冠突散囊菌发酵液对免疫抑制小鼠免疫学指标的影响

目的：探究冠突散囊菌发酵液对免疫抑制小鼠免疫指标的影响。方法：采用剂量为80 mg/kg的环磷酰胺腹腔注射小鼠,建立免疫抑制模型。用低、中、高剂量的冠突散囊菌发酵液,连续灌胃免疫抑制小鼠15 d,检测小鼠脾脏指数、单核—巨噬细胞吞噬指数、半数溶血值、迟发型变态反应、血清中白介素-2（IL-2）质量浓度。结果：与对照组相比,中、高剂量组的冠突散囊菌发酵液能显著升高（P＜0.05）免疫抑制小鼠的半数溶血值、加快迟发性变态反应;低、中、高剂量组均能提高血清中IL-2质量浓度,分别上升至正常组的3.07,3.10,2.87倍,对小鼠单核—巨噬细胞免疫功能作用不明显。结论：冠突散囊菌发酵液对小鼠具有增强免疫力的功能。     

冠突散囊菌与茶多酚复合物对免疫抑制小鼠的保护作用

目的:探究冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合物对环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠的影响。方法:用剂量为80 mg/kg的环磷酰胺连续3 d腹腔注射小鼠以建立免疫抑制模型。用高、中、低剂量的冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合，连续灌胃免疫抑制小鼠15 d,检测小鼠血液指标、脾脏指数、巨噬细胞吞噬系数、半数溶血值、迟发型变态反应、血清中白介素-2(IL-2)及肿瘤坏死因子(TNF-α)质量浓度。结果:冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合物能明显提高免疫抑制小鼠白细胞数目、红细胞数目、血红蛋白含量、血清中溶血素水平、IL-2水平，并增强其脏器指数、吞噬细胞的吞噬指数，改善小鼠迟发型变态反应。结论:冠突散囊菌发酵液与茶多酚复合物对小鼠具有免疫增强的功能。     

冠突散囊菌胞外多糖提取工艺研究

冠突散囊菌是茯砖茶生产过程中形成茯砖茶独特品质的优势菌。从茯砖茶中分离纯化出冠突散囊菌,进行液体深层发酵,并对其产生的胞外多糖提取条件进行了正交试验。试验结果表明,本次试验中最优的多糖提取条件为:冠突散囊菌液体发酵液浓缩至原体积的1/4,乙醇浓度95%,乙醇沉淀时间10h。     

冠突散囊菌胞外多糖含量测定及提取工艺研究

冠突散囊菌是茯砖茶生产过程中形成茯砖茶独特品质的优势菌。从茯砖茶中分离纯化出冠突散囊菌，进行液体深层发酵，并对其产生的胞外多糖提取条件进行了正交试验。试验结果表明，最优的多糖提取条件为：冠突散囊菌液体发酵液浓缩至原体积的1／4，乙醇浓度95％，乙醇沉淀时间10h。     

毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的研究

目的：明确毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫功能的调节作用。方法：分别以质量浓度25、50、100、200、400μg/mL的毛蕊花糖对RAW264.7巨噬细胞进行培养,以10μg/mL的脂多糖(LPS)为阳性对照组、不加任何样品的培养基为空白对照组。通过噻唑蓝(MTT)实验、吞噬中性红实验、NO释放量测定及酶联免疫吸附法测定细胞因子(IL-6、IL-1β、IFN-α、IFN-γ)的分泌量,评价毛蕊花糖的免疫调节作用。结果：质量浓度为25～400μg/mL的毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7作用24h后,可显著提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且毛蕊花糖溶液质量浓度为200μg/mL时效果最好。结论：毛蕊花糖对小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7具有免疫调节活性,是一种良好的免疫增强剂。     

青蛤酶解多肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

研究酶解法制备的青蛤多肽（Cyclina sinensis peptides,CSP）对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝（methyl thiazolyltetrazolium,MTT）法筛选出增殖活性最高的组分进行免疫调节作用研究。采用MTT细胞增殖实验、倒置显微镜观察、中性红吞噬实验、硝酸根还原酶法及酶联免疫吸附检测法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定CSP-5对RAW264.7巨噬细胞的生长与增殖、细胞形态、吞噬能力、一氧化氮（nitric oxide,NO）分泌能力及细胞因子白介素（interleukin,IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌能力的影响;同时还研究了CSP-5对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于3 kDa的CSP-5对RAW264.7细胞的生长与增殖具有明显的促进作用,且主要作用于G0/G1期,对细胞吞噬能力、NO分泌能力和细胞因子分泌能力的提高具有显著的促进效果;形态学观察结果显示经CSP-5作用后巨噬细胞体积变大且长出较多伪足。由此可知,CSP-5具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。     

兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr和Asp-Tyr- Asp-Asp对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

为了研究兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr（DDDY）、Asp-Tyr-Asp-Asp（DYDD）对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞抗炎活性。以合成的兜唇石斛发酵多肽为研究对象,采用噻唑蓝法筛选增殖活性最高的发酵多肽浓度,通过中性红吞噬实验和倒置显微镜观察发酵多肽对细胞的吞噬作用和分化形态变化,使用ELISA试剂盒测定细胞中NO及细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子TNF-α的分泌量。结果表明：12.5、25、50和100 μg/mL四组质量浓度的发酵多肽对细胞无毒性并有增殖作用;100 μg/mL的DDDY和DYDD和1 μg/mL的LPS处理可以激活细胞,增强细胞吞噬能力,相对吞噬率为2.05%、1.97%和2.19%;构建LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,发现两种发酵多肽处理有效抑制细胞分化,使细胞恢复正常形态;抑制细胞NO分泌能力,100 μg/mL DDDY和DYDD处理组的NO分泌能力降低到LPS组的0.41倍和0.49倍;并且对抑炎细胞因子分泌能力的提高和促炎细胞因子的降低有显著效果,均表现出剂量反应关系。由此可知,DDDY和DYDD对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应具有抗炎作用,为后面探究发酵多肽的炎症机制提供理论支持。     

阿里红多糖组分对RAW264.7巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)及其组分FOPS-a、FOPS-b对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。方法以小鼠RAW264.7巨噬细胞为研究对象,不同浓度(50~1600μg/m L)FOPS、FOPS-a、FOPS-b干预后,用cck-8试剂盒测定细胞活力,中性红法测定其吞噬活性,NO试剂盒测定NO的含量,ELISA试剂盒测定TNF-α和IL-1β释放能力。结果 FOPS、FOPS-a、FOPS-b在一定的浓度范围内可以提高RAW264.7巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、一氧化氮以及TNF-α、IL-1β的释放量。结论 FOPS、FOPS-a、FOPS-b一定浓度范围内具有良好的增强RAW264.7巨噬细胞免疫功能的作用。     

冠突散囊菌液态发酵过程中黑茶活性成分变化研究

实验研究了冠突散囊菌液态深层发酵过程中黑茶活性成分变化及其与冠突散囊菌生长的关系。结果表明,发酵液颜色逐渐加深,后期菌丝自溶而导致浑浊;发酵液pH值先降后升;茶多酚、儿茶素、氨基酸、蔗糖逐渐减少;茶黄素、茶红素、茶褐素在不同发酵时期含量呈动态变化。     

鹿胎肽对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

本实验从鹿胎中提取鹿胎肽(DFP),通过体外实验研究其对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用.采用噻唑蓝(MTT)实验检测超滤组分各肽段的增殖活性,筛选增殖活性高的组分.选用中性红吞噬实验、酶联免疫吸附检测法测定DFP对RAW264.7细胞吞噬指数、一氧化氮(NO)浓度及细胞因子如白介素-1β(interleukin...     

黑木耳多糖的结构组成及其免疫活性研究

目的:对高温蒸汽浸提法提取得到的黑木耳多糖进行结构解析,并探究其在免疫功能方面的活性。方法:通过气相色谱(GC)、红外光谱(FT-IR)、刚果红实验等对其结构进行分析,建立RAW264.7巨噬细胞的免疫模型以探究其免疫刺激活性。结果:黑木耳多糖主要由鼠李糖、甘露糖和葡萄糖组成,其具有和免疫活性相关的β-构型糖苷键和三股螺旋构象。黑木耳多糖可以促进巨噬细胞的增殖,增强巨噬细胞的吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮的分泌及细胞因子IL-6、TNF-α的释放。结论:黑木耳多糖具有与免疫相关的多种结构,对巨噬细胞具有强烈的刺激作用,在用作潜在的免疫刺激剂方面具有广阔的前景,黑木耳也可作为调节人类免疫力的功能性食品发挥巨大的应用价值。     

芋头水溶性多糖的分离纯化及其对巨噬细胞免疫活性功能的影响

为探究芋头水溶性多糖的免疫活性功能,本文用DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析对由水提醇沉的方法得到芋头水溶性粗多糖进行分离纯化,并利用Sephadex G-200凝胶柱层析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和傅里叶红外光谱分析其组成结构。再通过CCK-8试剂法、中性红吞噬实验、Griess法和酶联免疫吸附法测定其对巨噬细胞RAW264.7的增殖活性、吞噬能力以及分泌NO和细胞因子能力的影响。结果表明,得到的两种芋头水溶性多糖TPS₁和TPS₂纯度分别为87.4%和81.5%。TPS₁主要成分为含有甘露糖的α型中性多糖,TPS₂主要成分为含有硫酸基团的β型吡喃酸性多糖。细胞实验表明TPS₁和TPS₂在25~400 μg/mL浓度范围内对RAW264.7无毒害作用。其中,TPS₁能够显著提高该细胞的中性红吞噬能力(P<0.05),吞噬指数最大可达到空白对照组的2.07倍;TPS₂则具有更强的促进NO、细胞因子分泌的作用。TPS₁和TPS₂作用下的NO分泌量分别为空白对照组的3.07倍和4.57倍,TNF-α的分泌量为空白对照组的3.04倍和3.76倍,IL-1β的分泌量为空白对照组的1.37和1.54倍。以上结果表明,TPS₁和TPS₂均具有免疫调节的功能,有望进一步开发作为免疫调节剂添加到食品中。     

黑松露多糖分离纯化与抗炎活性研究

以黑松露为原料,通过水提醇沉法提取黑松露多糖。提取的黑松露多糖经过DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析柱分离得到两个块菌多糖组分,分别为TP1和TP2。检测TP1和TP2对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)增殖抑制作用、中性红吞噬能力影响。TP1进一步用葡聚糖凝胶层析柱纯化,得TP1-1并进行结构表征。结果表明:黑松露多糖两种组分TP1和TP2对RAW264.7细胞没有毒性作用,且都能显著增强RAW264.7细胞的中性红吞噬能力,但TP1的作用优于TP2。TP1-1的数均分子量为757910 u,其单糖组成为D-葡萄糖和D-甘露糖,比例分别为88.94%和1.19%。紫外光谱扫描结果显示块菌多糖TP1-1不含蛋白质和核酸。红外光谱分析结果表明,TP1-1具有吡喃环的结构,具有α-型糖苷键,含有甘露糖。     

大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物对RAW264.7细胞的免疫调节作用

目的：研究大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的免疫调节作用。方法：将小鼠RAW264.7细胞分为空白组、脂多糖组和样品组（大豆分离蛋白、杏鲍菇多糖、大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖混合物及共价结合物）,分别测定并比较各组细胞的巨噬细胞活力、中性红吞噬活性、一氧化氮释放量、细胞因子分泌及其mRNA表达水平。结果：当质量浓度在0～50?μg/mL范围时,大豆分离蛋白、杏鲍菇多糖、大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖混合物和大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物组4?种样品对细胞活力没有显著影响（P＞0.05）。当大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物的质量浓度达到100?μg/mL时,能够显著提高细胞的中性红吞噬活性、一氧化氮释放量以及肿瘤坏死因子-α、白细胞介素1β（interleukin 1β,IL-1β）和IL-6的含量及这3 种细胞因子的mRNA表达水平（P＜0.05）,表明大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物能显著提升小鼠巨噬细胞系RAW264.7的免疫调节能力,且存在剂量依赖效应。结论：本研究可对大豆分离蛋白进行糖基化改性,为谷物蛋白的深加工和开发利用提供一定的理论依据。     

重组黑芝免疫调节蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7向M1型分化的影响

真菌免疫调节蛋白具有免疫调节和抗肿瘤功效。巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中发挥重要的作用,M1型巨噬细胞具有很强的肿瘤杀伤能力和抗原递呈能力。本研究通过真菌免疫调节蛋白在体外对小鼠巨噬细胞RAW264.7经典活化M1型的影响探究其抗肿瘤的作用机制。利用重组黑芝免疫调节蛋白（recombinant Ganoderma atrum immunomodulatory protein,rFIP-gat）干预RAW264.7细胞,用中性红吞噬实验测定细胞吞噬能力,一氧化氮（nitric oxide,NO）检测试剂盒测定NO浓度,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的mRNA相对表达量。结果表明,rFIP-gat以剂量依赖的方式增强RAW264.7细胞的吞噬能力,促进其产生NO,并提高iNOS和TNF-α基因的转录。因此,rFIP-gat可能具有诱导RAW264.7细胞向M1型巨噬细胞分化的作用。     

芦蒿总黄酮的提取工艺优化及抗炎活性研究

目的:优化芦蒿总黄酮(Artemisia selengensis Turcz. total flavonoids,ATTF)提取的工艺条件,并研究其提取物抗炎活性。方法:采用响应面分析法中的中心组合设计方法(central composite design,CCD),建立以复合酶用量、超声温度、乙醇体积分数和液料比对ATTF得率影响的二次回归模型。采用脂多糖(LPS)诱导RAW264. 7巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)建立细胞炎症模型,加入不同浓度的ATTF提取物,用NO试剂盒测定NO的分泌量。结果:芦蒿总黄酮的最佳提取工艺条件为复合酶(纤维素酶与果胶酶)用量1.5%、超声温度50 ℃、乙醇体积分数70%、液料比40:1 (mL/g),在此条件下,ATTF的得率为13.09%±2.13%。ATTF提取物中、高剂量组能够明显抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的分泌。结论:该回归模型有极显著性,可以用来合理预测ATTF的得率;ATTF提取物可以通过抑制巨噬细胞NO的分泌而发挥抗炎作用。