南美白对虾响应急冷与无水暴露双重胁迫的生理变化特征

为揭示南美白对虾响应急冷与无水暴露双重胁迫的生理调节机制，优化南美白对虾无水保活运输管理和提升运输存活质量，本实验模拟南美白对虾无水保活流通环境，探究急冷（acute cold exposure,AC）与无水暴露（waterless duration,WD）双重胁迫（AC+WD）对南美白对虾机体代谢途径及肝胰腺组织结构的影响。结果表明，在胁迫进程中，对虾血清乳酸（lactic acid,LD）浓度、肝胰腺和肌肉中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力上升，血清LDH、己糖激酶（hexokinase,HK）、琥珀酸脱氢酶（succinatedehydrogenase,SDH）、磷酸果糖激酶（phosphofructokinase,PFK）、丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PK）、Na+/K+-ATPase活力均先升高后降低，而肌肉三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）和肝胰腺糖原（glycogen,Gn）含量降低。复苏后血清葡萄糖（glucose,Glu）和LD浓度分别为（23.92±0.59）mmol/L和（6.27...     

饥饿胁迫对南美白对虾冷藏保鲜效果的影响与酶学机制研究

为评价饥饿胁迫对南美白对虾保鲜效果及其内源性酶活力的影响,本实验对南美白对虾进行饥饿胁迫后4℃冷藏,以感官、生化和细菌总数为指标评价其保鲜效果,并检测饥饿胁迫下对虾内源性蛋白酶和酚氧化酶的变化。结果表明:饥饿胁迫处理4d可较好控制对虾因腐败引起的p H与TVB-N值的升高,微生物的生长受到明显抑制,较好地保持了对虾的感官品质。与对照组相比,饥饿胁迫4d可使内源性蛋白酶活力降低41.2%,但对酚氧化酶活力影响无显著性差异(p>0.05)。综合分析,饥饿胁迫处理4d保鲜效果最佳,与对照相比可延长货架期1~2d,其作用机理之一是通过抑制内源性蛋白酶活力来延缓对虾品质下降。     

纯氧及气调无水保活下珍珠龙胆石斑鱼存活情况比较及机理分析

为探明无水保活运输过程中珍珠龙胆石斑鱼于纯氧及气调环境下的存活情况及机理,本实验模拟珍珠龙胆石斑鱼无水保活运输环境,检测其应激水平、血清生化指标、物质代谢、抗氧化系统相关指标变化,观察存活情况。结果显示,气调环境下珍珠龙胆石斑鱼无水保活时间为（13.88±1.00）h,明显长于纯氧环境保活时间（（10.90±0.66）h）。随着无水保活时间的延长,尿素氮、尿酸、肌酐浓度和酸性磷酸酶活力均呈上升趋势,谷草转氨酶、谷丙转氨酶活力稳步上升,在纯氧无水保活10 h时达到峰值,分别为（262.22±1.54）、（232.05±1.87）U/L,显著高于气调无水保活10 h组（P＜0.05）。而碱性磷酸酶、过氧化物酶活力随无水保活时间的延长呈梯度降低。与正常对照组对比,冷胁迫休眠下肌糖原、肝糖原含量分别显著下降17.65%、27.34% （P＜0.05）。肌肉、肝脏乳酸含量明显增加,复苏后恢复至正常水平。无水保活运输过程中,肌肉乳酸脱氢酶活力呈波动变化,肝脏乳酸脱氢酶活力显著上升（P＜0.05）,丙二醛含量呈上升趋势,均显著高于正常对照组（P＜0.05）。肌肉及肝脏过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶活力、总抗氧化能力、还原型谷胱甘肽含量均逐渐上升,复苏后有所下降。纯氧组珍珠龙胆石斑鱼相关指标变化幅度明显大于气调组,提示气调环境可有效减轻珍珠龙胆石斑鱼肾脏、肝脏、氧化应激损伤程度;鱼体能量物质代谢、抗氧化系统及免疫防御系统调控能力强,能较好地维持机体在低温无水胁迫环境下的正常生理代谢。     

南美白对虾肝胰腺蛋白提取方法优化及无水保活环境胁迫对细胞凋亡蛋白的影响

为提高Western Blotting结果的可靠性,以蛋白溶出率和凝胶电泳蛋白条带完整性为指标,比较提取液种类、研磨方式、酶抑制剂种类及其体积分数和提取时间对南美白对虾肝胰腺蛋白提取效果的影响。采用优化后的提取方法获得高质量蛋白样品,并采用Western Blotting法分析无水环境胁迫后南美白对虾肝胰腺组织中细胞凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。结果表明：RIPA裂解液作为提取溶剂所得的蛋白溶出率高于水提和磷酸盐缓冲液,电动匀浆和液氮研磨所得蛋白条带更完整,4%蛋白酶磷酸酶混合抑制剂能有效抑制肝胰腺内源酶引起的蛋白降解;采用Western Blotting法分析无水保活期间南美白对虾肝胰腺蛋白,发现低温诱导休眠的同时会引起细胞轻微凋亡,且凋亡水平呈应激时间依赖性增加,环境胁迫解除后有所回调。     

无水运输温度和时间对南美白对虾肌肉品质及生理应激的影响

为探讨南美白对虾无水保活运输的适宜温度和时间,本文研究了对虾低温休眠温度,测定了4、10 ℃条件下模拟运输不同时间段的存活率,分析了对照组、休眠组、运输组和运输后复水唤醒30 ?min?,4种状态下对虾肌肉品质以及生理应激指标。结果表明,南美白对虾的休眠温度为（10.0±0.2）℃;模拟运输12 h内,两温度组存活率均为100%,36?h后两组存活率均低于30%。不同运输温度对肉质指标影响不显著（P>0.05）;除蒸煮损失率,相同温度下运输应激对水分、粗蛋白、粗脂肪含量影响均不显著（P>0.05）。生理应激指标中,两种温度下模拟运输24 h后,肌糖原、琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase,SDH）、乳酸脱氢酶（lactate?dehydrogenase,LDH）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量与对照组相比均发生显著变化（P<0.05）,且复水后也均不能恢复到对照组水平。南美白对虾可以通过低温诱导休眠的方式进行无水保活运输,10 ℃适于18 ?h内短途运输,长途运输则可选用4 ℃。     

南美白对虾酚氧化酶的提取及生化特性

以南美白对虾为研究对象,分析以Tris-HCl为提取缓冲液,研究提取液浓度、提取液pH值、浸提时间对酚氧化酶活力的影响,以L9（33）正交试验方法优化酚氧化酶提取条件,然后对南美白对虾酚氧化酶生化特性进行研究。结果表明：提取液浓度为0.2 mol/L、提取液pH值为8.0、浸提时间为20 min条件下提取的酶具有最大的活力;以邻苯二酚为底物时,酚氧化酶最适pH值为8、最适温度为40℃,在该条件下酶促反应动力学符合米氏方程,米氏常数Km为0.717 mol/L,Vmax为0.130 A/min。     

低温休眠预处理对花鲈无水保活效果的影响

花鲈（Lateolabrax maculatus）由养殖水温22～23 ℃分别经1、3 ℃/h和5 ℃/h不同降温速率处理至临界温度4 ℃,无水活运8 h,通过检测花鲈肝组织的半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）活力、丙二醛（malonaldehyde,MDA）浓度及血清中鱼前蛋白转化酶枯草溶菌素-9（protein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK-9）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）活力,研究不同降温速率休眠处理后无水活运对花鲈肝组织损伤的影响,获得最佳降温速率处理条件,降低运输过程中鱼体损伤,提高存活率,以期获得最优的花鲈无水活运技术。结果表明：运输0 h,3 个降温速率处理组花鲈肝组织Caspase-3活力、MDA浓度及血清中PCSK-9、AST、ALT活力较对照组均增高;在模拟运输8 h时,3 ℃/h降温处理组花鲈上述5 个指标均显著低于1、5 ℃/h降温处理组（P＜0.05）,且显著高于对照组;运输2 h后,3 ℃/h降温处理组花鲈血清中PCSK-9活力显著低于1、5 ℃/h降温处理组（P＜0.05）;与运输8 h比较,唤醒后花鲈的肝组织内MDA浓度、Caspase-3活力呈下降趋势,但依然很高,PCSK-9活力增高,AST活力增长减缓或降低,表明不同降温速率条件下无水活运过程对花鲈肝脏的损伤不能在短时间内恢复。因此,花鲈可以通过低温诱导休眠的方式进行无水保活,3 ℃/h组处理后无水活运8 h对花鲈肝组织损害程度低,存活率高,建议将降温速率设定为3 ℃/h。     

凡纳滨对虾在二氧化碳麻醉无水保活过程中呼吸代谢及免疫的变化

为了研究凡纳滨对虾在二氧化碳麻醉无水保活过程中呼吸代谢及免疫的变化,本文分析了未处理(对照)、无水保活和复苏3种状态下,凡纳滨对虾葡萄糖(Glu)、乳酸(LD)及鳃中3种糖酵解关键酶、有氧代谢和无氧代谢关键酶、免疫相关酶及血淋巴细胞总数(THC)变化。结果显示:无水保活中对虾Glu浓度低于对照组,LD浓度则显著高于对照组;己糖激酶(HK)、果糖磷酸激酶(PFK)和丙酮酸激酶(PK)这3种糖酵解关键酶活力均高于对照组;反映有氧代谢水平的琥珀酸脱氢酶(SDH)活力低于对照组,反映无氧代谢水平的乳酸脱氢酶(LDH)则相反;对虾THC随着保活时间延长显著低于对照组(p<0.05),超氧化歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活力先低于对照组后高于对照组。复苏后,HK、PK、SOD和POD恢复到对照组水平,Glu、LD、PFK、SDH、LDH和THC均与对照有显著差异。无水保活过程中,凡纳滨对虾糖酵解加快以及无氧代谢加强,同时体液免疫功能正常发挥作用,无水保活8 h未造成其代谢及免疫功能紊乱。本研究结果可为对虾类无水保活技术提供理论依据。     

超高压处理对南美白对虾褐变的影响

目的研究超高压处理对南美白对虾褐变的影响。方法研究超高压处理对对虾褐变的影响及其与多酚氧化酶与丝氨酸蛋白酶活性的相关性。结果压力为300MPa,保压时间10min时,南美白对虾体表褐变程度最高, 2种酶的活性最高;用300 MPa, 10 min超高压处理后,发现对虾随冷藏时间的增加,酶的活性增强,褐变的程度增大。其中压力为200 MPa,保压时间10 min时,南美白对虾体表褐变程度相对较高, 2种酶的活性最低;用200MPa,10min超高压处理后,发现对虾随冷藏时间的增加,酶的活性受到钝化,褐变的程度较低。结论超高压处理对南美白对虾的褐变有一定的影响,在一定条件下有利于抑制对虾的褐变。     

不同生物保鲜剂对冷藏南美白对虾的保鲜效果

为提高冷藏南美白对虾的贮藏品质,分别采用0.05%溶菌酶、0.1%植酸、0.5%柠檬酸、0.15%抗坏血酸、0.5%L-半胱氨酸和1.5%壳聚糖保鲜对虾,通过感官评价、pH、细菌总数、挥发性盐基氮和多酚氧化酶相对酶活力的测定评价保鲜效果。研究结果表明,1.5%壳聚糖能有效减缓新鲜对虾感官品质的下降,并抑制微生物生长,0.5%柠檬酸对挥发性盐基氮抑制效果最好,并有较强的抑制多酚氧化酶作用,0.5%L-半胱氨酸能有效抑制多酚氧化酶和黑变,而0.05%溶菌酶、0.1%植酸和0.15%抗坏血酸对南美白对虾的品质改善不明显。     

无水贮藏温度对克氏原螯虾保活期品质的影响

为探究无水贮藏温度对克氏原螯虾保活期间品质的影响,本文分析了不同无水贮藏温度下克氏原螯虾保活期间存活率、肌肉品质、生理指标的变化。结果显示,无水贮藏72 h时,4～16℃组的克氏原螯虾的存活率仍有80%～90%;24℃组降至40%;32℃组为0。虾尾肌肉的水分含量、持水率、硬度和弹性随着贮藏温度的升高与贮藏时间的延长显著下降(P<0.05),乳酸的生成降低了肌肉的pH。4、24与32℃组超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)酶活力及丙二醛(MDA)含量随着贮藏时间的延长显著升高(P<0.05),8～16℃组的氧化应激响应较低于4、24和32℃组。酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)以及溶菌酶(LZM)活性在4、24与32℃贮藏条件下显著升高(P<0.05),8～16℃组的变化相对平稳。研究表明,无水贮藏中保持适当低温条件,在12～16℃范围内,可提高克氏原螯虾存活率和肌肉品质,这与机体保持较低的氧化应激水平及维持良好的免疫机制有关,本实验结果可为克氏原螯虾无水贮运提供理论依据。     

南美白对虾冷风干燥过程中的品质变化研究

冷风干燥是一种重要的水产品干燥方法。该文主要研究南美白对虾在冷风干燥过程中水分含量、复水率、质地、微观结构、色泽及感官评分的变化。结果表明:随着干燥时间的延长,南美白对虾水分含量逐渐降低,复水率显著增加;硬度、咀嚼度不断增大;肌纤维聚集,纤维束间空隙逐渐变大,但干燥16 h的样品仍保持较为完整的纤维结构;冷风干燥16 h时,虾的a~*值达到最大,色泽最红,咀嚼性好,风味浓郁,感官评分最高。     

T-2毒素对凡纳滨对虾的经口急性毒性效应研究

通过T-2毒素微胶囊毒饵料一次性染毒凡纳滨对虾,采用模型拟合法测定T-2毒素对凡纳滨对虾经口LD50,并分析Ca2+-ATPase、多酚氧化酶(PPO)活力以及肌肉病理组织学变化,进而探明T-2毒素对凡纳滨对虾急性毒性效应。结果表明,T-2毒素对凡纳滨对虾的急性毒性经口一次性暴露的LD50为1.22 mg/(kg·bw),T-2毒素对PPO酶活性和Ca2+-ATPase活性的急性毒性效应ED50分别为0.05和3.22 mg/(kg·bw),比较风险评估指数RI可知,PPO活性可作为生物学效应标记描述T-2毒素对对虾的急性毒性效应,且比Ca2+-ATPase更加灵敏。T-2毒素急性暴露可导致肌纤维间隙面积比增大,可导致对虾肌肉品质劣化。采用LC-MS/MS定量检测染毒对虾肌肉中的T-2毒素,但是没有发现游离态T-2毒素残留,说明对虾中T-2毒素急性暴露不会引起物质蓄积,但却产生功能蓄积,可能是T-2毒素以隐蔽态形式存在,导致初始轻微损伤逐渐累加的结果。     

凡纳滨对虾组织蛋白酶L性质分析及其对肌肉蛋白的降解

本研究从凡纳滨对虾肝胰腺中纯化获得一种组织蛋白酶L,其分子质量约为31 k D,肽质量指纹图谱分析得到8个片段共112个氨基酸残基,与报道的凡纳滨对虾组织蛋白酶L序列完全一致。该酶的最适温度和最适pH值分别为35℃和5.5,且在0~40℃以及pH 5.5~6.5之间酶活力稳定。该酶仅对底物Z-Phe-Arg-MCA特异分解。半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64和Leupeptin对其有明显的抑制作用,而金属蛋白酶抑制剂乙二胺四乙酸和乙二醇二乙醚二胺四乙酸对其有少量的激活作用。扫描电子显微镜观察结果显示,随着低温贮藏时间的延长,对虾肌肉纤维的断裂程度不断增加。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示,组织蛋白酶L可使肌肉蛋白发生分解,推测其可能参与对虾低温贮藏过程中肌肉的降解。     

暂养净化及无水保活中太平洋牡蛎活力品质与呈味物质分析

为探明太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)采捕后不同流通阶段活力品质与呈味物质的变化规律，模拟产业流通实际，将活体太平洋牡蛎进行暂养净化、诱导休眠和无水保活，并在不同时间段取样，以腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)关联物、核苷酸能荷值(adenylate energy charge,AEC)及游离氨基酸变化分析牡蛎活力品质的变化；以呈味化合物含量结合呈味强度值评价流通过程中牡蛎风味品质变化。结果显示，采捕后运输及环境胁迫对其活力、呈味物质有显著影响，通过24 h暂养净化，牡蛎活力品质均呈明显恢复，其中ATP、AEC、游离氨基酸总量较净化前明显上升(P<0.05)，机体活力达到新水平；诱导休眠至保活流通阶段，牡蛎受到低温、缺氧胁迫需调动更多能量物质以维持机体平衡，各项活力品质指标较净化前明显降低(P<0.05)，处于稳定的较低水平。呈味化合物中，牡蛎在暂养净化后鲜甜味氨基酸增加，苦味氨基酸下降，随着保活时间的延长，呈味氨基酸缓慢下降；鲜甜味核苷酸肌苷5’-单磷酸(inosine 5’-monophosphate,IMP)、单磷酸腺苷...