L鱼藤素处理组的细胞早期凋亡率显著高于未处理组;鱼藤素处理后,细胞线粒体膜电位降低,细胞浆内cyt-c和caspase-3蛋白的表达水平及caspase-3活性均明显升高。结论鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有显著的增殖抑制、诱导凋亡作用,其作用与线粒体膜电位降低、释放细胞色素c,从而激活caspase-3依赖途径有关。     

白芦藜醇对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察白芦藜醇(resveratrol,Res)对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞U-2OS,用不同浓度的Res(5、10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测Res对U-2OS细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对细胞周期和凋亡的影响;应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶活性;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达水平。结果 Res作用24 h时,与空白对照组及DMSO组比较,20和40μmol/L Res组的细胞增殖抑制率、G0/G1和G2/M期的细胞比例、细胞凋亡率、Caspase-3酶活性显著升高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05);20μmol/L Res组U-2OS细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论 Res通过诱导提高Caspase-3酶活性,上调促凋亡基因Bax、Caspase-3及下调抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,从而抑制U-2OS细胞的增殖,促进其凋亡,为Res治疗骨肉瘤提供了实验依据。     

辛二酰苯胺氧肟酸对人脐静脉内皮细胞增殖及血管形成的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone deacetylases inhibitor,HDACi)辛二酰苯胺氧肟酸(Suberoy-lanilide hydroxamic acid,SAHA)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖及血管形成能力的影响。方法收集处于对数生长期的HUVEC,以不同浓度的SAHA分别处理24和48 h,另设不加SAHA的对照组,采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,并计算增殖抑制率和半数抑制浓度(IC50)。采用流式细胞术检测经15μmol/L SAHA处理48 h的HUVEC凋亡和细胞周期,基质胶体外血管生成试验检测HUVEC的体外成管能力,Western blot法检测HUVEC细胞周期及凋亡相关蛋白的表达水平。结果随着SAHA浓度的增加及作用时间的延长,其对HUVEC增殖的抑制作用增强,SAHA浓度高于80μmol/L时,抑制率增加不明显,24和48 h的IC50值分别为60.53和30.49μmol/L;经15μmol/L SAHA处理48 h,与对照组相比,HUVEC的凋亡率明显增加(P<0.001),S期细胞比例明显升高(P<0.001),G0/G1期比例明显降低(P<0.001),体外成管能力明显下降,P21、caspase-3激活型、caspase-9酶原和激活型蛋白的表达水平均明显升高(P<0.001)。结论 SAHA能够抑制HUVEC增殖及体外血管形成能力,并使P21、caspase-3和caspase-9蛋白水平上调,为肿瘤的治疗提供了一种新的思路。     

神经纤毛蛋白1基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响

目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin1,NRP1)基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响。方法构建NRP1基因特异性shRNA表达质粒,经脂质体介导转染入人胃腺癌SGC7901细胞。采用Western blot法检测细胞中NRP1蛋白的表达水平,应用流式细胞术和Annexin-V-FITC/PI法检测细胞的增殖水平和凋亡率。结果经酶切及测序鉴定证明,shRNA-NRP1质粒构建正确,转染SGC7901细胞48h后,能有效抑制NRP1蛋白的表达,G0/G1期细胞百分比显著升高,S期细胞显著减少,细胞凋亡率增加。结论 shRNA-NRP1质粒能有效抑制胃腺癌SGC7901细胞株NRP1蛋白的表达,细胞周期阻滞在G0/G1期,从而降低细胞的增殖水平,诱导细胞进入凋亡期。     

人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其机制

目的研究人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法取对数生长期的CNE2细胞,用不同浓度的Rh2(20、40、60、80、100μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),并设对照组(正常培养),采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;用最适作用浓度的Rh2分别处理CNE2细胞24、48、72 h,采用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、周期分布以及膜电位的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、CyclinD1、P53的表达水平。结果 Rh2对CNE2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,60μmol/L Rh2作用72 h为最适作用浓度和时间。经60μmol/L的Rh2作用48、72 h后,凋亡细胞数目增多,凋亡细胞体积变小,细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂,边集程度增大等现象。与对照组比较,经60μmol/L的Rh2作用24、48、72 h,CNE2细胞的凋亡率逐渐增加(P0.01);G0/G1期细胞比例逐渐升高(P0.01),S期(P0.01)和G2/M期细胞比例逐渐下降;细胞的膜电位逐渐降低(P0.05);促凋亡蛋白Bax、激活型Caspase-3和P53蛋白表达上调(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期相关蛋白CyclinD1表达下调(P0.05)。结论人参皂苷单体Rh2具有抑制CNE2细胞增殖,使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能是通过Caspase/CyclinD1信号通路实现的。     

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对小鼠乳腺癌4T1细胞生物学行为的影响

目的探讨联氨基姜黄素(Hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(Liposome nanoparticles,NPs)对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法采用薄膜分散-超声法制备HC-NPs,透射电镜检测纳米颗粒的粒径大小。将4T1细胞分为PBS组、NPs组和HC-NPs组,分别加入10%(v/v)PBS、10%(v/v)NP、10%(v/v)HC-NPs,培养24 h后,MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化;刘氏染色法检测细胞的形态;Transwell试验检测4T1细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测转导和转录激活因子STAT3及细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移相关蛋白的表达水平。结果透射电镜下可见HC-NPs为150 nm左右的脂质体颗粒。HC-NPs对4T1细胞的增殖抑制率明显高于NPs组(P<0.01);与PBS组和NPs组相比,HC-NPs可使细胞形态不规则,诱导细胞周期发生G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),明显抑制细胞侵袭和迁移(P<0.01)及STAT3的激活,下调CyclinD1、c-Myc、Bcl-2、Survivin、MMP-9的表达,同时上调Bax的表达(P<0.05)。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制4T1细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡。     

siRNA介导NF-κB p65沉默联合5-Fu诱导胃癌细胞SGC7901凋亡

目的运用siRNA抑制胃癌细胞株SGC7901中NF-κB p65基因的表达,探讨其对细胞增殖和凋亡的影响,并分析该基因对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性的作用。方法将SGC7901细胞分为空白对照组、脂质体组、5-Fu组、siRNA组和联合组,除空白对照组外,各组分别给予相应的药物。Western blot法检测各组细胞NF-κBp65蛋白的表达;Annexin V-PI法检测细胞凋亡;MTT法检测各组细胞的增殖水平。结果NF-κBp65蛋白在空白对照组和脂质体组中高表达,在5-Fu组、siRNA组和联合组中低表达,其中以联合组表达量最低;各组细胞早期凋亡率分别为1.40%±0.20%、2.36%±0.58%、6.68%±0.34%、6.60%±0.64%和21.62%±1.12%,其中以联合组最高;细胞的增殖活性随着siRNA浓度的增加和作用时间的延长而下降。结论siRNA能有效抑制NF-κBp65基因的表达,从而抑制SGC7901细胞增殖,促进其凋亡,并增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

氨氯地平对小鼠肝癌H_(22)细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的探讨氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响。方法用不同浓度的氨氯地平作用小鼠肝癌H22细胞,采用MTT法检测细胞的增殖水平,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,免疫组化及RT-PCR法检测细胞周期蛋白CyclinB1和肿瘤抑制基因p53在蛋白水平和基因水平的表达。结果氨氯地平(1.75×10-3、3.5×10-3、7×10-3、14×10-3、28×10-3mg/ml)作用24、36、48h,均可抑制细胞增殖,作用48h的半数抑制浓度(IC50)为13.4μmol/L;氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞细胞周期G2期具有阻滞作用且可使细胞发生凋亡;氨氯地平作用后的小鼠肝癌H22细胞周期蛋白CyclinB1的表达明显降低,p53表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氨氯地平能显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,并通过下调G2期周期蛋白CyclinB1水平和上调肿瘤抑制基因p53的表达而达到抗肿瘤效果。     

白藜芦醇对人腺泡横纹肌肉瘤细胞株PLA-802增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人腺泡横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)细胞株PLA-802增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养PLA-802细胞,用不同浓度的Res(25、50、100、200μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)。MTT法检测Res对PLA-802细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对PLA-802细胞周期和凋亡的影响;采用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶的活性;Western blot法检测PLA-802细胞中与凋亡密切相关的Bax、Bcl-2、Survivin和Caspase-3酶蛋白的表达水平。结果 Res可明显抑制PLA-802细胞的增殖(P0.05)及提高Caspase-3酶活性(P0.001),且呈剂量-时间依赖性;同时可明显提高处于G0/G1及G2/M期的细胞比例(P0.01),减少S期细胞比例(P0.001),促进PLA-802细胞的凋亡,且可显著增加促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平(P0.05),降低抗凋亡蛋白Bcl-2和Survivin的表达水平(P0.05)。结论 Res可通过上调Bax、Caspase-3及下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平及激活Caspase-3酶活性,诱导PLA-802细胞的凋亡并抑制其增殖,为治疗RMS提供了实验依据。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8对宫颈癌HeLa细胞的作用及其相关机制

目的通过shRNA干扰宫颈癌HeLa细胞中肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(tumor necrosis factor alpha induced protein 8,TNFAIP8,TIPE)的表达,分析TIPE对宫颈癌生存的影响。方法转染pCDH-shRNA-TIPE质粒至HeLa细胞株(TIPE干扰组),同时设未转染质粒的空白对照组及空载体转染的阴性对照组,qPCR和Western blot法检测TIPE的表达;加入能诱导细胞凋亡的抗人死亡受体5单链抗体(aDR5ScFv)后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测TIPE、激活型caspase-3、激活型caspase-8和激活型caspase-9蛋白表达。结果与空白对照组相比,TIPE干扰组细胞mRNA和蛋白表达均显著降低(P 0. 05);加入aDR5ScFv后,TIPE干扰组细胞增殖抑制率和凋亡率与空白对照组和阴性对照组相比显著升高(P 0. 05)。TIPE干扰组细胞激活型caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白的表达显著高于空白对照组和阴性对照组(P 0. 05)。结论 HeLa细胞干扰TIPE表达产生显著调节作用,TIPE的表达降低可对caspase诱导的HeLa细胞凋亡途径产生抑制,对生物治疗新药的进一步研发具有重要意义。     

乌司他丁和泰索帝对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制

目的探讨乌司他丁(Ulinastatin for injection,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231(ER-)增殖、侵袭及血管内皮生长因子-C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)、碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblastgrowth factor,bFGF)、神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)mRNA转录水平的影响。方法体外培养MDA-MB-231细胞,随机分为4组:对照组(只加RPMI1640培养液)、UTI组(终浓度800 U/ml)、TXT组(3.7μg/ml)、UTI+TXT组(800 U/ml UTI+3.7μg/ml TXT)。给药后24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖水平;24 h,采用Transwell侵袭小室法检测细胞侵袭能力,实时荧光定量PCR法检测细胞VEGF-C、bFGF、NGF基因mRNA的转录水平。结果 UTI、TXT及UTI+TXT呈时间依赖性抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P均<0.05),并显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力(P均<0.01)及VEGF-C、bFGF、NGF基因mRNA的转录水平(P均<0.05);TXT组与UTI+TXT组NGF基因mRNA转录水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);对细胞增殖、侵袭及VEGF-C、bFGF、NGF基因mRNA转录的抑制作用UTI+TXT>TXT>UTI。结论 UTI和TXT均可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭,UTI可增强TXT的抑制作用,其机制可能与下调VEGF-C、bFGF、NGF mRNA的表达有关。     

醋酸甲羟孕酮诱导结肠癌SW480细胞凋亡及其差异表达蛋白的分析

目的对醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesterone acetate,MPA)诱导结肠癌SW480细胞凋亡时的差异表达蛋白进行分析。方法以不同浓度(25、50、75μmol/L)的MPA作用SW480细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖水平。以上述浓度的MPA作用SW480细胞48h,流式细胞术分析细胞的凋亡率及细胞周期各时相比例的变化。以50μmol/L MPA作用SW480细胞48h,透射电镜观察细胞结构的变化;应用双向电泳技术分离细胞总蛋白,PDQUEST8.0软件分析凝胶图谱,选择差异表达蛋白,以Agilent1100HPLC-Chip/MS系统进行MS/MS分析,搜索UniProtKB/SWISS-PORT,Homo Sapiens(Human)数据库筛选目标蛋白质。结果透射电镜下观察经MPA作用的SW480细胞可见明显的凋亡形态学变化;不同浓度的MPA对SW480细胞均有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,且呈剂量依赖性,细胞凋亡率最高可达56.15%;细胞周期分析表明,MPA诱导结肠癌细胞凋亡的作用可能与细胞周期的阻滞相关,此阻滞作用具有剂量依赖性;共鉴定出泛素、只含LIM结构域蛋白质3、热休克蛋白10、有机阴离子转运蛋白4、泛素羧基末端水解酶2、核苷二磷酸激酶-A、层黏连蛋白受体1共7种SW480细胞凋亡相关蛋白。结论 MPA具有诱导SW480细胞凋亡的作用,SW480细胞凋亡相关蛋白可能作为MPA抗结肠癌的潜在生物标志物。     

透明质酸对人骨性关节炎软骨细胞凋亡及细胞周期的影响

目的观察透明质酸(Hyaluronic acid,HA)对人骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡及细胞周期的影响,以探讨HA保护软骨细胞的作用机制。方法分离人正常软骨细胞和OA软骨细胞,传至第2代后,分别经HA处理24 h,采用MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 HA能明显降低人OA软骨细胞的凋亡率(P<0.05),提高细胞的增殖活力、S期比例和增殖指数(P<0.05),且对正常人软骨细胞的增殖活力和凋亡无明显影响。结论 HA可促进OA软骨细胞的分裂与增殖,降低细胞凋亡率,从而对软骨细胞发挥保护作用。     

姜黄素对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

目的探讨姜黄素(Curcumin)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法将Hep-2细胞用含不同浓度姜黄素(3、6、12.5、25μmol/L)的培养基分别培养24和48h,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响;台盼蓝染色法检测其对细胞活力的影响;流式细胞术检测其对细胞周期分布及细胞凋亡的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测其对细胞DNA的影响。结果姜黄素可明显抑制Hep-2细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性;可明显降低细胞活力,且呈剂量依赖性;可使细胞阻滞在G2/M期,并诱导细胞出现典型的凋亡峰,凋亡率呈时间-剂量依赖性;能使细胞DNA形成典型的DNA-Ladder。结论姜黄素对人喉癌Hep-2细胞增殖及细胞活力具有显著的抑制作用,并能诱导Hep-2细胞发生凋亡。     

熊果酸对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白表达的影响,探讨熊果酸抑制血管生长的机制。方法体外培养HU-VECs,用不同浓度熊果酸(31.5、62.5、125、250、500μg/ml)处理不同时间(12、24、48 h),MTT法检测细胞增殖抑制率。用125μg/ml熊果酸和100μmol/L PD98059(ERK抑制剂)处理HUVECs 48 h;不同浓度熊果酸处理24 h;125μg/ml熊果酸处理不同时间,RT-PCR和Western blot分别检测HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果不同浓度的熊果酸对HUVECs的增殖均有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;经熊果酸和PD98059处理的HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,且呈剂量和时间依赖性。结论熊果酸可通过抑制ERK信号转导通路而抑制血管内皮细胞增殖。     

联氨基姜黄素对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨联氨基姜黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测联氨基姜黄素对MCF-7细胞的抗增殖效应,Hochest33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞的周期分布和凋亡情况,Western blot检测MCF-7细胞中Bcl-2、Bax、Cyclin D1和Survivin蛋白的表达变化。结果联氨基姜黄素可抑制MCF-7细胞的增殖,IC50为2.56μmol/L,而姜黄素的IC50为21.22μmol/L;联氨基姜黄素染色24 h后,MCF-7细胞出现核荧光强度增强、颗粒状荧光等凋亡特征;凋亡细胞比率明显增加,并可阻滞细胞周期于G1期,且呈一定的剂量依赖性;联氨基姜黄素可使MCF-7细胞中Bcl-2、Cyclin D1、Survivin蛋白表达水平明显降低,而Bax表达增加。结论联氨基姜黄素具有抑制MCF-7细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期于G1期的作用,其机制可能与Bcl-2、Bax、Cyclin D1、Survivin蛋白的表达改变有关。     

吴茱萸碱对人结肠癌lovo细胞生长的抑制作用

目的探讨吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)在体内外对人结肠癌lovo细胞生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测Evo对人结肠癌lovo细胞、人乳腺癌MDA-MB-231细胞以及人肺癌A549细胞生长的影响;流式细胞术分析Evo对lovo细胞细胞周期和细胞凋亡的影响;采用Evo治疗lovo细胞荷瘤裸鼠,并绘制肿瘤生长曲线;Westernblot法检测Evo对lovo细胞和肿瘤组织中Bcl-2及procaspase-3表达的影响。结果 Evo能抑制lovo细胞生长(P<0.01),促进MDA-MB-231细胞增殖(P<0.01),对A549细胞无明显作用(P>0.05);可将lovo细胞阻滞于S期(P<0.01),并呈时间依赖性诱导其凋亡(P<0.01);能抑制lovo细胞荷瘤裸鼠肿瘤生长(P<0.05);Westernblot检测结果显示,Evo在体内外均可降低lovo细胞Bcl-2及procas-pase-3的表达。结论 Evo可通过抑制Bcl-2表达,激活caspase-3,诱导凋亡,从而抑制lovo细胞的生长。