过氧乙酸协同次氯酸钠对植物乳杆菌噬菌体的复合灭活效果

在食品工业中,乳制品发酵失败的原因通常是由于噬菌体的侵染。在确保有效杀菌消毒的前提下,将不同化学消毒剂进行复配,使各杀菌剂性能达到互补,从而起到更好的增效作用,可有效避免噬菌体对发酵过程的侵染。本实验以植物乳杆菌IMAU10120及噬菌体P1、P2为研究对象,评价质量分数为0.3%过氧乙酸溶液与不同浓度次氯酸钠复合处理对其的灭活效果。实验结果表明：依次使用800 mg/kg次氯酸钠和0.3%过氧乙酸处理植物乳杆菌5 min后,植物乳杆菌的存活率为0.38%;0.3%过氧乙酸与800 mg/kg次氯酸钠直接混合可使噬菌体P1在10 min内完全失活;依次使用800 mg/kg次氯酸钠和过氧乙酸处理5 min后,可噬菌体P2下降5.05个对数级。本研究可为准确评价常用化学消毒剂对噬菌体的灭活效果提供一定的数据支持。     

不同化学杀菌剂对乳杆菌噬菌体P2的灭活效果

噬菌体污染是乳品工业生产中导致发酵失败的最主要因素。实验使用不同浓度的化学杀菌剂(乙醇、异丙醇、次氯酸钠、过氧乙酸)灭活噬菌体P2并在3 min内完成对其灭活效果的评估。结果显示,随化学杀菌剂浓度的增加,其对噬菌体P2的灭活效果也呈现增加趋势。其中,100%异丙醇可使P2的存活率瞬间下降2.17个对数级;100%乙醇溶液可使其降低1.94个对数级;800 mg/kg次氯酸钠可使噬菌体P2下降3.16个对数级。过氧乙酸对噬菌体P2的灭活效果不明显,0.9%的过氧乙酸仅使13%的噬菌体失活。     

化学杀菌剂对乳杆菌烈性噬菌体P1的灭活效果

使用不同浓度的化学杀菌剂(乙醇、异丙醇、次氯酸钠、过氧乙酸)对噬菌体P1进行灭活并在3 min内完成其灭活效果的评估。结果显示,除过氧乙酸外,其他3种化学杀菌剂对P1的灭活效果均随着浓度的上升而逐渐加强。100%的异丙醇可使P1存活率瞬间下降到0.3%(减少3.79个对数级)。当次氯酸钠含量达到8×10-4时,P1可完全失活。     

溶源性发酵乳杆菌噬菌体的诱导及灭活方法

乳杆菌溶源性噬菌体在乳品发酵工业中分布广泛,其侵染特性特殊,具有一定的隐蔽性,但在一定条件下,可能被诱导转变为烈性噬菌体,使发酵剂菌株裂解,导致发酵失败。因此,溶源性噬菌体已成为发酵生产过程中的主要安全隐患之一。该研究以发酵乳杆菌为研究对象,利用不同诱导方式对其诱导,并评价热处理及不同化学杀菌剂对诱导出噬菌体的灭活效果。结果显示,发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)IMAU32579经1.9μg/mL的丝裂霉素C诱导后,成功获得噬菌体,将其命名为LFP-VB1。形态学分析显示,该噬菌体属于长尾噬菌体科。该噬菌体对热敏感,63℃处理4 min即完全失活。化学杀菌剂对其灭活效果有限,800 mg/L NaClO溶液处理60 min仅使其下降6.29个对数级。     

保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合

为获得具有抗噬菌体功能且发酵性能优良的乳酸菌融合子,采用单亲灭活及正交分析方法,研究了保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合条件。结果表明：保加利亚乳杆菌原生质体制备的最适条件是以磷酸盐缓冲液和甘露醇制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,1.0 mg/mL的溶菌酶36 ℃处理30 min,原生质体的形成率为（89.02±2.31）%,再生率为（4.62±0.22）%。嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体制备的最适条件是以Tris-HCl和蔗糖制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,0.1 mg/mL的溶菌酶42 ℃处理30 min,原生质体的形成率为（99.15±0.23）%,再生率为（5.79±0.17）%。单亲灭活保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体融合的最适条件为聚乙二醇6000（质量浓度为400 g/L,添加0.01 mol/L CaCl2、0.02 mol/L MgCl2）40 ℃促融2 min,融合率可达（1.85±0.12）×10－6。所得融合子各项性能优良,适合于酸奶生产。     

二氧化氯杀灭蔗汁中微生物的试验

用二氧化氯对甘蔗糖汁进行杀菌试验，经对数稀释倾注法测定杀菌率。发现对糖汁使用99．4mg/L的二氧化氯经10min处理可以达到99．96％的杀菌率。该浓度的二氧化氯基本没有腐蚀性。结果说明，二氧化氯能有效杀灭甘蔗糖汁中的微生物。可以作为甘蔗制糖杀菌剂展开进一步研究。     

产胸苷磷酸化酶短乳杆菌融合菌株的构建及其特性

利用紫外加热灭活双亲原生质体技术对短乳杆菌原生质体进行融合,考察短乳杆菌原生质体制备、再生及融合的影响因素,并对短乳杆菌融合子产酶能力和遗传稳定性进行了研究。结果表明:短乳杆菌在含0.6%甘氨酸发酵培养液培养至对数生长期,2 mg/mL溶菌酶于37℃恒温水浴酶解脱壁2 h,原生质体制备率和再生率可达95%和48%;20 W紫外灯距离20 cm照射50 min,60℃处理短乳杆菌原生质体60 min,原生质体的灭活率几乎为100%;将双亲灭活的原生质体用40%PEG6000,30℃恒温融合10 min,筛选融合子F15并进行5次传代测试其胸苷磷酸化酶活均在1.500 U/mg湿菌体,较亲本酶活提高了50%。     

气体二氧化氯对苦荞麦表面枯草芽孢杆菌杀菌效果研究

采用气体二氧化氯为杀菌剂,以杀菌率为指标,对苦荞麦介质表面枯草芽孢杆菌进行灭菌试验。以二氧化氯浓度、杀菌时间、二者交互作用作为杀菌率影响因素设计正交试验,结果表明:各因素影响顺序为二氧化氯浓度、杀菌时间、二者交互作用;以二氧化氯浓度100 mg/L、杀菌时间40 min,作为气体二氧化氯对接种到苦荞麦介质表面枯草芽孢杆菌最优杀灭条件;其杀菌率可达99.94%。     

植物乳杆菌 163 抑菌物质在草鱼鱼片保鲜中的应用

目的研究植物乳杆菌163发酵上清喷雾干燥产品对草鱼鱼肉的保鲜效果。方法以菌落总数、pH值、挥发性盐基氮、感官评价为鲜度指标,鱼片经不同浓度植物乳杆菌163产品溶液浸泡30 min后,于4℃条件下贮藏,测定不同时间其鲜度的变化。结果经4%植物乳杆菌163产品溶液处理的鱼肉保鲜效果最佳,在4℃条件下贮藏9 d可以将菌落总数控制在对照组的1/10左右,挥发性盐基氮含量比对照组延迟2 d到达国标最高检出限,pH值的变化转折点比对照组延迟2 d出现,气味评价得分从3 d开始显著高于对照组(P0.05)。此外,经该处理的鱼片的鲜度指标在贮藏过程中基本优于nisin处理组。结论 4%植物乳杆菌163产品处理对草鱼鱼片有良好的保鲜效果,鱼片变质较对照组可延缓约2 d。     

植物乳酸菌发酵馒头工艺及性质研究

选用小麦面粉作为主要材料,研究了植物乳杆菌发酵馒头的制备工艺及性质。确定了发酵剂最佳配比为:0.7%的高活性干酵母加0.3%的植物乳杆菌,最佳发酵时间为25 min。将该工艺制备出的馒头,和普通酵母发酵馒头以及使用酵子、酵母复合发酵的馒头性质进行研究,发现添加植物乳杆菌的馒头在比容、感官评价上优于普通馒头及酵子馒头。馒头白度高于酵母发酵馒头但低于酵子发酵馒头。植物乳酸菌发酵馒头的硬度、黏聚性、咀嚼性、回复性小;弹性较大。     

抗噬菌体P2的植物乳杆菌突变菌株的筛选及其吸附特性研究

以分离自植物乳杆菌异常发酵液的烈性噬菌体P2及其宿主Lactobacillus plantarum IMAU10120为研究对象,采用次级感染法筛选自发突变抗噬菌体菌株。对比突变株与野生株吸附特性,判断细胞生理状态对噬菌体吸附能力的影响。采用十二烷基硫酸钠、溶菌酶、蛋白酶K和三氯乙酸分别处理细胞壁,确定噬菌体P2的吸附位点。结果表明:成功筛选出1株抗噬菌体P2的植物乳杆菌突变株,且具有稳定的遗传耐受力。突变株与敏感株的吸附率均在97%以上,表明噬菌体吸附受体未发生改变。细胞生理状态对噬菌体吸附能力无显著差异。推断噬菌体P2的吸附受体可能与多糖-肽聚糖聚合物有关。     

植物乳杆菌噬菌体Lpla的分离鉴定及抗噬菌体菌株的筛选

从泡菜中分离得到1 株以植物乳杆菌WCFS1为宿主菌的烈性噬菌体,命名为Lpla。一步生长曲线结果表明Lpla的潜伏期为15 min,裂解期为180 min,裂解量为43 PFU/cell。根据透射电镜观察的形态将其归为长尾病毒科,B1类。噬菌体的理化性质结果表明,Lpla对酸、碱的耐受性较强,对乙醇、温度和紫外射线的耐受性较低。吸附实验结果显示,Lpla在4 ℃时吸附率最大。Ca2＋、Mg2＋均可促进Lpla对宿主菌的吸附,热灭活宿主菌可使Lpla的吸附率下降20%。本研究筛选出6 株对噬菌体Lpla具有稳定抗性的植物乳杆菌,为制定出有效的噬菌体防治策略提供理论依据,并为进一步将抗性菌株应用于生产实践奠定基础。     

一株短乳杆菌烈性噬菌体的分离鉴定与生化特性研究

短乳杆菌是应用于食品发酵中的重要菌株，噬菌体污染是导致发酵失败的主要因素之一，对食品发酵生产有着巨大的危害。从发酵泡菜水中分离纯化短乳杆菌烈性噬菌体，研究其生物学性质。利用双层平板法分离和纯化噬菌体，通过负染色电镜形态和核酸类型鉴定。采用核酸内切酶处理后电泳鉴定核酸类型、基因组大小和包装机制。通过双层平板法测定噬菌体效价，实验测定最佳感染复数、一步生长曲线、温度和pH等物理化学因素及常见消毒剂对其存活的影响。分离纯化到1株烈性噬菌体，命名为φB23。其由多面体结构的头部和弯曲的长尾构成，φB23基因组为双链DNA,大小约为52.4 kb,包装机制为黏末端连接。最佳感染复数为0.001,潜伏期为30 min,裂解期为90 min,裂解量为(103.2±9.0) pfu/cell。常用的巴氏灭菌温度为63℃和72℃,分别处理10 min和5 min能较好地灭活；在pH 3.0～8.0保持稳定，75%乙醇处理10 min能使其丧失活性，500 mg/L次氯酸钠处理5 min能完全灭活。φB23鉴定为尾噬菌体目(Caudovirales)长尾噬菌体科(Siphoviridae)的噬菌体，表征并...     

清除蜡样芽孢杆菌生物被膜的CIP程序优化

以生物被膜形成能力最强、酸碱耐受性高的菌株A1为对象,首先通过正交试验优化就地清洗程序条件为17.5 g/L氢氧化钠溶液85℃冲洗20 min,然后用纯水冲洗,接着用15 g/L硝酸溶液85℃冲洗20 min,最后用纯水冲洗。经过此清洗程序后,可以彻底清除不锈钢片上的蜡样芽孢杆菌。为了降低酸碱清洗剂的用量,将酸碱清洗剂与杀菌剂过氧乙酸进行联合使用,优化最佳清洗程序为15.0 g/L氢氧化钠溶液85℃冲洗10 min,然后用纯水冲洗,接着用10.0 g/L硝酸溶液85℃冲洗10 min,然后使用3 g/L过氧乙酸溶液25℃冲洗10 min,最后使用中和剂冲洗。该清洗程序在达到彻底清除蜡样芽孢杆菌的同时,能够降低酸碱清洗剂的浓度,缩短整个清洗程序的时间,为食品加工设备的清洗提供一种更高效、更环保的方法。     

植物乳杆菌的生理特性及体外益生效果研究

为了评价分离获得的植物乳杆菌作为益生菌和发酵饲料菌种的潜力,采用单因素试验设计,以培养液OD值、活菌数和抑菌圈直径大小作为评价指标,对植物乳杆菌进行最适接种量、生长期、最适温度、最适pH值等培养条件的优化;对菌株的耐热性、耐酸性、耐胆盐和抑菌能力等体外益生效果进行了评价。结果表明,菌株的最适接种量为2%;菌株在培养4h后进入对数生长期,培养至20h时菌液浓度达到最高值,培养液的pH值也降至最低4.74;菌株最适培养温度为30℃,最适生长pH值为5。菌株在温度70℃条件下处理2min,存活率可以达到88.9%,但当温度升高到80℃时处理2 min,存活率则下降至34.95%;菌株可以耐受pH值为4的酸性环境和0.3%的胆盐浓度;植物乳杆菌对有害菌的抑菌直径平均在12mm以上,表明该菌株对猪源性大肠杆菌和沙门氏菌有较好的抑制作用。体外益生效果表明,该菌株具有益生菌的基本特点,可以用于益生菌制剂研发或作为发酵饲料菌种的选择。     

单亲灭活德氏乳杆菌和乳酸乳球菌原生质体融合条件优化

利用单亲灭活原生质体技术对德氏乳杆菌FQ菌株和乳酸乳球菌FL菌株的原生质体进行融合,考察原生质体制备、再生和融合条件的影响因素。结果表明:制备德氏乳杆菌FQ菌株原生质体最适条件为温度37℃,在含有10μg/mL变溶菌素和1mg/mL溶菌酶溶液中超声处理90min。在此条件下,原生质体再生率可达6.36%。乳酸乳球菌FL菌株添加1mg/mL甘氨酸处理后,用10mg/mL溶菌酶37℃恒温酶解90min,原生质体形成率可达99.97%。65℃处理乳酸乳球菌FL菌株原生质体120min,原生质体灭活率可达96.89%。融合实验结果表明,在PEG6000 400g/L(含0.02mol/L MgCl2和0.01mol/L CaCl2)、融合时间5min、融合温度20℃、pH6.5的条件下促融,德氏乳杆菌FQ菌株和乳酸乳球菌FL菌株原生质体的融合率可达2.72×10-6。     

抗噬菌体保加利亚乳杆菌突变菌株L.actobacillus burglarious-23UN的选育

在酸奶发酵生产过程中,易遭受噬菌体的感染,使生产不能进行.以高密度噬菌体培养处理保加利亚乳杆菌菌株,筛选出1株噬菌体抗性菌株L-13,但其产酸、产黏、产香能力不如原菌株.通过照射距离20 cm照射时间60 s的紫外线诱变和NTG振荡70min的复合诱变,得到LUN-23菌株,其产酸力较敏感菌株提高了2.6%,产粘性提高了2.2%,产乙醛能力提高了1.1%,产丁二酮能力提高了3.8%,且具有遗传稳定性和抗109pfu/mL噬菌体浓度的能力.     

4种常用蔬菜清洗剂对韭黄清洗后常温货架品质的影响

目的研究4种不同蔬菜清洗剂(过氧化氢、过氧乙酸、次氯酸钠和二氧化氯)对清洗后韭黄货架期品质的影响。方法通过比较4种清洗剂清洗后对韭黄货架过程中失重率、相对电导率、菌落总数和霉菌酵母数量、腐烂指数、总体感官值的变化情况,探讨不同清洗剂对韭黄货架品质的影响。结果 4种清洗剂对韭黄清洗后常温货架过程中各项测试指标影响差异显著(P0.05),其中100mg/L的过氧乙酸溶液和有效氯为100 mg/L的次氯酸钠溶液均能显著降低货架期韭黄失重率、组织电导率、菌落总数、霉菌和酵母数量、腐烂指数的升高,延缓韭黄总体感官质量的劣变,延长清洗后韭黄常温货架期至5 d左右。结论供试4种清洗剂均能不同程度的影响清洗后韭黄货架期品质变化,其中100mg/L的过氧乙酸溶液和有效氯为100mg/L的次氯酸钠溶液使用效果最优。     

植物乳杆菌JCM1149的抑霉活性及其在酱菜保藏中的应用

采用牛津杯法测定不同培养条件下植物乳杆菌JCM1149浓缩发酵上清液的抑霉活性,并分析植物乳杆菌JCM1149对酱菜保藏品质的影响。响应面试验结果表明,初始培养基pH 6.4,培养温度33.6℃,培养时间24.7 h,获得的浓缩发酵上清液具有最高的抑霉活性;植物乳杆菌JCM1149在最适培养条件下可耐受质量分数为10%NaCl和0.05%苯甲酸钠;将2.5 mL培养至对数中后期的植物乳杆菌JCM1149菌悬液和2.5 mL质量浓度为0.02 g/mL的苯甲酸钠溶液添加到100 g酱菜样品中,可最大程度抑制腐败微生物的生长,保证酱菜样品的感官品质。     

巴氏消毒奶生产设备消毒剂选择及应用研究

研究了4种常见消毒剂对巴氏消毒奶中腐败微生物的杀菌效果,并在实际生产中应用。结果表明:二氧化氯、84消毒液、过氧乙酸和酒精对腐败样品中的微生物均具有杀菌效果,在4种杀菌剂推荐的使用范围中,过氧乙酸杀菌效果最优。选取浓度为1∶400的过氧乙酸应用于管路清洗消毒,结果显示采用过氧乙酸消毒的管道杀菌消毒效果与传统的热碱洗、热酸洗及热水洗等同。