冠突散囊菌发酵液对免疫抑制小鼠免疫学指标的影响

目的：探究冠突散囊菌发酵液对免疫抑制小鼠免疫指标的影响。方法：采用剂量为80 mg/kg的环磷酰胺腹腔注射小鼠,建立免疫抑制模型。用低、中、高剂量的冠突散囊菌发酵液,连续灌胃免疫抑制小鼠15 d,检测小鼠脾脏指数、单核—巨噬细胞吞噬指数、半数溶血值、迟发型变态反应、血清中白介素-2（IL-2）质量浓度。结果：与对照组相比,中、高剂量组的冠突散囊菌发酵液能显著升高（P＜0.05）免疫抑制小鼠的半数溶血值、加快迟发性变态反应;低、中、高剂量组均能提高血清中IL-2质量浓度,分别上升至正常组的3.07,3.10,2.87倍,对小鼠单核—巨噬细胞免疫功能作用不明显。结论：冠突散囊菌发酵液对小鼠具有增强免疫力的功能。     

鹿胎肽对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

本实验从鹿胎中提取鹿胎肽（DFP）,通过体外实验研究其对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。采用噻唑蓝（MTT）实验检测超滤组分各肽段的增殖活性,筛选增殖活性高的组分。选用中性红吞噬实验、酶联免疫吸附检测法测定DFP对RAW264.7细胞吞噬指数、一氧化氮（NO）浓度及细胞因子如白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6和肿瘤坏死因子子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌能力,同时还研究了DFP对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于1 kDa的DFP-5对巨噬细胞RAW264.7作用后,可显著（P<0.05）提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且在DFP-5质量浓度为25 μg/mL时效果最好。细胞周期结果表明,DFP-5能够促进RAW264.7细胞的生长,且主要作用在G0/G1期。以上结果表明,鹿胎肽具有增强免疫能力的潜在作用。     

冠突散囊菌发酵液的抗菌作用

采用滤纸片法研究茯砖茶浸提液、PDA原液和冠突散囊菌PDA发酵液对细菌、酵母菌、霉菌和放线菌的抑制作用及酸碱度、温度和紫外光照射对冠突散囊菌PDA发酵液抑菌作用的影响。结果表明：茯砖茶浸提液和冠突散囊菌发酵液对细菌有较强的抑制作用,而对酵母菌和霉菌抑制作用不明显。通过对冠突散囊菌PDA发酵液抑菌物质稳定性的初步研究,结果表明,发酵液中的抑菌物质对温度(40～120℃)、紫外光(照射10h之内)和酸碱(pH2～10)稳定。     

锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用的影响

目的 研究锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。方法 以巨噬细胞RAW264.7为研究对象, 设置空白对照组、阳性(LPS)对照组、锁阳多糖给药组(25、50、100、200、400 μg/mL), 用CCK-8法测定细胞增殖活性, 中性红法测定其吞噬活性; Griess法测定其对NO分泌量的影响; ELISA法测定其IL-6和TNF-α的释放能力。结果 与空白组比较, 不同浓度(25~400 μg/mL)锁阳多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖(P<0.05或P<0.01), 干预24 h和48 h的增殖活性明显高于干预6 h和12 h的增殖活性(P<0.05); 锁阳多糖(25~ 400 μg/mL)能显著促进细胞的吞噬活性(P<0.05); 干预48 h后, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)的NO分泌量显著高于空白组和LPS组(P<0.05); 与空白组和LPS组相比, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)能显著促进细胞IL-6和TNF-α的释放(P<0.01)。结论 锁阳多糖在一定浓度范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。     

不同食用菌多糖复配物对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

目的:探究5种食用菌多糖,包括银耳多糖（Tremella fuciformis polysaccharide）、茯苓多糖（Poriacocos polysaccharide）、香菇多糖（Lentinan）、猴头菇多糖（Hericium edodes polysaccharide）和竹荪多糖（Dictyophora indusiata polysaccharide）任意3种多糖复配得到的多糖复配物的免疫调节活性。方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,采用CCK-8试剂盒检测不同浓度的复配物对巨噬细胞增殖的影响,酶联免疫吸附法测定复配物处理后细胞培养液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）水平,以及流式细胞仪分析复配物处理后细胞吞噬能力。结果:与正常对照组相比,除了浓度为320 μg/mL的茯苓多糖、香菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物,茯苓多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物以及香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物外,在检测浓度范围内10种多糖复配物可明显促进巨噬细胞的增殖,增强吞噬能力,提高细胞因子TNF-α的分泌量。其中,10 μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和竹荪多糖的复配物促进巨噬细胞增殖的效果最佳,160 μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和香菇多糖的复配物能最好的促进TNF-α的分泌和增强RAW264.7的吞噬能力。结论:不同食用菌多糖的复配物均可调节巨噬细胞RAW264.7的免疫活性。本结果可为开发免疫调节功能的食用菌复配多糖产品提供数据参考。     

醋蛋液对巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性的影响

采用细胞计数试剂盒（CCK）-8法检测不同剂量的醋蛋液对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性的影响,倒置显微镜及荧光显微镜下分别观察不同分组条件下对RAW264.7细胞形态的影响及细胞核的损伤程度,探讨醋蛋液对RAW264.7细胞分泌免疫因子的影响及其免疫调节活性的机理。结果表明,当醋蛋液浓度为40 μL/mL时,RAW264.7细胞活性极显著升高为（145.3±23.02）%（P＜0.01）。醋蛋液高剂量组（20 μL/mL）巨噬细胞体积变大并逐渐伸出伪足,与正常细胞有明显差异,但未达到炎症相关形态学特征;醋蛋液高剂量组（20 μL/mL）可以促进巨噬细胞分泌白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和一氧化氮（NO）分泌,可以有效缓解巨噬细胞细胞核损伤、细胞膜电位降低造成的细胞损伤及细胞凋亡;醋蛋液高剂量组（20 μL/mL）可以上调蛋白激酶B（AKT）以及核因子-κB（NF-κB）的表达量,进而激活巨噬细胞,调节机体免疫力。     

毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的研究

目的：明确毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫功能的调节作用。方法：分别以质量浓度25、50、100、200、400μg/mL的毛蕊花糖对RAW264.7巨噬细胞进行培养,以10μg/mL的脂多糖(LPS)为阳性对照组、不加任何样品的培养基为空白对照组。通过噻唑蓝(MTT)实验、吞噬中性红实验、NO释放量测定及酶联免疫吸附法测定细胞因子(IL-6、IL-1β、IFN-α、IFN-γ)的分泌量,评价毛蕊花糖的免疫调节作用。结果：质量浓度为25～400μg/mL的毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7作用24h后,可显著提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且毛蕊花糖溶液质量浓度为200μg/mL时效果最好。结论：毛蕊花糖对小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7具有免疫调节活性,是一种良好的免疫增强剂。     

冠突散囊菌发酵燕麦对阿魏酸含量的影响

以燕麦为基质,利用冠突散囊菌进行燕麦固态发酵,通过单因素试验和正交试验优化阿魏酸提取工艺及燕麦发酵条件,采用 高效液相色谱（HPLC）法测定燕麦的阿魏酸含量。 结果表明,阿魏酸提取最佳工艺是采用固液比为1∶10（g∶mL）的体积分数60%的乙 醇在50 ℃条件下浸提发酵燕麦6 h; 燕麦发酵最佳条件为裸燕麦在pH 5的水溶液中浸泡12 h,121 ℃灭菌后接种1%的冠突散囊菌, 26 ℃恒温发酵;在此条件下发酵燕麦阿魏酸含量在发酵第4 d时达到最高835.89 μg/g,是未发酵燕麦的4.2倍。     

冠突散囊菌与茶多酚复合物对免疫抑制小鼠的保护作用

目的:探究冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合物对环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠的影响。方法:用剂量为80 mg/kg的环磷酰胺连续3 d腹腔注射小鼠以建立免疫抑制模型。用高、中、低剂量的冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合，连续灌胃免疫抑制小鼠15 d,检测小鼠血液指标、脾脏指数、巨噬细胞吞噬系数、半数溶血值、迟发型变态反应、血清中白介素-2(IL-2)及肿瘤坏死因子(TNF-α)质量浓度。结果:冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合物能明显提高免疫抑制小鼠白细胞数目、红细胞数目、血红蛋白含量、血清中溶血素水平、IL-2水平，并增强其脏器指数、吞噬细胞的吞噬指数，改善小鼠迟发型变态反应。结论:冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合物对小鼠具有免疫增强的功能。     

毛酸浆果提取物对RAW264.7细胞的免疫调节作用

该文探讨了毛酸浆果提取物（Physalis pubescens L. Fruits Extract,PPFE）对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用。采用噻唑蓝比色法（MTT）确定细胞毒性和增殖活性,格里斯法（Griess）、酶联免疫法（ELISA）、荧光探针法、中性红吞噬实验测定体外培养的巨噬细胞中一氧化氮（NO）、肿瘤因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）、干扰素-γ（IFN-γ）、活性氧（ROS）含量以及吞噬率;流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡情况,荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测TNF-α、IFN-γ以及IL-6等细胞因子mRNA表达水平。结果显示：运用UHPLC-Q-TOF-MS测定PPFE化学成分分析,共鉴定出14种黄酮类物质。PPFE作用RAW264.7细胞的安全浓度在25~250 μg/mL范围内,与空白组相比,毛酸浆果提取物质量浓度为25 μg/mL时免疫增强效果最佳,其细胞增殖率、NO释放量、吞噬率、相对活性氧水平、TNF-α、IFN-γ、IL-6的分泌量分别为130.53%、27.79 μmol/L、189.88%、137.75%、150.54 pg/mL、119.36 pg/mL、15.41 pg/mL。PPFE治疗组的细胞周期的G0/G1期、S期、G2/M期百分比分别为53.08%、17.40%、29.52%。细胞凋亡率与空白组相比降低了52.80%,同时极显著（p<0.01）上调TNF-α、IFN-γ、IL-6的表达。综上可知,PPFE通过调节RAW264.7细胞吞噬功能、分泌免疫因子、细胞周期分布及凋亡情况,以及上调细胞因子mRNA表达水平,增强RAW264.7细胞免疫调节作用。     

Suppressive effects of extracts from the aerial part of Coriandrum sativum L. on LPS‐induced inflammatory responses in murine RAW 264.7 macrophages

BACKGROUND: Coriandrum sativum is used not only as a spice to aid flavour and taste values in food, but also as a folk medicine in many countries. Since little is known about the anti‐inflammatory ability of the aerial parts (stem and leaf) of C. sativum, the present study investigated the effect of aerial parts of C. sativum on lipopolysaccharide (LPS)‐stimulated RAW 264.7 macrophages. We further explored the molecular mechanism underlying these pharmacological properties of C. sativum. RESULTS: Ethanolic extracts from both stem and leaf of C. sativum (CSEE) significantly decreased LPS‐induced nitric oxide and prostaglandin E₂ production as well as inducible nitric oxide synthase, cyclooxygenase‐2, and pro‐interleukin‐1β expression. Moreover, LPS‐induced IκB‐α phosphorylation and nuclear p65 protein expression as well as nuclear factor‐κB (NF‐κB) nuclear protein–DNA binding affinity and reporter gene activity were dramatically inhibited by aerial parts of CSEE. Exogenous addition of CSEE stem and leaf significantly reduced LPS‐induced expression of phosphorylated mitogen‐activated protein kinases (MAPKs). CONCLUSION: Our data demonstrated that aerial parts of CSEE have a strong anti‐inflammatory property which inhibits pro‐inflammatory mediator expression by suppressing NF‐κB activation and MAPK signal transduction pathway in LPS‐induced macrophages. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

体外评估乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响

该研究以商业菌株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LGG为阳性对照菌,体外评估实验室保藏的5株乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7细胞活性、吞噬活性及免疫活性分子NO、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素-10（IL-10）分泌水平的影响,以期从中筛选出具良好免疫调节作用的菌株。结果表明,鼠李糖乳杆菌260具有更优的免疫调节作用,在特定乳杆菌活菌浓度时,能显著提高巨噬细胞RAW264.7的细胞活性、吞噬活性及NO、TNF-α和IL-10的分泌水平（P＜0.05）。最高细胞增殖率为196.62%;最低乳酸脱氢酶（LDH）释放量为554.36 U/100 mL;最高吞噬活性为136.86%;最高NO分泌量为5.70 μmol/L;最高IL-10分泌量为15.56 pg/mL,最高TNF-α分泌量为50.98 pg/mL。     

轮叶党参粗多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞及RAW 264.7细胞的免疫活性

目的:研究轮叶党参多糖对小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞(RAW 264.7)作用以探究其免疫增强的功效。方法:浓度为1000,500,250,125 μg/mL多糖体外分别与脾脏细胞、RAW 264.7共培养,采用ELISA法检测细胞上清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6和TNF-α浓度的变化。采用MTT法,研究轮叶党参粗多糖对RAW 264.7增殖的影响。Griess法测定细胞上清液中NO的含量变化。通过RT-PCR法检测iNOS mRNA的生成情况。结果:与正常组相比,轮叶党参粗多糖组IL-2、IFN-γ、IL-6、TNF-α和NO的分泌量极显著增加(p<0.01),显著促进RAW 264.7增殖(p<0.05)。与正常组比较,iNOS mRNA明显增加。结论:轮叶党参粗多糖可与ConA协同增强T细胞活性,也可参与活化单核-巨噬细胞对特异性免疫与非特异性免疫活性起到正向调节的作用。     

青蛤酶解多肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

研究酶解法制备的青蛤多肽（Cyclina sinensis peptides,CSP）对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝（methyl thiazolyltetrazolium,MTT）法筛选出增殖活性最高的组分进行免疫调节作用研究。采用MTT细胞增殖实验、倒置显微镜观察、中性红吞噬实验、硝酸根还原酶法及酶联免疫吸附检测法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定CSP-5对RAW264.7巨噬细胞的生长与增殖、细胞形态、吞噬能力、一氧化氮（nitric oxide,NO）分泌能力及细胞因子白介素（interleukin,IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌能力的影响;同时还研究了CSP-5对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于3 kDa的CSP-5对RAW264.7细胞的生长与增殖具有明显的促进作用,且主要作用于G0/G1期,对细胞吞噬能力、NO分泌能力和细胞因子分泌能力的提高具有显著的促进效果;形态学观察结果显示经CSP-5作用后巨噬细胞体积变大且长出较多伪足。由此可知,CSP-5具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。     

大粒车前子多糖对脂多糖刺激RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

采用脂多糖构建RAW264.7巨噬细胞炎症模型,研究大粒车前子多糖的抗炎作用。培养巨噬细胞RAW264.7,利用脂多糖构建细胞炎症模型,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;酶联免疫吸附法检测车前子精制多糖（Plantago asiatica L. crude polysaccharide,PLCP）处理前后细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）和IL-6的分泌量,Griess反应测定RAW264.7细胞释放NO水平。结果表明,PLCP可显著抑制RAW264.7炎症细胞的吞噬活性,降低炎症细胞因子TNF-α、IL-10和IL-6的分泌量及NO的释放量。     

兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr和Asp-Tyr- Asp-Asp对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

为了研究兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr（DDDY）、Asp-Tyr-Asp-Asp（DYDD）对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞抗炎活性。以合成的兜唇石斛发酵多肽为研究对象,采用噻唑蓝法筛选增殖活性最高的发酵多肽浓度,通过中性红吞噬实验和倒置显微镜观察发酵多肽对细胞的吞噬作用和分化形态变化,使用ELISA试剂盒测定细胞中NO及细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子TNF-α的分泌量。结果表明：12.5、25、50和100 μg/mL四组质量浓度的发酵多肽对细胞无毒性并有增殖作用;100 μg/mL的DDDY和DYDD和1 μg/mL的LPS处理可以激活细胞,增强细胞吞噬能力,相对吞噬率为2.05%、1.97%和2.19%;构建LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,发现两种发酵多肽处理有效抑制细胞分化,使细胞恢复正常形态;抑制细胞NO分泌能力,100 μg/mL DDDY和DYDD处理组的NO分泌能力降低到LPS组的0.41倍和0.49倍;并且对抑炎细胞因子分泌能力的提高和促炎细胞因子的降低有显著效果,均表现出剂量反应关系。由此可知,DDDY和DYDD对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应具有抗炎作用,为后面探究发酵多肽的炎症机制提供理论支持。     

Comparison of Immunomodulatory Effects of Fresh Garlic and Black Garlic Polysaccharides on RAW 264.7 Macrophages

Garlic has a long history to be used for medicine and food purposes. Black garlic, the fermented product of fresh garlic, is considered with better biological activities, such as antioxidant activity, and is developed as an increasingly popular functional food. Polysaccharides are the major components of fresh and black garlic, and immunomodulatory activity is one major pharmacological effect of polysaccharides. Therefore, chemical characteristics and immunomodulatory effects of polysaccharides from fresh and black garlic are investigated and compared in vitro for the 1st time, in order to reveal their molecular and pharmacological differences. It is demonstrated that the molecular weights of polysaccharides from the 2 sources and molar ratios of monosaccharides after acid hydrolysis are greatly variant. The effects of polysaccharides from 2 sources on RAW 264.7 macrophages functions, including promotion of phagocytosis, release of NO, and expressions of several immune‐related cytokines (including interleukin [IL]‐6, IL‐10, tumor necrosis factor alpha, and interferon gamma), were different from each other. The results indicated that fresh garlic polysaccharide exhibited stronger immunomodulatory activities than that of black garlic. Moreover, it is revealed that fructan might be the bioactive component in garlic and it is indicated that during the fermentation treatment, fructan constituents of garlic has degraded, and basically no immunomodulatory effect can be found in black garlic polysaccharides.