固定化小麦酯酶生物传感器的制备及应用

将固定化酶膜与精密酸度计的玻璃电极连接制备出了生物传感电极探头,并对两种常见的有机磷农药乐果和敌百虫进行测试,结果:乐果浓度在1×10-8～1×10-3mol/L内与小麦酯酶的抑制率呈线性关系,回归方程为y=13.02x+118.7,相关系数为0.995,最低检出限(LDC)为1.7×10-9mol/L;敌百虫浓度在1×10-8～1×10-3mol/L内与小麦酯酶的抑制率呈线性关系,回归方程为y=13.08x+112.7,相关系数为0.997,LDC为1.1×10-8mol/L。以国家标准方法测得结果为对照,进行实际样品检测,检测方程得出的结果回收率为真实值的87.9%～92.3%,而生物敏感膜重复使用20次以内其酶活保存率为初始酶活的90%左右。因此,此传感器可以应用于现场有机磷农药的实验检测等。     

固定化小麦酯酶生物传感器的制备及应用

将固定化酶膜与精密酸度计的玻璃电极连接制备出了生物传感电极探头,并对两种常见的有机磷农药乐果和敌百虫进行测试,结果:乐果浓度在1×10-8～1×10-3mol/L内与小麦酯酶的抑制率呈线性关系,回归方程为y=13.02x+118.7,相关系数为0.995,最低检出限（LDC）为1.7×10-9mol/L;敌百虫浓度在1×10-8～1×10-3mol/L内与小麦酯酶的抑制率呈线性关系,回归方程为y=13.08x+112.7,相关系数为0.997,LDC为1.1×10-8mol/L。以国家标准方法测得结果为对照,进行实际样品检测,检测方程得出的结果回收率为真实值的87.9%～92.3%,而生物敏感膜重复使用20次以内其酶活保存率为初始酶活的90%左右。因此,此传感器可以应用于现场有机磷农药的实验检测等。      

黑豆酯酶固定化条件的优化研究

采用717强碱性阴离子交换树脂,在对其进行酸碱处理后,利用得到的Cl-型交换树脂来固定黑豆酯酶。通过设计单因素和正交优化试验,得到黑豆酯酶的较佳固定化条件。结果表明较佳的固定化条件为:粗酶液稀释50倍,固定化温度为25℃,固定化时间为9 h。此条件下固定化酶回收率为55.87%。对氧乐果的抑制率试验表明:此固定化黑豆酯酶对氧乐果的抑制程度与氧乐果的浓度变化有良好的线性关系,对应的回归方程为y=17.605x+57.437。     

用于有机磷农药残留快速检测的固定化小麦酯酶研究

以大孔径强碱性阴离子交换树脂作为固定化载体，采用离子结合法，对植物粗酶液进行固定化。在室温及酶液对载体比例为4(ml)：1(g)的条件下，对酶固定化的环境pH值、缓冲液浓度及固定化特性进行了研究。得到的固定化酶对l0^-7mol/L水平下敌敌畏的抑制仍有明显的响应，这一效果明显优于游离酶的抑制响应。     

固定化对动植物酯酶性质的影响

比较了离子交换法得到的固定化小麦酯酶和固定化鸡肝酯酶的主要性质与相应的游离酶的性质。结果表明 ,固定化小麦酯酶的最适pH在 5 5附近 ,比游离小麦酶的最适 pH增加了0 8个 pH单位 ;固定化鸡肝酯酶的最适pH在 8 0附近 ,比游离鸡肝酯酶的最适 pH增加了 0 5个pH单位 ;固定化小麦酯酶的最适温度与游离酶的相当 ,但酶活力 温度曲线的峰形变小 ;固定化鸡肝酯酶的最适温度比游离鸡肝酯酶的下降了 5℃ ,酶活力 温度曲线的峰形也略变陡峭。这 2种固定化酯酶对有机磷类农药 (敌敌畏 )抑制的响应明显高于游离酶对农药抑制的响应     

固定化果胶酯酶的研究

采用明胶作载体和戊二醛作交联剂制备固定化果胶酯酶,并对其固定化条件、酶学性质和应用进行了研究。结果发现,明胶浓度为15%、戊二醛为5%、固定化酶量0.15mL(稀释6.7倍),缓冲液pH4.0时制备的固定化酶的酶活和回收率较高,分别是48.725U和68.81%;固定化酶的最适温度45℃,最适pH4.0,Km值0.017%,pH2.8～6.0稳定;果胶酯酶固定化后温度稳定性、贮存稳定性和操作稳定性都明显增强,50℃下保温3h,酶活保留86%;4℃贮存16d,酶活保留90.15%。反复利用6次,酶活仍保存80.99%,半衰期为11.7d。固定化酶作用于高酯果胶不同时间后得到甲氧基含量呈下降趋势的低酯果胶。     

乙酰胆碱酯酶固定化技术研究进展

加强有机磷农药残留监测/检测技术,对保护生态环境、保证食品安全、保障人类健康有着重要而深远的意义。基于电化学方法的乙酰胆碱酯酶(AChE)生物传感器,仪器易于微型化、智能化,为实现现场检测分析提供了可能。生物传感器中酶的固定化技术是研究的核心。本文在总结前人工作的基础上对AChE固定化技术做一综述,并展望了未来该领域研究的发展趋势。     

纤维素膜固定化麦麸酯酶的工艺研究

以麦麸中的植物酯酶为酶源,通过交联、吸附方法比较,选择物理吸附法将其固定于玻璃纤维素膜上,以酶活回收率为指标,探索其固定化的最佳条件。在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken试验,进一步研究了缓冲液pH值、固定化时间、固定化温度3个因素及交互作用对麦麸酯酶固定化效果的影响,确定最佳固定化条件为:磷酸盐缓冲液pH值7.0,固定化时间4h,固定化温度29℃,该条件下酶活回收率的预测值为28.21%,验证值为27.51%。该研究为利用固定化麦麸酯酶快速检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留提供了技术参考。     

壳聚糖/聚乙烯醇微球固定化酯酶的研究

利用吸附、交联的原理,以壳聚糖、聚乙烯醇(PVA)、戊二醛等为材料,通过冻干技术制备了冻干-PVA-壳聚糖固定化酯酶.并通过单因素优化实验,确定了固定化酶生产的适宜条件:壳聚糖浓度3％、PVA浓度3g/L、酶液固定化载体体积质量比5∶2(mL∶g),戊二醛浓度0.4％,交联时间30min,此时固定化酶活力回收率为73.8％.固定化酶在60℃,pH值为7.0的反应体系中活性最大,使用5次后,固定化酶载体形状基本没变化,活性保留了71％,表明冻干-PVA-壳聚糖固定化酶具有良好的操作稳定性.     

海藻酸钠卡拉胶固定化乳糖酶的条件优化

探讨了乳糖酶在海藻酸钠和卡拉胶中的固定化技术,并对影响固定化酶的酶活回收率和固定化酶胶粒机械强度的因素进行了研究。结果表明,固定化酶的质量受海藻酸钠浓度、卡拉胶浓度、固定化酶量的影响,通过采用三因素二次回归旋转设计得到优化条件为:海藻酸钠浓度2.0%,卡拉胶浓度0.81%,乳糖酶的浓度0.23%,由此得到的固定化酶的酶活回收率可达89.19%,固定化酶胶粒的机械强度为74.74%。     

海藻酸钠包埋法固定硝基还原假单胞菌的研究

目的优化海藻酸钠和CaCl_2对硝基还原假单胞菌SP.001细胞的固定化条件。方法以海藻酸钠为载体,通过包埋法固定化谷氨酰胺酶,通过单因素实验和正交实验对固定化细胞制备条件进行优化。结果单因素实验中,当海藻酸钠和CaCl_2的浓度分别为4%和3%、酶液量与海藻酸钠的体积比为1:2、固定化时间为3 h时,包埋效果最好,测得固定化细胞回收率较高,可达80.5%。通过正交实验得出最佳组合为:酶液量与海藻酸钠体积比1:3,固定化时间3 h,海藻酸钠浓度4%,CaCl_2浓度3%,固定化细胞回收率达到85.78%。结论本研究优化了海藻酸钠包埋法固定硝基还原假单胞菌的条件,并对固定化细胞的性质进行探讨,为硝基还原假单胞菌所产的谷氨酰胺酶的固定化和应用提供参考。     

海藻酸钠-壳聚糖共固定化菠萝茎蛋白酶的研究

以海藻酸钠、壳聚糖为材料共固定化菠萝茎蛋白酶,并对固定化条件以及固定化酶的酶学特性进行了研究。通过单因素及正交实验确定固定化酶的最佳条件为:酶用量0.4mg/g、海藻酸钠浓度3.0%、壳聚糖浓度1.0%、CaCl2浓度5.5%、固化时间90min。固定化后的酶重复使用4次后,相对酶活力仍保留80%以上,固化效果较好。同时,固定化酶最适反应温度和热稳定性提高,反应pH向碱性偏移,酶学特性得到了改善。     

小麦酯酶提取及其对有机磷农药检测初探

研究从小麦面粉提取小麦酯酶提取条件及其粗酶液对4种有机磷农药最低检测限和灵敏度。运用单因素实验和正交实验对小麦酯酶提取条件进行优化,确定适宜提取条件,提取液为0.15 mol/L NaCl溶液、料液比1∶4、40℃振荡提取60 min,提取粗酶液酶活为1.675 U/mL;并确定粗酶液对敌敌畏、敌百虫、乐果和毒死蜱等4种有机磷农药最低检测限分别为0.05 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg和0.07 mg/kg,均低于国家规定农药最大残留量,且粗酶液对敌敌畏灵敏度最佳。     

交联海藻酸钠-明胶固定化L-阿拉伯糖异构酶的研究

以海藻酸钠和明胶为载体,对L-阿拉伯糖异构酶进行固定化。为增强固定化酶的稳定性,又用戊二醛对其进一步交联。研究了海藻酸钠及明胶浓度、CaCl2浓度、硬化时间以及戊二醛浓度等因素对固定化效果的影响,并对固定化酶的酶学性质进行了研究。结果表明最佳固定化条件为：海藻酸钠浓度2.0%、明胶浓度2.0%、硬化时间6h、CaCl2浓度4.0%、戊二醛浓度0.02%,该条件下所得酶活回收率最高为82%,且具有较好的操作稳定性,重复操作7次后酶活损失不到50%。与游离酶相比,固定化酶的最适反应pH及反应温度没有变化,但pH稳定性和耐热性都有所提高。     

海藻酸钠固定细胞产D-阿洛酮糖的研究

D-阿洛酮糖3-差向异构酶（DPEase）是一种能催化D-果糖转化为D-阿洛酮糖的异构酶。本实验采用海藻酸钠作为载体,包埋重组大肠杆菌催化D-果糖生成D-阿洛酮糖。以固定化细胞的酶活活力回收率为指标,优化出最佳固定化条件为:海藻酸钠浓度3%,细胞包埋量60g/L,Ca Cl2浓度2%,固定化时间4h,0.01%浓度戊二醛溶液中交联4h。该条件下所得固定化细胞的酶活回收率高达76%,且具有较好的操作稳定性,重复操作8次后酶活回收率仍然保持61%。固定化后DPE细胞的最适酶反应温度提高了5℃、最适pH与游离细胞基本一致,耐热性明显提高,p H稳定性与游离细胞一致。      

海藻酸钠包埋法固定化绿色木霉的研究

本实验以海藻酸钠包埋法固定化绿色木霉,研究了海藻酸钠固定化的最佳条件和固定化细胞理化性质。3%海藻酸钠包埋1.0×109/ml的绿色木霉的孢子溶液,用8号针头滴入3%CaCl2溶液中固化5h,缓冲液冲洗抽滤后。取10g固定化菌放入50ml/250mlpH为4.5的产酶发酵培养基的三角瓶中,在31℃、180r/min的条件下培养96h可达到最佳固定化效果,菌体经固定化后其耐高温性和耐热稳定性得到较大提高;重复使用六次后产酶率保持在80%左右。     

海藻酸钠对小麦淀粉性质及馒头品质的影响

采用快速黏度计、差示扫描量热仪、动态流变仪、粉质仪等,研究了海藻酸钠(AG)对小麦淀粉(WS)糊化性质及馒头品质的影响。结果表明,AG显著影响WS性质,明显改善馒头品质。AG增加WS糊化难度,表现为起始糊化温度、峰值糊化温度升高,降低溶解度。促进WS溶胀,表现为提高峰值黏度、膨胀力、终止糊化温度和糊化焓升高。提高淀粉糊的稳定性,表现为衰减值、回生值和老化率降低。AG提高糊化后的WS在外力作用下的稳定性,有利于WS黏弹性凝胶的形成,且形成的凝胶更趋向于固体。AG提高小麦粉的加工品质,使面团吸水率、形成时间、稳定时间增加,跌落值降低。一定质量分数的AG可增大馒头比容、高径比,AG在馒头中的建议用量为小麦粉质量的0.05%~0.15%。     

固定化木聚糖酶的比较研究

以海藻酸钠和壳聚糖两种载体对木聚糖酶进行固定化,研究游离酶和固定化酶的性质.结果表明,游离酶的Km=0.546mg/L,以海藻酸钠和壳聚糖为载体的固定化酶的Km分别为38mg/L和0.342mg/L.尽管以壳聚糖固定的酶的最适pH与游离酶相同(都为5.0),但前者的适宜pH范围明显变宽;而经海藻酸钠固定的酶,最适pH向酸性范围移动0.5个pH;两种载体固定的酶最适温度与游离酶相比,都从40℃提高到50℃.实验还表明,固定化酶提高了游离酶的贮藏稳定性.