萌发玉米中过氧化物酶的变化及其活力测定条件的研究

通过单因素实验和正交实验,利用愈创木酚比色法研究了萌发玉米中过氧化物酶的提取pH值、影响过氧化物酶活力的各种因素和过氧化物酶活力测定的最佳条件。实验结果表明,过氧化物酶的最佳提取pH值是6.7;各因素对过氧化物酶活性的影响顺序为萌发时间>温度>pH值>反应时间。萌发玉米种过氧化物酶提取的最佳条件为,温度40℃,pH5.4,萌发时间3d,反应时间5min。     

响应面法优化超高压钝化蓝莓汁中两种酶活性工艺条件

为了得到超高压钝化蓝莓汁中酶活性的最优工艺参数,选取过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)的酶残留活性为响应值,根据Central-Composite实验设计原理,建立了酶的残留活性与超高压处理压力、时间和温度之间的数学模型。并采用Design-Expert8.0.6进行响应面分析。实验结果表明:钝化过氧化物酶(POD)最佳处理条件为:处理压力500 MPa、时间5 min和温度40℃,处理后POD酶的残留活性降至49.13%;钝化多酚氧化酶(PPO)最佳处理条件为:处理压力500 MPa、时间15 min和温度10℃,处理后PPO酶的残留活性降至4.776%。此外,在实验条件为压力500 MPa、处理时间15 min及温度10℃时处理蓝莓汁,POD和PPO的综合钝化效果最佳。     

藕带过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

研究藕带中过氧化物酶(POD)的提取和纯化技术,以及温度、pH值和部分化学物质对POD酶活性的影响。结果表明:藕带中的过氧化物酶提取物经过40%饱和度的硫酸铵除杂、80%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-52纤维素柱层析(100mL,0.1 mol/L NaCl的pH 7.2的磷酸缓冲溶液洗脱)、葡聚糖凝胶G-75柱层析(pH 7.2的磷酸缓冲溶液洗脱)进行分离纯化后,经SDS—PAGE鉴定为单一带,其分子量约为42kD,纯化倍数及蛋白质产率分别为32.68倍和2.11%。藕带中POD的最适温度为40℃,最适pH值为5.0。温度高于80℃基本失活,pH值小于2.0或大于8.0也基本失活。抗坏血酸对POD有明显的抑制作用;尿素、SDS、KSCN对POD具有轻微的抑制作用;草酸在低浓度时对POD具有激活作用,高于0.01 mol/L时有明显的抑制作用。     

山药过氧化物酶的特性及抑制研究

以愈创木酚为底物,470nm处测定山药过氧化物酶(POD)的活性,研究了温度、pH、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂对其活性的影响。结果表明,山药过氧化物酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.0,Km=0.08231mol/L,Vmax=541.518U/(g·min);五种抑制剂对POD的抑制作用由强到弱依次为:VC>L-Cys>NaHSO3>柠檬酸>EDTA,两种激活剂对POD活性的激活作用由强到弱依次为:CuSO4>FeCl3。     

不同提取条件对植物组织SOD、POD和CAT酶活性的影响

研究不同提取条件对植物组织中SOD、POD和CAT酶活性的影响,利用比色法比较酶活性,研究了不同p H的提取缓冲液、提取温度、提取时间对3种植物(苹果、大蒜、番茄)中SOD、POD、CAT酶活性的影响。结果表明,SOD不适合在低p H(6.0)提取缓冲液下提取,POD不适合在p H7.0的缓冲液下提取,CAT可以用3种缓冲液(p H为6.0、7.0、8.0)中的任意一种提取。SOD、POD、CAT这3种酶的最适提取温度均为—20℃,常温下提取酶的活性最低,但—20℃与0℃下提取对酶活性的影响差别不大;提取这些酶的过程中,提取时间把握在3 min左右最佳,酶的提取效率最高。SOD、POD与CAT均可运用p H8.0的缓冲液提取,但需在冰上研磨充分提取,进而提高测定效率。     

木聚糖酶活力的二硝基水杨酸(DNS)测定法

采用DNS法研究不同稀释倍数、底物用量、pH值和反应温度对木聚糖酶活力的影响.结果表明:木聚糖酶的活力随酶稀释倍数、底物木聚糖量的提高而增加,但应控制好酶的稀释倍数和底物用量,否则会引起测定误差.酶处理反应的较佳工艺为:时间20 min,pH值6,反应温度60℃.木聚糖酶在60℃恒温稳定0-4 h,相对酶活都在85%以上,稳定性较好.其它前处理用酶制剂对木聚糖酶活力的影响不明显.不同类型的化学助剂对木聚糖酶的影响不同.     

橄榄多酚氧化酶和过氧化物酶的抑制剂筛选及其热失活动力学

本项目研究了七种抑制剂(分别为亚硫酸钠、明矾、O-异抗坏血酸、EDTA-2Na、Ca Cl2、多聚磷酸钠、柠檬酸亚锡二钠)对橄榄多酚氧化酶和过氧化物酶活力的影响,并采用两段模型分析了高温处理对橄榄果实多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)的钝化动力学。结果表明,橄榄中酚类化合物氧化分解与POD和PPO活性有关,在特定的环境条件下,O-异抗坏血酸和柠檬酸亚锡二钠抑制橄榄PPO酶和POD酶活性效果最好,譬如,其浓度为0.20 g/L时,可完全抑制橄榄PPO酶和POD酶活力;热烫时间和温度对橄榄果实PPO和POD活性影响较大,并随着热烫时间和热烫温度的增加,橄榄果实PPO和POD活性呈现先下降后处于平稳的趋势,故高温处理对橄榄PPO和POD的钝化过程符合两段模型。     

金针菇漆酶活性测定的最佳反应条件及液体培养胞外酶的研究

研究了ABTS[(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)]法测定金针菇漆酶活性的最佳反应条件,确定了显色反应的最佳条件为:适宜测定波长为410nm、体系pH4.0、反应温度40℃。对金针菇LP03液体培养过程中的胞外酶活性进行检测,研究了漆酶、纤维素酶、木聚糖酶、过氧化物酶、锰过氧化物酶和淀粉酶的变化规律。在整个培养过程中这6种酶的活性存在很大差异。     

待测酶液制备方法对饲用木聚糖酶活性测定结果的影响

探讨了浸提倍数、稀释倍数、浸提次数对饲用木聚糖酶活性测定结果的影响。研究表明：在测定条件一致的情况下，酶制剂浸提倍数、稀释倍数、浸提次数对酶活测定结果均有显著影响。浸提倍数在20-80倍时测得的酶活处于上升趋势；待测酶液稀释1000倍时，测得的酶活最高，稀释800-1000倍时酶活较稳定；从实验操作和浸提效果看，1次性浸提就可以满足测定要求。     

苜蓿酯酶的提取分离及性质测定

从苜蓿(Medicago sative)中提取植物酯酶并纯化,分别测定pH值、温度、盐的种类和浓度对酶活的影响。实验结果表明,用pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液提取的酯酶活性最高,40℃时酯酶反应活性最大。     

莎能羊乳中乳过氧化物酶特性的研究

以西农莎能羊乳为原料,对羊乳中乳过氧化物酶的最适温度、热稳定性、最适pH、pH稳定性和光稳定性进行系统的研究.结果表明,乳过氧化物酶的最适温度为45～55℃,在较低温度20～50℃热稳定性较好;乳过氧化物酶的最适pH为5.5～6.0,在pH3.0～8.0比较稳定;光对乳过氧化物酶活性的影响较大,光照处理3h后的乳过氧化物酶活性比避光处理降低了24.00%.这些研究结果将为乳过氧化物酶体系对羊奶的保鲜提供依据.     

α-转移葡萄糖苷酶的酶学性质研究

α-转移葡萄糖苷酶是生产低聚异麦芽糖的关键酶。研究表明,需将该酶稀释到一定倍数,反应一定时间,可达到产物中含有较高的低聚异麦芽糖。该酶的最适pH为5.0,最适反应温度为65℃,不同金属离子对该酶酶活的影响不同。正交实验确定该酶的最佳反应pH为4.15,温度为60℃,时间为3h。     

热处理对玉米象保护酶活性的影响

分别以43、47、51、55℃对玉米象(SitophiLus zeamais)成虫进行热处理,测定不同处理时间后其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性。在43、47℃的高温处理条件下,保护酶活性存在应激性升高的阶段,最大值分别达到13.49 U/mgSOD、0.39 U/mgPOD、4.20 mgH_2O_2/(min·mg)CAT,酶活性显著增强,随着处理时间的延长活性受到抑制。51、55℃高温处理后,CAT活性均不高于对照水平,最低值仅为对照组的70%,SOD、POD活性在55℃处理不同时间后,明显低于43、47、51℃处理后的酶活性。结果表明,玉米象成虫体内3种酶活性与高温处理温度、处理时间有一定的相关性,升高温度和延长高温处理时间能导致保护酶活性降低。     

高压二氧化碳对西瓜汁中过氧化物酶钝化动力学的研究

为了延长西瓜汁的货架期,研究高压二氧化碳处理对西瓜汁中过氧化物酶(peroxidase,POD)的钝化效果。研究以热处理为对照,比较不同高压二氧化碳处理温度和压强对其POD活性残存率的影响。采用二段式模型模拟POD的钝化效果(R2>0.975),证明西瓜汁中POD存在敏感型和稳定型两部分。通过动力学分析考察两种类型POD对温度和压强的敏感性,确认高压二氧化碳处理温度、压力、时间、pH和CO2等因素共同导致了POD活性的降低。高压二氧化碳处理比热处理可以更加有效钝化西瓜汁中POD,有助于延长西瓜汁的货架期。     

机械损伤对富士苹果抗氧化酶活性的影响

研究富士苹果遭受机械损伤后在两种贮藏温度下伤害部位超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的变化,并对抗坏血酸(AsA)、还原性谷胱甘肽(GSH)等内源抗氧化剂的含量进行分析测定。试验结果表明:与对照果实相比,受伤果实的SOD活性、APX活性在贮藏初期逐渐下降,GR活性迅速下降后又上升,CAT活性、POD活性逐渐上升;同时,作为抗氧化剂GSH含量与AsA含量与GR活性保持了相同的变化趋势;随着贮藏时间的延长,各种抗氧化酶活性和抗氧化剂含量又呈现上升和下降的反复过程,而且温度越低,各种生理指标变化越缓慢,且显示较高的酶活性和较高的抗氧化剂含量。表明机械损伤显著地诱导了抗氧化酶活性和抗氧化剂含量的变化,以达到提高受伤组织自身对伤害的修复能力,而且在低温下,受伤部位具有较高的对伤胁迫的修复能力。     

茄科植物源谷胱甘肽过氧化物酶活性的研究

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是细胞内自发或酶促反应的活性调节剂,反映了机体清除氧自由基的能力,对其资源的开发和利用有重要意义。用直接测定法测定茄子、辣椒、番茄、马铃薯和枸杞等茄科植物中谷胱甘肽过氧化物酶活性,其中以马铃薯块茎、茄子果实及根的活性较高。这一结果为今后在茄科植物中该酶的进一步研究奠定了实验基础。     

腈水合酶催化反应条件的研究

以自由细胞的酶作为催化剂,研究了菌体稀释倍数、丙烯腈浓度、温度、pH值、菌悬液用量和丙烯酰胺浓度对腈水合酶活性的影响．结果表明,温度、丙烯腈浓度和丙烯酰胺浓度是影响酶活性的主要因素．反应温度在28℃时酶活性达到最大为4091U／mL茵液,丙烯腈浓度采用40g／L．当反应体系中丙烯酰胺浓度为40％时,其酶活只有丙烯酰胺浓度为5％时酶活的39．2％．对不同反应温度下酶活的研究,得出腈水合酶催化反应的活化能为40．291kJ·mol^-1．     

贮藏温度对茄子果实活性氧代谢及细胞壁降解的影响

为研究贮藏温度对茄子活性氧代谢及细胞壁降解影响,试验将"上新"茄子在2℃、12℃、20℃下贮藏12 d,每2 d测定其硬度、超氧阴离子产生速率(O_2-)、过氧化氢含量(H_2O_2)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、脂氧合酶(LOX)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性及果胶质、纤维素、木质素含量变化。结果表明,2℃时,随着贮藏时间延长,果实SOD、POD、CAT、APX、GR活性不断降低,O_2-产生速率及H_2O_2含量增加,LOX活性上升,加剧膜脂过氧化反应。同时,2℃贮藏仅6 d,果实发生木质化现象,硬度升高。贮藏期间细胞壁结构变化与细胞壁物质降解程度有关。12℃时,果实硬度下降较慢,抗氧化酶活性逐渐下降。而20℃时,果实硬度下降明显,出现腐烂变质,细胞壁降解酶活性增强,细胞壁物质发生降解。综合比较,12℃可作为茄子果实短期适宜的贮藏温度。     

硒对猕猴桃抗氧化活性的促进作用

在大田条件下,给中华猕猴桃施以浓度分别为0.15、0.3、0.5 mg/kg的Na2SeO3溶液,在盛花期后测定猕猴桃叶各项生理指标,研究硒对猕猴桃生理生化的影响。结果显示：施硒提高了猕猴桃叶总叶绿素含量,谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）以及过氧化物酶（POD）活性。然而高浓度的硒（≥0.5mg/kg）则降低了叶绿素含量,抑制了叶绿素超氧化物歧化酶（SOD）以及过氧化物酶（POD）活性。实验表明适宜浓度范围的硒可以提高猕猴桃的抗氧化能力。     

纤维素酶活测定影响因素的研究

研究和分析了3,5-二硝基水杨酸法测定羧甲基纤维素酶糖化力的实验条件,尤其是对测定波长的选择、底物和酶液加量、空白样的选择、酶液稀释倍数对酶活的影响等方面进行了创新性的探究;另外对常规性的影响因素:酶促反应时间、反应pH、底物的浓度等传统因素做了研究。实验表明:在40℃,pH4.6,底物浓度为10g/L,底物和酶液加量各2mL,酶促反应时间5min,空白样选择终止空白,测定波长480nm处测定OD值比较适宜。