桦褐孔菌多糖的分离纯化及体外抗氧化活性研究

目的 分离纯化桦褐孔菌多糖(Inonotus obliquus polysaccharide, IOP),分析其结构并对其抗氧化活性进行评价。方法 以桦褐孔菌为原材料,采用水提醇沉工艺,经大孔树脂吸附法除杂脱色得到IOP;通过DEAE-52纤维素柱对IOP进行分离纯化,得到4个多糖组分:IOP-1、IOP-2、IOP-3和IOP-4,通过Sephadex G-100凝胶柱纯化得率较高的组分IOP-1,得到均一多糖IOP-1a。对IOP-1a进行结构鉴定,并考察其体外抗氧化能力。结果 IOP-1a相对分子质量为12040Da;由7种单糖组成:葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖和岩藻糖(0.341:0.246:0.150:0.102:0.842:0.559:0.213),红外光谱显示IOP-1a含有β型糖苷键、羰基、羟基等官能团。体外抗氧化实验表明,IOP和IOP-1a均有较好的抗氧化能力。结论 从IOP中分离纯化得到的中性组分IOP-1a具有较好的抗氧化活性。     

桦褐孔菌不同多糖组分的体内、外抗氧化活性

目的:研究桦褐孔菌不同多糖组分体外和体内抗氧化活性。方法:采用不同的醇沉体积分数依次从桦褐孔菌水提物中分离出5种水溶性多糖组分(IOP40、IOP50、IOP60、IOP70和IOP80);通过DPPH自由基、羟自由基和ABTS+自由基清除试验评价体外抗氧化活性;利用自然衰老小鼠模型,测定不同处理组的小鼠肝脏中的总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)指标和血清中总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)指标,评价桦褐孔菌多糖对小鼠体内抗氧化活性的影响。结果:体外试验表明桦褐孔菌水提物和5种多糖组分在测定质量浓度范围,对·OH、DPPH·和ABTS+·的清除率随质量浓度的增加而升高,其中IOP40和IOP50的抗氧化效果更佳,IOP40对3种自由基的IC50值分别为(0.916±0.08),(0.660±0.14)mg/mL和(0.091±0.03)mg/mL,IOP50的IC50值分别为(0.837±0.07),(0.837±0.12)mg/mL和(0.108±0.05)mg/mL。体内试验显示,与IOP40和水提物相比,IOP50能显著提高老龄小鼠体内抗氧化相关的酶和代谢产物的水平。结论:从桦褐孔菌中分离出的多糖组分具有一定的抗氧化活性,特别是IOP50能显著缓解机体的氧化应激损伤,延缓机体衰老。     

桦褐孔菌多糖IOP3a乙酰化修饰及其抗氧化活性

以桦褐孔菌多糖IOP3a为原料,采用乙酸酐法制备乙酰化桦褐孔菌多糖(Ac-IOP3a),以乙酰化取代度为指标,考察乙酸酐用量、反应温度和反应时间对取代度的影响。在单因素试验的基础上,采用响应面法对IOP3a乙酰化工艺进行优化,并通过Ac-IOP3a对·OH、DPPH·和O_2~-·的清除作用探讨其抗氧化活性。结果表明,桦褐孔菌多糖IOP3a乙酰化最佳工艺为:乙酸酐用量3.3 mL(固定IOP3a多糖量100 mg),反应时间3.1 h,反应温度64℃,在此条件下,Ac-IOP3a的取代度为0.416。抗氧化研究表明:与IOP3a多糖相比,Ac-IOP3a多糖的抗氧化活性明显增强。     

桦褐孔菌多糖脱色方法及其成分分析

对桦褐孔菌多糖的脱色方法和单糖的组成进行研究。首先考察活性炭粉、过氧化氢、壳聚糖、聚酰胺层析柱的脱色效果。经脱蛋白、脱色后的多糖进行1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化,采用高效液相色谱法分析单糖组成。4 种脱色方法对桦褐孔菌多糖均有效果,活性炭和聚酰胺层析柱脱色效果明显优于过氧化氢和壳聚糖脱色法,聚酰胺层析柱脱色是较好的方法,其脱色率为89.3%、多糖保留率为91.7%。结果表明：桦褐孔菌多糖粗品主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,其物质的量比为2.13∶1.36∶7.01∶2.98∶1∶1.78。     

响应面法优化桦褐孔菌多糖提取工艺及其抗氧化活性

利用超声波辅助技术研究桦褐孔菌多糖的最佳提取工艺,并对其抗氧化活性进行评价。在单因素试验基础上,以多糖提取率为指标,采用Box-Behnken响应面法优化超声辅助提取条件;采用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法纯化多糖后,通过DPPH自由基清除试验来评价其抗氧化活性。结果表明,桦褐孔菌多糖的最佳提取条件为:超声时间31 min,超声温度52℃,液料比为21∶1(mL/g),多糖提取率达到(3.81±0.19)%。桦褐孔菌粗多糖中多糖质量分数为19.0%(以葡萄糖计),蛋白质量分数为13.9%(以牛血清蛋白计)。体外抗氧化试验显示,桦褐孔菌精制多糖对DPPH自由基有一定的清除作用。     

桦褐孔菌多糖的乙酰化修饰及其抗氧化活性

采用乙酰化修饰方法对桦褐孔菌多糖进行结构修饰,并评价其抗氧化活性,为桦褐孔菌多糖结构修饰提供新的思路和方向。以桦褐孔菌为原料,采用水提醇沉法提取桦褐孔菌多糖,过AB-8大孔吸附树脂,得纯化后的桦褐孔菌多糖。在氢氧化钠水溶液中以不同体积的乙酸酐制备乙酰化桦褐孔菌多糖,盐酸羟胺比色法测定其取代度。在此基础上,对3种不同取代度的乙酰化桦褐孔菌多糖进行抗氧化活性研究。结果表明,桦褐孔菌多糖经纯化后,通过乙酰化修饰得到三个取代度分别为0.2810、0.3136、0.4072的乙酰化产物,随着乙酰化试剂的体积增加,多糖取代度逐渐增大;三个不同取代度的乙酰化产物对DPPH自由基最大清除率分别为71.8%、74.9%、78.5%;对超氧阴离子的最大清除率分别为71.8%、74.9%、78.5%;对羟基自由基的最大清除率分别为74.5%、79.9%、81.1%。随着取代度的增加,乙酰化桦褐孔菌多糖抗氧化活性逐渐增强。桦褐孔菌多糖经乙酰化修饰后,可显著提高体外抗氧化活性,且抗氧化活性的强弱与乙酰基取代度有关。     

铁棍山药多糖纯化及抗氧化活性

对铁棍山药粗多糖进行纯化分离获得单体组分,并对其抗氧化活性进行评价。利用AB-8大孔树脂对铁棍山药多糖进行富集纯化,再利用DEAE-52纤维素层析柱和Sephadex G-100层析柱分离多糖粗品,利用DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验和总还原能力测定评价分离得到的3种铁棍山药多糖组分的抗氧化活性。结果显示,AB-8大孔树脂可纯化铁棍山药粗多糖,使其纯度从53.13%提高到82.57%,获得多糖粗品,洗脱参数为:上样浓度为1.12 g/L,上样体积为4000 mL,上样流速为500 mL/h,洗脱液速度为750 mL/h,洗脱液体积为1000 mL,解吸率可达到95.62%。经过DEAE-52纤维素层析柱和Sephadex G-100层析柱分离得到3种铁棍山药多糖组分DOTP1、DOTP2和DOTP3,得率分别为0.34%、0.42%和0.36%,纯度分别为93.11%、91.22%和92.75%。DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验和总还原能力测定结果显示,铁棍山药多糖DOTP1的抗氧化活性优于DOTP2和DOTP3,而3种多糖组分的抗氧化活性都略优于阳性对照VE。研究所用纯化分离方案可实现铁棍山药多糖的分离纯化,得到的3种多糖组分具有较好的抗氧化活性。     

桦褐孔菌多糖的分离纯化及其组成分析

为更好地开发利用桦褐孔菌这一丰富的真菌资源,采用水提法得到桦褐孔菌粗多糖(CIP),经DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析、SepharoseCL-6B和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到一个桦褐孔菌多糖组分(IP2a)。采用高效液相色谱法、比旋度法及琼脂糖电泳法鉴定其纯度,气相色谱法、高效液相色谱法及红外光谱研究其组成、相对分子质量和结构。结果表明IP2a为均一组分;IP2a由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为2.3∶4.5∶1∶2.5,其相对分子质量为86053u,含有α-型糖苷键。IP2a是一种不含核酸和蛋白质的杂多糖,是桦褐孔菌水溶性多糖的重要组成。     

桦褐孔菌多糖的提取工艺优化及抗氧化活性评价

目的:优化桦褐孔菌多糖的超声波法提取工艺,对比不同产地桦褐孔菌多糖的抗氧化活性。方法:采用正交试验法确定超声波法的最佳工艺流程,检测不同产地桦褐孔菌的多糖提取率和抗氧化活性。结果:超声波法的最佳提取条件为超声时间25min、料液比1∶40、超声温度50℃、提取3次,在此条件下多糖提取率高达8.61 g/100g,与水提醇沉法相比提高了17.3%,耗时缩短了3/4,大大提高了提取效率。抗氧化能力检测结果证明超声波法得到的桦褐孔菌多糖都具有抗氧化活性,并且抗氧化能力与多糖提取率之间的相关性极其显著。结论:通过优化提取条件,超声波法明显提高了多糖提取率,保持了桦褐孔菌多糖的抗氧化活性,是一种可行、实用和高效的真菌多糖提取方法。     

桦褐孔菌多糖的研究进展

桦褐孔菌多糖是桦褐孔菌的主要活性成分,在抗氧化、抗肿瘤等方面起到重要作用,是一种潜在的保健成分。文章阐述了桦褐孔菌多糖的提取、分离纯化、生物活性以及结构等方面的研究进展,并展望桦褐孔菌多糖进一步研究以及活性开发应用的趋势。     

DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌多糖的工艺优化

为了能高效快速的分离纯化桦褐孔菌子实体多糖,使用DEAE-52纤维素静态法,分别研究了静态吸附过程中多糖的样品浓度、吸附时间、吸附温度和吸附振荡转速等因素对多糖吸附量的影响及解吸过程中洗脱时间和洗脱液量对多糖解吸量的影响,确定了多糖分离纯化优化工艺条件。结果表明:多糖浓度为40 mg/mL时,在30 ℃,120 r/min转速下吸附处理90 min,此时DEAE-52纤维素对多糖吸附效果最好。而分别以12倍体积的去离子水洗脱90 min后,采用11倍体积的0.2 mol/L NaCl溶液洗脱60 min时,能达到最好的解吸效果,其中去离子水洗脱多糖浓度为0.56 mg/mL,0.2 mol/L NaCl洗脱多糖浓度为0.38 mg/mL。静态洗脱出的两种多糖组分均为分子量均一分布的多糖组分,与DEAE-52纤维素柱层析分离效果一致。因此采用DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌子实体多糖是可行的。     

桦褐孔菌纯化多糖体外降血糖活性研究

采用水提醇沉法得到桦褐孔菌发酵粗多糖,将粗多糖过DEAE-52纤维素柱分离纯化得到两种多糖(EIOP1、EIOP2),本文以α-葡萄糖苷酶抑制活性、正常HepG2细胞及胰岛素抵抗HepG2细胞的单位细胞葡萄糖消耗量为主要指标,探究桦褐孔菌两种纯化多糖不同浓度(10、20、40、80、160和320 μg/mL)的降血糖活性,其中α-葡萄糖苷酶抑制活性以阿卡波糖作为阳性对照,葡萄糖消耗实验以二甲双胍作为阳性对照。结果表明,EIOP1、EIOP2的α-葡萄糖苷酶抑制活性均高于阳性对照组阿卡波糖与粗多糖,IC₅₀值分别为39.18、29.87 μg/mL。EIOP1在浓度为80 μg/mL时,对HepG2细胞的葡萄糖消耗量极显著高于对照组,促进效果最好,比对照组提高了30.62%(P<0.01);EIOP2在浓度在40 μg/mL时,葡萄糖消耗量极显著高于对照组,比对照提高了75.99%(P<0.01);对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗实验发现EIOP1在浓度为40 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了30.00%,EIOP2在浓度为80 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了90.49%,高于Met组(P<0.01)。因此,桦褐孔菌纯化多糖对正常HepG2细胞和胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗均具有促进作用,对α-葡萄糖苷酶的抑制活性显著高于粗多糖。     

桦褐孔菌多糖对糖尿病肾病小鼠肾脏的保护作用

为探究桦褐孔菌多糖（Inonotus obliquus polysaccharide,IOP）对糖尿病肾病小鼠肾脏的保护作用。采用链脲佐菌素（Streptozocin,STZ）诱导与高糖、高脂饲料喂养相结合的方式建立糖尿病肾病小鼠模型,将试验小鼠随机分为对照组、模型组、阳性组（盐酸二甲双胍）和桦褐孔菌多糖低、中、高剂量组。连续灌胃小鼠4周后,观察小鼠生长状态、测量小鼠体重,测定肾脏指数、肾功能指数以及肾脏抗氧化能力并对小鼠肾脏组织进行病理检测等。结果表明:桦褐孔菌多糖剂量组均能改善糖尿病肾病小鼠体重异常以及肾脏指数增高、肾脏肿大。其中高剂量组可以极显著抑制肾脏肿胀、修复肾组织损伤,提高肾脏氧化酶活力（P<0.01）,抑制丙二醛产生。桦褐孔菌多糖对糖尿病肾病小鼠肾脏的保护作用与多糖抑制小鼠机体过氧化损伤、减少脂质过氧化的合成有关。     

绿球藻多糖分离纯化及抗氧化活性研究

天然多糖具有良好的生物活性和功能,而微藻具有生长速度快、适应性强、在人工培养下能够大量繁殖、占地面积小、生产成本低等特性。为深入挖掘更多的微藻多糖资源,采用传统热水浸提方法对绿球藻(Chlorococcum sp.GD)多糖进行分离,并采用DEAE-52纤维素柱层析和Sephadex G-150柱层析对所获得的粗多糖进行纯化,并研究其抗氧化活性。结果表明:1)粗多糖提取率为6.07%,通过分级纯化,得到4个组分CPP-Ⅰ、CPP-Ⅱ、CPP-Ⅲ和CPP-Ⅳ,且纯度较高;2)绿球藻纯化多糖对DPPH自由基和羟基自由基具有明显的清除效果,清除率分别超过90%和70%,且纯化组分CPP-Ⅳ的效果优于粗多糖;3)绿球藻纯化多糖对超氧阴离子和ABTS+自由基也具有一定的清除效果,清除率分别超过50%和27%,且还原力为0.404。研究结果虽然低于VC的清除率,但仍然表明绿球藻多糖纯化后具有较好的抗氧化活性,并且清除率随多糖的浓度增大而增加。     

微波辅助H2O2/VC降解制备低分子量浒苔多糖的研究

为制备抗氧化活性较强的低分子量多糖,以辽宁营口沿海地区的浒苔为原料,采用微波辅助H₂O₂/V_C降解法制备低分子量浒苔多糖,利用DEAE-52、Sephadex G-100进行层析分离,对比浒苔多糖降解前后的理化性质与抗氧化活性,通过红外光谱法对降解后的浒苔多糖进行结构表征,利用薄层层析、高效液相色谱对分离到的多糖LEPⅢa组分进行单糖组成分析。结果表明,利用微波辅助H₂O₂/V_C降解可在较短时间(15 min)降解得到低分子量的浒苔多糖,经层析分离后,得到3种低分子量浒苔多糖LEPⅠ、LEPⅡ、LEPⅢa,分子量Mw分别为(23.6±0.5)、(24.6±0.6)、(22.9±0.5)kDa。与未降解的浒苔多糖相比,微波辅助H₂O₂/V_C降解得到的低分子量多糖的分子量、粘度均显著降低(P<0.05);抗氧化活性显著增强(P<0.05)。降解产物的分子量均在30 kDa以下,粘度在...     

鹿茸多糖分离纯化及抗氧化活性研究

采用DEAE-52离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶排阻层析对鹿茸粗多糖进行分离纯化,并通过对DPPH自由基、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力和还原能力的测定,研究了粗多糖及纯化后多糖的抗氧化能力。结果表明:DEAE-52离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶排阻层析对鹿茸多糖分离效果较好,可以分离纯化得到一种单一多糖;粗多糖和纯化后多糖对DPPH·、·OH、O2-·均有清除作用,且具有一定的还原能力,纯化后多糖抗氧化活性和还原能力均大于粗多糖。     

花生非淀粉多糖的纯化技术研究

以冷榨花生粕为原料,采用高温热水提取花生多糖(PPS)。通过正交实验优化酶解法去除花生粗多糖中淀粉的最佳工艺条件,并利用DEAE-52纤维素离子交换柱层析对花生多糖进行分离纯化。结果表明:在最佳工艺条件下,耐高温α-淀粉酶和糖化酶酶解除淀粉后的花生多糖纯度明显提高;DEAE-52柱层析主要得到中性多糖PPS-1和酸性多糖PPS-2,其含量分别为17.79%和66.93%;紫外扫描结果显示PPS-1和PPS-2均不含核酸,PPS-1含有少量的蛋白。