细菌质粒DNA的快速提取及检测

介绍一种质粒DNA的快速提取方法，所分离出的DNA纯度较好，全部操作仅在两只Eppendorf管中进行，含质粒DNA的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。整个提取过程在较短时间内完成。该方法简便、快捷、效果好。     

一种高效安全提取质粒DNA方法的建立

在碱裂解法提取质粒DNA的基础上做了改进,将NaOH浓度从0.20mol/L降低为0.10mol/L,使得超螺旋DNA的得率进一步提高.采用silica法纯化质粒DNA,避免了使用有毒性和挥发性气味的饱和酚和氯仿,使得操作更安全简单.电泳结果表明,提取的质粒DNA质量好,得率高,并且可以直接进行下一步的酶切、连接及转化等实验.同时,该方法中使用的硅胶可以回收再生进行重复利用,节省了实验费用.     

质粒DNA经胃肠道吸收整合宿主基因组的可能性评价

给小鼠灌胃裸pcDNA3s质粒DNA，于3周后提取小鼠肺、肾、脾、肠系膜淋巴结、胸腺、生殖器官、肌肉及肝脏组织中的总DNA，琼脂糖凝胶分离游离质粒DNA与基因组DNA，以组织基因组DNA为模板，PCR法检测质粒DNA的整合率．对照模板中加入不同拷贝数的pcDNA3s质粒，确定PCR反应的敏感性．结果表明，各组织基因组DNA经PCR扩增均呈阴性，低于PCR反应的最低检出率．pcDNA3s质粒可能整合入宿主基因组的拷贝数是基因自发突变率的1／3000，尚未发现外源质粒DNA经胃肠道途径整合入宿主基因组的证据．     

质粒pcDNA3.1-IL-24的制备和纯化

探索基因治疗用质粒pcDNA3.1-IL-24的规模化制备和纯化工艺。碱性裂解提取质粒后,以异丙醇和LiCl沉淀法去除大分子RNA。然后,使用DEAE Sepharose FF离子交换层析去除染色体DNA、小分子RNA、蛋白质等杂质。经本工艺纯化的质粒pcDNA3.1-IL-24浓度为727μg/mL,纯度为1.87,蛋白质含量为0.007μg/mL质粒DNA,未检测到RNA、抗生素残留。此工艺避免使用动物源性酶类及有毒试剂,有效去除质粒DNA制备过程中产生的杂质,可实现药剂水平质粒DNA的规模制备。     

纤维堆囊菌So ce2161限制修饰系统研究

采用双向电泳技术从So ce2161中未获得内源性质粒,通过对So ce2161培养液、细胞壁及菌体内部DNA核酸酶进行提取纯化,并与外源基因孵育,发现了有较强活性的DNA核酸酶,对DH5α基因组DNA、质粒pET-32a均有降解作用。     

几种常用基因工程受体菌转化效率的比较

用Birnbom等人的方法从大肠杆菌中提取pSDM21质粒,并通过超离心进一步纯化。以已知浓度的λDNA为标准,测定pSDM21质粒的浓度为0.3μg/μl。用纯化的pSDM21质粒转化5株常用的基因工程受体菌,其转化效率为3.8×10~3——4.1×10~4。通过比较,可以看出大肠杆菌ED8654是基因工程研究中比较理想的受体菌。     

一种适用于地衣总DNA提取的改进方法

目的：针对地衣初生、次生代谢产物丰富的特点,提出了一种适于地衣总DNA的提取方法。方法：应用改良的CTAB法,对3种常见地衣进行了总DNA提取,经过琼脂糖电泳、紫外吸收分析DNA质量。结果：3个样本DNA的A260/A280值均在1.8～2.0之间,琼脂糖电泳图像清晰。结论：改良的CTAB法简便、省时、价廉,适合于地衣总DNA的提取,获得的DNA含量高,纯度好。     

奶粉基因组DNA不同提取方法的比较

为选择适合奶粉材料进行分子标记检测的DNA提取方法,以市售奶粉为材料,采用6种不同的方法提取基因组DNA,并比较这6种方法的提取效果．结果表明,除异丙醇沉淀法和十二烷基硫酸钠法(SDS法)外,其他4种方法提取的基因组DNA均适用于聚合酶链式反应(PCR)检测．同时,结合基因组DNA的纯度和质量浓度,明确奶粉基因组DNA提取方法的优劣依次为:热解法、异硫氰酸胍法、高盐低pH法和十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)．     

一种快速提取小麦DNA的方法

以优质小麦豫麦 47# 为原料 ,对小麦DNA的提取方法进行了探讨 .研究了在不用液态氮的情况下 ,防止DNA降解的关键技术 .对提取的小麦DNA进行紫外检测和琼脂糖凝胶电泳分析 ,结果表明提取的DNA相对分子质量大 ,浓度和纯度高 .该法也适合提取其它植物分子DNA .     

玉米须总DNA提取方法的建立

确定一种玉米须总DNA的提取方法.[方法]分别利用CTAB法和SDS法提取干燥和新鲜玉米须的总DNA,经过琼脂糖凝胶电泳进行定性检测,通过紫外分光光度法进行含量和纯度测定,确定适合玉米须DNA提取的方法.[结果]利用CTAB法和SDS法提取干燥玉米须的总DNA,产物呈淡黄色,经过琼脂糖凝胶电泳,几乎看不到明显的条带;利用上述两种方法提取新鲜玉米须的总DNA,电泳条带明显,CTAB法提取DNA浓度为11.5μg/m L,A_(260)/A_(280)为2.2,而SDS法提取DNA浓度为15.8μg/m L,A_(260)/A_(280)为1.9.[结论]新鲜玉米须中总DNA更容易提取;SDS法提取出的DNA浓度与纯度均优于CTAB法,更适宜用于新鲜玉米须DNA的提取.     

纤维素酶E_5基因在E.coli中的克隆与表达

将含纤维素酶 E5基因的质粒 p D5 4 1用 Nco I和 Eco R I双酶切后 ,经电泳分离获取含 E5基因的小片段 ,将该片段定向插入表达质粒 p SE4 2 0的多克隆位点上 ,进一步将重组 DNA转入大肠杆菌宿主 .采用刚果红染色法检测出选择性平板上的转化子具有羧甲基纤维素酶 (CMCase)活性 .摇瓶产酶试验进一步表明 ,基因重组后的大肠杆菌能高效表达 E5基因并将产物分泌出胞外 ,培养液中可检测到的CMCase活力达 31.6 U/ m L .该研究结果为进一步构建高效纤维素分解菌株打下了良好的基础 ,具有重要的学术意义和实际应用价值 .     

Photoinduced DNA Cleavage of Fullerols, Water-Soluble Polyhydroxylated [ C60 ] Fullerene Derivatives

The effects of polyhydroxylated [C60] fullerene derivatives fullerols on DNA was studied,using the plasmid pXJ41-neo DNA as the experimental model.The cleaved DNA products were detected by agarose gel electrophoresis.The results showed that fullerols could stimulate DNA cleavage in dose and irradiation dependent manners.0.4 mmol/L fullerols together with 1.5 h exposure to a 500 W tungsten halogen lamp at a distance of 20 cm could convert most of plasmid DNA from the intact form into the nicked and linear forms.Scavengers of various reactive oxygen species(ROS)including sodium azide,mannitol and superoxide dismutase(SOD)could inhibit the photoinduced DNA cleavage of fullerols.These data presented for the first time the photoinduced biological activities of fullerols,and implied a possible use of these fullerene derivatives as the candidates for novel photosensitizers in the biomedical therapy.     

牦牛乳中DNA提取方法的建立与优化

为加速牦牛重要基因的挖掘和功能鉴定,以牦牛乳作为试验材料,建立简便的牦牛基因组DNA提取方法.采用常规离心法,从牦牛乳中获得体细胞,进而提取基因组DNA.研究不同去除蛋白方法、不同DNA沉淀剂、不同贮藏条件对牦牛乳中DNA提取质量的影响.DNA质量通过PCR评价.结果表明:高盐法与酚/氯仿法去除蛋白效果相当.高盐法简便...     

T-DNA在丝状真菌中的插入突变及其应用前景

利用根癌农杆菌介导的转化系统已经在酵母菌和多个属种的丝状真菌成功建立起相应的T—DNA插入突变体系,使之有可能成为真菌生理学、生物化学以及发育生物学相关理论研究的潜在工具．综述了丝状真菌质粒DNA转化和T—DNA转化的差别、T—DNA插入突变的主要特点和优点、T—DNA转化丝状真菌的方法以及T—DNA已转化的丝状真菌种类,并对T—DNA插入突变在丝状真菌中的应用前景进行了分析．     

Preparation of fluorescence starch-nanoparticle and its application as plant transgenic vehicle

Starch-nanoparticles were synthesized in water-in-oil microemusion at room temperature, and the starch-nanoparticles were coated with poly-L-lysine. The surface of the starch-nanoparticles was combined with fluorescence material Ru（bpy）3^2＋-6H2O, and then the particles were characterized via transmission electron microscope. The fluorescence nanoparticles were conjugated with plasmid DNA to form complexes, and then treated with ultrasound and DNase I. pEGAD plasmid DNA-nanoparticle complexes were co-cultured with plant suspension cells ofDioscrea Zigiberensis G H Wright, and treated with ultrasound. The results show that the diameter of the fluorescence starch-nanoparticles is 50-100 nm. DNA-nanoparticle complexes can protect DNA from ultrasound damage as well as from DNase I cleavage. Mediated by ultrasound, pEGAD plasmid DNA-nanoparticle complexes can pierce into the cell wall, cell membrane and nucleus membrane of plant suspension cells. The green fluorescence protein（GFP） gene at a high frequency exceeds 5%. This nano-biomaterial can efficiently solve the problem that exterior genes cannot traverse the plant cell wall easily.     

脂肪醇聚氧乙烯醚和脂肪酸聚氧乙烯酯共混物鉴定方法初探

研究了水解-气相色谱法与裂解气相色谱法相结合鉴定脂肪醇聚氧乙烯醚和脂肪酸聚氧乙烯酯共混物的方法,用氢氧化钠水解表面活性剂混合物,利用气相色谱和裂解色谱,对水解产物进行分析,依据气相色谱数据和裂解气相色谱数据对共混物进行鉴定.该方法可用于常见脂肪醇、脂肪酸聚氧乙烯混合物的鉴定.     

绿色木霉DNA提取方法研究

利用CTAB法、简化CTAB法、氯化苄法和快速提取法等4种方法提取了绿色木霉DNA,并采用琼脂糖凝胶电泳和PCR对DNA进行了评价.凝胶电泳检测结果表明4种方法均可提取到绿色木霉DNA,但PCR检测结果表明只有CTAB法和简化CTAB法提取的DNA可用作CBHII基因的PCR模板.     

大肠杆菌DH12S菌株高效电击转化条件的探讨(英文)

探讨了电击转化法介导质粒DNA转化到大肠杆菌DH12S的最佳条件,以提高其转化效率．将pUC19质粒转化大肠杆菌DH12S菌株,观察不同的电击转化条件对转化效率的影响．结果表明,电击缓冲液的离子强度、细菌生长状态、感受态细胞保存时间及质粒DNA浓度对转化效率均有不同程度的影响;在电压2．5kV,电阻200Ω,电容25μF,脉冲时间4．3ms和低离子强度电击缓冲液的条件下能获得较高的电击转化率,证明该优化电击转化条件能提高转化效率．     

α辐射致DNA双链断裂的AFM观测

利用先进的原子力显微镜(AFM)技术及凝胶电泳技术，对5．48MeV的α粒子辐照后的水中pGEMT1质粒DNA进行分析，通过AFM观测，得到了清晰的DNA分子及α辐射致其双链断裂的直观图，并采用凝胶电泳对辐照前后DNA的损伤机理进行了研究，结果表明DNA链的断裂数目随着粒子照射剂量的增加而增加，并通过测量DNA片段所占比例关系．可获得DNA的片段分布.