超声波预处理酶解制备茶渣蛋白ACE抑制肽及其活性分析

血管紧张素转换酶（Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE）在血压调节中扮演重要角色,抑制其活性有利于维持血压平衡。食源性ACE抑制肽具有安全、易吸收的特点,受到广泛关注。本研究旨在从茶渣蛋白中获得一种具有高ACE抑制活性的新肽。以ACE抑制率为指标,通过对三种超声方式的比较,确定最佳超声方式;以单因素实验为基础,进行响应面优化确定最佳超声波预处理参数;酶解液分离纯化运用超滤的方法,并对截留分子量小于3 kDa组分进行稳定性分析。结果表明,超声波预处理为最佳处理方式,得最优条件为超声功率300 W、超声温度45 ℃、超声时间25 min。在最佳超声波预处理条件下,ACE抑制率为64.8%,相比于未超声组54.1%提高了10.7%;当截留分子量小于3 kDa时,ACE抑制肽的抑制率为82.3%,相比于原始酶解液提高了17.5%。当温度30 ℃升温至90 ℃,ACE抑制肽的抑制率从82.3%降低至78.3%,减少了4.3%;酸碱度、盐溶液变化其对ACE抑制率表现稳定;模拟消化环境中8 h后,ACE抑制率从82.3%降为62.3%。     

超声辅助酶解海带蛋白制备抗氧化肽及其活性研究

海带是一种食药两用的海生褐藻植物,营养丰富,其蛋白质含量高、氨基酸种类齐全、比例适当,是酶法制备生物活性肽的理想蛋白原料。实验以海带蛋白为原料,以DPPH自由基清除率为评价指标,采用单因素试验和响应面试验优化超声辅助酶解海带蛋白制备抗氧化肽工艺,探讨酶种类,超声时间、酶底比、酶解温度、pH和超声功率对制备抗氧化肽的影响,并采用Box-Behnken试验设计的响应面（response surface methodology,RSM）分析方法优化工艺。结果表明,中性蛋白酶为最佳酶,酶解海带蛋白制备抗氧化肽的最佳工艺条件为酶底比2.3%、超声时间91min、超声功率240、酶解温度44℃,所得的DPPH自由基清除率为84.25%。对所得抗氧化肽DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、还原能力、羟基自由基清除率测定,结果表明其具有较好的抗氧化活性。本实验为酶解海带蛋白制备抗氧化肽工艺优化及海带蛋白抗氧化肽在抗氧化保健食品中的开发应用提供了依据。     

酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的研究

为优化Alcalase蛋白酶酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,以DPPH自由基清除率作为指标,通过单因素试验考察酶解温度、底物浓度、酶与底物浓度比（[E]/[S]）、酶解pH和时间对DPPH自由基清除率的影响,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计,建立并分析各因素与清除率之间关系的数学模型;并对酸枣仁蛋白酶解产物的氨基酸组成及含量进行分析。结果表明:酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的最佳工艺条件为酶解温度51.2℃、酶解pH8.1、底物浓度4.7%,在此条件下DPPH自由基清除率的最大理论值为91.59%,该回归模型具有较好的预测性能,可用于指导生产实践。酸枣仁蛋白酶解产物共含有17种氨基酸,富含脯氨酸、甘氨酸和谷氨酸。      

酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的研究

为优化Alcalase蛋白酶酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,以DPPH自由基清除率作为指标,通过单因素试验考察酶解温度、底物浓度、酶与底物浓度比([E]/[S])、酶解pH和时间对DPPH自由基清除率的影响,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计,建立并分析各因素与清除率之间关系的数学模型;并对酸枣仁蛋白酶解产物的氨基酸组成及含量进行分析。结果表明:酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的最佳工艺条件为酶解温度51.2℃、酶解pH8.1、底物浓度4.7%,在此条件下DPPH自由基清除率的最大理论值为91.59%,该回归模型具有较好的预测性能,可用于指导生产实践。酸枣仁蛋白酶解产物共含有17种氨基酸,富含脯氨酸、甘氨酸和谷氨酸。     

酶法制备鸡血抗氧化肽及其抗氧化活性

以新鲜鸡血为原料,采用碱性蛋白酶酶解制备鸡血抗氧化肽。在单因素试验的基础上,以酶解液的还原能力为指标,研究pH、加酶量、酶解温度和酶解时间对鸡血酶解液抗氧化活性的影响,并运用Box-Behnken中心组合试验和响应面分析法优化制备鸡血抗氧化肽的酶解工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶酶解鸡血的最佳工艺条件为:p H 11.3,加酶量10 335 U/g,酶解温度46℃,酶解时间78 min。在该条件下,鸡血酶解物具有良好的抗氧化活性, 15.0mg/m L的鸡血酶解物DPPH自由基清除率和羟自由基的清除率分别为64.58%和99.2%。     

长白山榛子抗氧化肽制备及其活性研究

以长白山榛子分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶制备抗氧化肽,通过Box-Behnken中心组合试验确定最佳水解工艺条件为:酶解温度50℃、加酶量8 000 U/g、底物浓度5.0%、pH9.5。对该条件制备的抗氧化肽进行活性研究,结果显示随着浓度的升高,榛子抗氧化肽在4 mg/mL时对ABTS自由基和DPPH清除率均达到100%,8 mg/mL时对·OH清除率和总还原能力分别达到85.46%和0.859,12 mg/mL时,对Fe~(2+)螯合率达到99.3%。     

茶渣蛋白的提取、有限酶解及抗氧化性质研究

目的:茶渣含有丰富的蛋白质,本研究旨在利用废弃茶渣,开发一种新型、绿色、天然的抗氧化剂。方法:利用碱溶酸沉法提取茶渣蛋白,酶法水解后对茶渣蛋白多肽复合物的体外抗氧化性进行研究,并与传统的合成抗氧化剂VC、BHT进行抗氧化效果的比较。结果:茶渣蛋白提取的最佳工艺为固液比1:40(W/V),提取时间60min,碱浓度0.1mol/L,提取温度90℃,最佳提取次数1次,最佳沉淀pH范围3.0～4.0,在以上条件下茶渣蛋白的提取率达76%;复合蛋白酶水解茶渣蛋白的最佳酶解工艺条件为:酶解温度50℃、最适pH7.0、酶/底物6000U/g、底物质量分数1.5%、水解时间20min;有限酶解所得酶解度为9%。0.1mg/mL多肽复合物DPPH·自由基清除率为90.30%,1.0mg/mL多肽复合物羟自由基(·OH)清除率为65.18%。在亚油酸体系中,多肽复合物的抗氧化性高于维生素C,略低于BHT。结论:茶渣蛋白多肽复合物具有较高的安全性及抗氧化性,有取代合成抗氧化剂的潜力。     

大米蛋白酶解制备抗氧化肽的研究

以大米蛋白为研究对象,比较了几种酶对大米蛋白的水解作用效果,确定了一种合适的酶源——精制中性蛋白酶。同时通过单因素试验和响应面分析,确定了采用精制中性蛋白酶制备大米蛋自抗氧化肽的最佳酶解条件为:[S]5.0%、[E]/[S]2.0%、pH7.0、温度37.5℃、时间4.16 h,该条件下制备的大米蛋白抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为60.54%。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

响应面法优化酶解草菇蛋白制备抗氧化肽工艺

以草菇蛋白为原料,以DPPH自由基清除率为评价指标,采用单因素试验和响应面试验优化酶解工艺,探讨酶种类、酶解温度、酶解时间、底物浓度和酶浓度对抗氧化肽活性的影响,并采用Box-Behnken试验设计的响应面(response surfacemethodology,RSM)分析方法优化工艺.结果表明,木瓜蛋白酶为最佳酶,...     

三文鱼皮胶原肽的制备及其抗氧化活性的研究

目的:以三文鱼皮为原料,采用中性蛋白酶制备胶原肽,研究其抗氧化活性。方法:在单因素试验的基础上,利用正交试验优化工艺条件;用凝胶渗透色谱法测定酶解液分子质量分布;测定胶原肽成品清除2,2-二苯基-1-苦基肼(DPPH)自由基能力和还原力,评价其抗氧化活性。结果:最优酶解条件:酶量0.15%(以鱼皮计),鱼皮-水质量比1:3.0,酶解温度55℃,pH6.0,酶解时间6h。在此条件下,胶原肽的最高得率74.28%。酶解液中分子质量在180～1000Da之间的肽占88.08%。胶原肽成品具有较强的清除DPPH自由基能力,IC50为1.302mg/mL,同时也表现出较强的还原力,其中2.5mg/mL胶原肽的还原力是相同浓度BHT的0.69倍。结论:由本法所得胶原肽是以分子质量180～1000Da之间的寡肽(约2～8个氨基酸残基)为主的物质,具有较好的抗氧化活性。     

普洱茶茶渣中茶多糖的超声波辅助提取及其抗氧化性

为了解决普洱茶茶渣所带来的环保问题,本研究探讨了普洱茶茶渣中茶多糖超声波提取的优化工艺,并研究了最佳提取工艺条件下的茶多糖的抗氧化性。在单因素实验基础上进行响应面试验,制定了茶多糖超声波辅助提取工艺的4因素3水平响应面法试验设计方案。研究结果表明,普洱茶茶渣中茶多糖超声波提取的最佳试验因素组合为:浸提温度为100 ℃、浸提时间为120 min、料液比为1：30 g/mL,超声波功率为420 W。在此条件下,茶多糖得率为2.29%。该工艺所得茶多糖对羟基自由基以及超氧离子自由基均具有较强的清除能力:当茶多糖浓度为3.2 mg/mL时,茶多糖对羟基自由基的清除率达到最高,为60.37%;当茶多糖浓度为2.4 mg/mL时,茶多糖对羟基自由基的清除率达到最高,为53.91%。     

复合酶制备鱼蒸煮液水解肽及其抗氧化活性研究

目的:研究鳀鱼蒸煮液的最佳酶解工艺条件,并分析所制备水解肽的分子量分布和抗氧化特性。方法:以三氯乙酸氮溶解指数(Trichloroacetic acid-nitrogen soluble index,TCA-NSI)为酶解效率的评价指标,在单因素实验基础上,运用中心组合设计法优化水解肽的制备工艺,并对酶解产物的分子量分布及抗氧化活性进行分析。结果:鳀鱼蒸煮液的最佳酶解条件为酶解时间45 min、酶解温度54.5 ℃、酶解pH8.2、碱性蛋白酶与中性蛋白酶比例1:1,在此条件下TCA-NSI可达76.51%。所制备的水解肽中分子量低于1500 Da的多肽含量可达81.941%。水解肽对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除率的IC₅₀分别为2.45、1.37和3.45 mg/mL,表明其具有较强的抗氧化活性。结论:采用复合酶法可高效酶解鳀鱼蒸煮液,并获得具有较强抗氧化活性的水解肽,可为鳀鱼蒸煮液高值化利用及活性肽产品开发提供理论依据。     

鸿雁骨胶原多肽制备及其抗氧化活性研究

以鸿雁（Anser cygnoides）骨骼为原料,采用复合酶酶解制备雁骨胶原多肽,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化酶解工艺。以水解度为指标,确定木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶为最佳酶组成复合酶,质量比为1∶2∶1,最佳酶解工艺为：酶解温度50℃、pH 7.1、加酶量6 100 U/g、酶解时间5 h,此时水解度为26.34%。通过超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除能力测定,发现雁骨胶原多肽的抗氧化活性与胶原多肽质量浓度成正相关,当底物浓度为6 mg/mL时,超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除率分别为59.21%、51.82%。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和分子排阻色谱法测定复合酶酶解制备的雁骨胶原多肽分子量为851 Da～11 092 Da。氨基酸组成分析显示雁骨胶原多肽富含甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸及天冬氨酸等,这些特定的氨基酸与胶原多肽的抗氧化活性相关,为雁骨的开发利用提供参考。     

绿豆抗氧化肽的酶法制备及其抗氧化活性

为提高绿豆淀粉生产过程中产生的废弃物绿豆蛋白的资源利用率,研究了酶法制备绿豆抗氧化肽的最佳条件,并探究其抗氧化活性。通过选用不同蛋白酶及其复合酶,对绿豆蛋白进行水解,综合考虑反应时间、加酶量等因素,对酶解反应进行优化。通过体外抗氧化实验对水解制得的多肽溶液进行抗氧化能力检测,最终确立了最佳的反应条件,具体如下：选用中性蛋白酶进行酶解,底物质量分数3%,酶解时间3 h,加酶量质量分数2%,pH 7,温度50 ℃。按照该条件所制得的绿豆多肽溶液,质量浓度为5 mg/mL时,DPPH自由基清除率可达（91.58±2.44）%,同时还具有较强的还原能力。经凝胶层析柱分离纯化后得到5个分离组分,其中小分子肽段组分5的抗氧化能力最强,高于其他大分子肽段以及未分离多肽。     

鲤鱼肽的酶法制备工艺及其抗氧化性

以鲤鱼肉为原料,采用酶解技术制备鲤鱼抗氧化肽,研究其制备工艺和抗氧化肽的抗氧化性能。结果表明:鲤鱼抗氧化肽的制备工艺筛选条件为:碱性蛋白酶酶用量100U/mL、酶解时间5h、酶解温度50℃、pH8.5,此条件下鲤鱼肉蛋白肽的最高水解度为15.22%。采用Sephadex G-50对鲤鱼水解产物进行分离,水解产物分成分子质量小于5000D和分子质量大于5000D两个部分,采用亚油酸-硫氰酸钾法、DPPH自由基法和邻苯三酚法分别测定鲤鱼水解产物的抗亚油酸过氧化能力、DPPH自由基清除能力和超氧阴离子自由基清除能力,发现分子质量小于5000D的鲤鱼蛋白多肽是水解物中主要的抗氧化成分。     

高活性酪蛋白抗氧化肽的制备方法研究

采用木瓜蛋白酶对酪蛋白进行水解,得到抗氧化活性较好的酪蛋白水解物,并且水解物在木瓜蛋白酶作用下进行类蛋白反应制备出高活性酪蛋白抗氧化肽。第一步制备酪蛋白水解时酶添加量为500 U/g酪蛋白、温度45℃、底物浓度5%、反应时间2 h。第二步类蛋白反应的最优条件为：酶添加量为500 U/g水解物、温度30℃,底物浓度50%、作用时间5.5 h。毛细管电泳结果确认,类蛋白反应修饰后抗氧化肽的组成情况发生变化。抗氧化活性分析结果表明,类蛋白反应修饰后的酪蛋白抗氧化肽对两种自由基的清除能力显著提高。     

豆粕源抗氧化肽的制备、鉴定与活性表征

豆粕作为豆油加工的主要副产物,含有大豆中几乎全部蛋白质,具有广阔的应用前景.本研究中以大豆粕为原料,利用超声辅助酶解制备豆粕抗氧化肽,通过单因素和响应面实验,确定出最佳工艺参数为:酶解pH 8.0、底物质量分数9％、加酶量6 665.39 U/g、酶解温度50℃、酶解时间4.0 h、超声时间9 min、超声功率300 ...     

黄鳝鱼骨多肽制备及其抗氧化活性

以黄鳝鱼骨为原料,选用不同蛋白酶对其进行酶解,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,得到了具有较高抗氧化活性的黄鳝鱼骨多肽。通过单因素试验和响应面分析优化得到酶解黄鳝鱼骨制备多肽的最佳工艺条件为：选用木瓜蛋白酶,底物质量浓度40 mg/mL、酶添加量8 000 U/g、酶解温度59.2 ℃、pH 5.8、酶解时间4.1 h,在此条件下得到的黄鳝鱼骨多肽DPPH自由基清除率为90.85%。通过不同的体外抗氧化指标对黄鳝鱼骨多肽的抗氧化活性进行测定,结果发现黄鳝鱼骨多肽具有良好的抗氧化活性,随着多肽质量浓度的升高,其抗氧化活性不断增强,表现出良好的量效关系。