欧洲野生甘蓝的核质遗传多样性和群体遗传结构分析

为了解欧洲野生甘蓝遗传背景,以栽培甘蓝、甘蓝型油菜和白菜型油菜作对比,对引进的7个生态地理群体共80份野生甘蓝材料进行了核质遗传多样性和群体遗传结构分析。利用10对特异性SSR引物分析叶绿体基因组多样性,获得8个差异性标记,将参试94份材料划分为3类,即甘蓝（含栽培和野生甘蓝）、甘蓝型油菜和白菜型油菜;包括6种单倍型,其中野生甘蓝2个,甘蓝型油菜3个,白菜型油菜1个。利用6对SRAP引物对核基因组多样性进行分析,获得75个多态性标记;聚类及遗传结构分析表明7个野生甘蓝群体中,F、D、G三个群体聚为独立的亚类,E群体大部分单株归于G亚类。其它3个群体A、B、C则相互混杂在一起。野生甘蓝群体Nei＇s基因多样性指数（H）和Shannon’s指数（I）分别为0.301 3和0.461 1。分子方差分析（AMOVA）表明野生甘蓝以群体内变异为主,占80%;群体间变异仅占20%。结果显示引进的野生甘蓝群体核质遗传多样性丰富。     

人工栽培北虫草中虫草素的分离提取研究

以辽西地区人工栽培北虫草为原料,利用超声波辅助与酶法提取虫草素。选取提取液、温度和料液比三个因素进行单因素实验。采用L9(34)正交实验设计对虫草素提取工艺进行优化。结果表明,三个因素对虫草素提取率的影响均达极显著水平;虫草素提取最优工艺为:酶添加量1.5%,超声波功率500W,处理时间15min;50%乙醇溶液,料液比1∶15,温度70℃,恒温水浴3h,虫草素得率达到1.54%。对北虫草高产栽培技术推广及虫草资源的深加工与综合利用具有积极的意义。      

西藏野生油菜遗传多样性分析

利用10对AFLP引物及13对SSR引物,分析了43份来自西藏地区部分野生类型油菜种质的遗传多样性。10对AFLP引物共得到276条清晰的谱带,其中多态性带214条,多态性位点比率为77．5％,平均每对AFLP引物得到21．4条多态性带。13对SSR引物共扩增出57条带,其中多态性带51条,多态性位点比率为89．5％,说明西藏野生油菜遗传多样性丰富。通过对西藏野生类型油菜资源的遗传距离以及聚类分析,可将西藏野生类油菜分为两大类群,分别为白菜型和芥菜型野生油菜种质资源;两种分子标记适合揭示西藏野生油菜的遗传多样性。     

宁夏御马葡萄酒厂野生酵母菌株的分离筛选及分子鉴定

利用26S rDNA D1/D2区序列分析法,对分离自宁夏御马葡萄园的22株野生酵母菌进行了鉴定,同时构建了22株供试菌株与相关模式菌株的系统发育树,分析了供试菌株与已知酵母菌的亲缘关系及其分类地位.结果表明:供试菌株被鉴定为5属7种,分别是酿酒酵母、巴氏酵母、葡萄汁有孢汉生酵母、克鲁维毕赤酵母、美极梅奇酵母和核果梅奇酵母.     

高产虫草酸蛹虫草菌株的分离鉴定及培养条件优化

该研究以蛹虫草子实体为研究对象,采用组织分离法从中分离纯化高产虫草酸的蛹虫草菌株,通过分子生物学技术对其进行鉴定,并以虫草酸含量为响应值,利用单因素试验和响应面法对其培养条件进行优化。结果表明,分离得到一株高产虫草酸的菌株YCC-1,并被鉴定为蛹草拟青霉（Paecilomyces militaris）,菌株YCC-1产虫草酸的最佳培养条件为接种量7.8%、初始pH值6.0、培养温度25 ℃、转速140 r/min。在此最优条件下,虫草酸含量为132.65 mg/g,较优化前提高22.86%,为蛹虫草菌株液体发酵培养生产虫草酸提供试验依据。     

人工蛹虫草固体培养残基中虫草素的提取分离研究

以人工蛹虫草固体培养残基为原料,采用索氏提取后,用离子交换层析进行分离研究。索氏提取结果表明水比乙醇更优于提取虫草素;离子交换层析分离提取固体培养残基中虫草素的正交实验表明洗脱流速、料水比为主要影响因子,最优条件为:料水比1:16,离子柱pH3.5;洗脱流速为1滴/2秒。     

蛹虫草液体发酵产虫草素研究

以蛹虫草液体发酵菌丝体为原料,通过超声、微波方法提取蛹虫草中的虫草素,超声提取时间为20min;微波功率为200W,微波提取时间为110s,提取得到虫草素结晶体,含量是0.006mg/g.以虫草素为指标,通过正交试验确定蛹虫草液体发酵条件,虫草素含量最高的方案为:接种量15％,温度25℃,转数140r/min,培养时间96h.     

蛹虫草虫草多糖的分离纯化、分子构象分析及抗氧化活性研究

选用蛹虫草粗多糖进行分离纯化,借助二乙氨基乙基纤维素52(DEAE-52)柱层析得到虫草中性多糖(Cordyceps militaris polysaccharide,CMP)。采用紫外可见光谱(UV-visible)和傅里叶变换红外光谱(fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)表征CMP,同时选用气质联用技术(GC-MS)测定单糖组成,并采用多角度激光光散射凝胶渗透色谱和示差联用(gel permeation chromatographymulti-angle laser light scattering-reflective index,GPC-MALLS-RI)测定CMP重均分子质量(MW)和均方根旋转半径(Rg),同时分析CMP在溶液中的构象。此外,对粗多糖和CMP的抗氧化活性进行比较。结果表明:经DEAE-52水洗的中性多糖CMP质量分数为76. 63%,比粗多糖(44. 95%)纯度提高70. 48%;在260 nm和280 nm处均无明显紫外吸收; FT-IR说明CMP为α-构型多糖;其单糖组成为甘露糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为1∶3. 90∶1. 51; MW和Rg分别为2. 432×107g/mol,31 nm;CMP在溶液状态下为高枝化度结构。1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)和2,2'-联氨-双-(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)自由基清除实验表明,CMP具有明显的抗氧化活性,且自由基清除率高于粗多糖。     

大孔吸附树脂分离纯化蛹虫草固体培养基中虫草素工艺

比较D101、AB-8、HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-722、DM130七种大孔吸附树脂对蛹虫草固体培养基中虫草素的吸附与解吸性能,筛选出HPD-100树脂为最佳树脂,并确定HPD-100树脂吸附分离最佳工艺条件：上样液质量浓度0.6mg/mL、上样流速3BV/h、上样体积6BV;解吸剂为体积分数25%乙醇溶液、解吸流速2BV/h、解吸体积4BV。根据此工艺条件,蛹虫草固体培养基粗提物经HPD-100树脂纯化后,虫草素产品纯度可达14.1%,较粗提物产品提高了8倍多。     

Establishment and Application of PCR-SSCP Profile for Molecular Typing of Cordyceps Fungi

A method for distinguishing isolates of the fungi belonging to genus Cordyceps, used as food/medicine in Eastern Asia, was developed. A PCR-single stranded conformation polymorphism-based profile was applied and established on the ITS2 region of rDNA for molecular typing in 48 different isolates of Cordyceps species. Compared with the DNA sequencing data and secondary structure prediction of single strand DNA, the method used was sensitive and could distinguish between two closely related species in the genus Cordyceps. This method could be very useful for confirming the identity of a specific strain of Cordyceps for researchers and food companies that produce the fermented Cordyceps products as a quality control method.     

蛹虫草退化梯度的建立及退化过程中相关分子机制的变化

该研究以实验室人工栽培模拟工业生产工艺,对蛹虫草菌株ZGCM进行重复传代培养,人为建立了1至7代的菌种退化梯度株系,以探究蛹虫草退化过程中的形态变化规律及其内在分子机制的变化。实验结果表明,ZGCM菌株自第2代开始退化,至第6代基本不产生子实体。培养基残糖含量随退化梯度菌种代际数目的上升而呈下降趋势,第5代与第1代相比下降了62.40%。培养基残余蛋白质含量在第2代下降后出现回升,提示蛹虫草菌株随着传代次数的上升,吸收外界氮源的能力持续下降。以qRT-PCR法测定过往报道中发现的14个转录水平变化趋势与蛹虫草退化代际数目呈线性相关的基因,结果表明仅有CCM_04090基因的表达量呈上升趋势,第5代与第1代相比提高了39.60%,与过往报道一致。其他基因均无显著变化。以HPLC法测定静置液体发酵液中的虫草素含量,发现其随着传代次数的上升而下降。静置发酵30 d时,第5代与第1代相比虫草素产量下降了74.56%。结果表明蛹虫草菌株退化会对子实体产量和虫草素含量等两大产品品质核心因素造成负面影响。     

HPLC-DAD测定人工北冬虫夏草中虫草素含量

建立了测定北冬虫夏草子实体中虫草素的高效液相色谱法.使用Eclipse XDB C18(4.6mm X 150mm,5μm)色谱柱,以水:甲醇:甲酸(95:4:1)为流动相,流速为0.8ml/min,25℃下检测.检测波长为260nm.结果表明:虫草素的平均回收率为100.8%,RSD值1.88%.此方法简单、可靠.     

不同来源北冬虫夏草活性成分差异及其对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨不同来源北冬虫夏草主要活性成分的差异,并评价其调节小鼠免疫功能的能力。方法：使用高效液相色谱法测定不同来源北冬虫夏草虫草素和腺苷的含量;通过测定小鼠免疫器官指数以及碳廓清实验和脾淋巴细胞增殖实验研究其对小鼠免疫功能的影响。结果：虫草素含量由高到低依次为蚕蛹虫草3.68 mg/g、小麦虫草2.86 mg/g、大米虫草2.63 mg/g、头状虫草0.95 mg/g;腺苷含量由高到低依次为蚕蛹虫草1.11 mg/g、小麦虫草0.79 mg/g 、头状虫草0.64 mg/g、大米虫草0.094 mg/g。碳廓清指数和脾淋巴细胞增殖能力研究结果表明4 种虫草均有提高小鼠免疫活性的功效,与空白组相比差异极显著,蚕蛹虫草和小麦虫草功效最佳;饲喂4 种虫草的小鼠免疫器官指数与空白组相比差异显著。结论：不同来源北冬虫夏草的虫草素和腺苷含量有所差异,蚕蛹虫草和小麦虫含量最高,其提高小鼠免疫功能的能力也最强。     

蛹虫草的分子生物学研究进展

蛹虫草是虫草属的模式种,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、提高免疫力等作用,可以实现大规模人工培养,经济和药用价值很高,现已成为食药用菌的研究热点。本文对蛹虫草遗传多样性、分子遗传学和基因组学、转录组学、蛋白质组学方面的研究现状进行了总结,并对蛹虫草的研究前景进行展望。     

冬虫夏草与蛹虫草原生质体融合初探

采用正交设计和双灭活标记方法对冬虫夏草与蛹虫草进行原生质体融合研究,获得融合子。结果表明：最适融合条件为：40% PEG 与0.08mol/L Ca2+ 的混合溶液(pH7.0)助融,35℃融合20min,融合率为2.74 × 10-5;并用形态学、颉颃实验及分子生物学方法初步探讨了双亲和融合子三者之间的亲缘关系。     

蝉花虫草中核苷类成分的分离纯化和鉴定

对蝉花虫草子实体中的核苷类成分进行分离纯化,并对获得的组分进行鉴定。结果显示:采用65%乙醇超声波法提取的蝉花虫草子实体提取物于10000r/min离心5min后,经反相HPLC制备液相制备(色谱条件为:流动相为0～100%甲醇,梯度洗脱,洗脱速率为15mL/min,进样量1mL,检测波长260nm),分离得到6种主要化合物,经鉴定,6种化合物均为核苷类产品,分别为胞嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和虫草素。对6种化合物进行纯度验证,结果表明,6种化合物的纯度均在95%以上,说明采用反相HPLC分离制备蝉花虫草中的核苷类成分方法是可行的,并且该方法简便、准确。     

冬虫夏草与蛹虫草融合株的原生质体诱变育种

以冬虫夏草与蛹虫草融合株为研究材料,对其原生质体进行紫外诱变,筛选优质高产的新型菌株。得到了高产菌株Y-90,虫草酸产量是出发菌株的1.80 倍,高产菌株YP-42,虫草素产量是出发菌株的1.33 倍。采用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）分子标记技术和核糖体rDNA内部转录间隔区（internaltranscribed spacer,ITS）序列分析技术对突变株的遗传变异情况进行分析。结果表明突变株的ITS序列并没有发生变化。RAPD结果显示突变株的扩增片段与亲本菌株不同,说明发生了基因突变,其高产性状是可遗传的性状,可以将其用于进一步的育种研究。