螺旋藻多糖提取新工艺的研究

采用双酶法提取螺旋藻多糖,脱蛋白效果接近100% .通过DEAE-Sepharose和Sephadex-G50纯化粗多糖,得到2个多糖组分.经测定组分1的单糖组成为D-葡葡糖、D-木糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸;组分2的单糖组成为:D-葡萄糖、D-甘露糖、L -鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸.     

金花茶多糖单一成分的化学结构特征解析

目的:对金花茶粗多糖经过离子交换柱层析和凝胶柱层析法得到分子质量为4.15×106u的多糖单一成分(TPS3-1)的化学结构特征进行分析,旨为金花茶多糖的构效关系研究提供依据。方法:采用构成糖分析、红外光谱(IR)分析、核磁共振(NMR)分析以及阶梯式部分酸水解分析等手段对其毛发区域的化学结构特征进行解析。结果:构成糖分析结果显示,TPS3-1中中性糖约为半乳糖醛酸的2倍,其中鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖与葡萄糖质量比为1:4.2:3.0:0.4,另外,62.58%的半乳糖醛酸残基以甲酯化形式存在。阶梯式部分酸水解分析结果显示,约有73%的中性糖降解至0.01mol/L三氟乙酸溶液中,推测该分子片段主要由葡萄聚糖支链、阿拉伯聚糖支链和半乳聚糖支链组成。约5%的中性糖降解于0.05mol/L三氟乙酸溶液中,推测该分子片段主要由葡萄糖或半乳糖与阿拉伯糖交替连接的寡糖支链组成。约13%的中性糖降解于0.5mol/L三氟乙酸溶液中,该分子片段主要由半乳糖和阿拉伯糖交替连接的寡糖支链以及零散分散于聚半乳糖醛酸链上的阿拉伯糖残基组成。结论:TPS3-1由高度酯化的半乳糖醛酸平滑区域和3类不同化学结构特征的毛发区域片段组成。     

黄芪多糖的相对分子量测定及单糖组成分析

采用热水提取、乙醇沉淀获得黄芪多糖。经离子交换树脂柱分离纯化,高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定多糖的相对分子质量。硫酸水解、NaOH中和后,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生。衍生物采用高效液相色谱法测定单糖组成。结果表明:黄芪经水提取醇沉,用Sevage法脱蛋白后,获得黄芪多糖(APS);DEAE-树脂柱层析获得3个黄芪多糖组分APS-1、APS-2和APS-3,相对分子质量分别为43161、281245和198128。柱前衍生高效液相色谱分析可知:APS-1由半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖组成,其物质的量比为1.0:24.8:2.5;APS-2由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成,其物质的量比为1.2:1.0:19.3:2.5:8.7;APS-3由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成,其物质的量比为1.0:2.1:4.8:1.4:3.6。     

海带中褐藻糖胶分级纯化及结构分析

为了纯化海带褐藻糖胶及研究褐藻糖胶结构,利用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱分离海带褐藻糖胶粗品,得到LP-1、LP-2、LP-3和LP-4 4个组分,通过Sephadex G-150凝胶柱对硫酸根含量较高组分LP-2、LP-3和LP-4进行进一步分离纯化及分子量测定,最终LP-2获得两种均一多糖LP-21和LP-22,其分子量分别为123和105 k Da,LP-3和LP-4为均一多糖,分子量分别为74和32 k Da。通过高效液相色谱法分析得率较高的组分(LP-21、LP-22和LP-3)单糖组成,用红外色谱法分析其结构。高效液相色谱结果表明,分级纯化后的组分(LP-21、LP-22和LP-3)主要由L-岩藻糖、D-半乳糖组成,还有少量D-葡萄糖、D-甘露糖、D-氨基葡萄糖、L-鼠李糖、D-木糖和D-葡萄糖醛酸。红外光谱分析表明,LP-21和LP-22的硫酸根主要结合在岩藻糖C_4位,LP-3硫酸根主要结合在岩藻糖C_2或C_3位上。     

金花茶多糖理化性质的研究

以金花茶浓缩液为试验材料,通过乙醇沉淀、透析等方法分离得到金花荼粗多糖TPS.采用Cellulose DE-52离子交换柱层析对金花茶粗多糖进行分离纯化,得到TPS0、TPS1、TPS2、TPS3、TPS4和TPS5 6个糖组分,并对各糖组分的理化性质进行初步分析.糖分析结果显示,金花茶粗多糖的半乳糖醛酸约为中性糖的一半,表明金花茶粗多糖中含有相当一部分果胶物质;TPS0、TPS1和TPS2 3个组分以中性糖为主,而TPS3、TPS4和TPS5 3个糖组分则含有较高比例的半乳糖醛酸,表明TPS0、TPS1和TPS2 3个糖组分为中性多糖,TPS3、TPS4和TPS5 3个糖组分为果胶物质.构成糖分析结果显示,金花茶粗多糖中主要的构成糖有葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和甘露糖,它们以不同比例分布于离子交换柱层析并分离纯化得到的各糖组分;TPS3、TPS4和TPS5 3个糖组分中均含有约11％的鼠李糖,说明这3个果胶组分很可能由以半乳糖醛酸与鼠李糖交替连接而成的果胶分子链的毛发区域和由n个半乳糖醛酸连接而成分子链的平滑区域组成.另外,以上3个糖组分中均含有10％左右的葡萄糖,这与文献报道的果胶物质中葡萄糖比例较低有较大差异.     

3种海参多糖的分离纯化及其化学组成差异分析

提取3种海参中的粗多糖,通过Q Sepharose Fast Flow(QFF)阴离子交换柱分离纯化,得到海参硫酸软骨素(SC-CHS)及海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)2个组分,并比较3种海参多糖的化学组成。对粗多糖、SC-CHS及SC-FUC分别采用高效凝胶排阻色谱法、柱前衍生高效液相色谱法及离子色谱法测定各海参多糖的相对分子质量、单糖组成及硫酸根含量。结果表明,随着海参种类的不同,3种海参SC-CHS相对分子质量之间无显著性差异,均为120kDa左右;各海参SC-FUC相对分子质量存在显著性差异,其中以海地瓜SC-FUC的相对分子质量最大。不同海参多糖葡萄糖醛酸(GlcUA)、氨基半乳糖(GalN)、半乳糖(Gal)及岩藻糖(Fuc)的物质的量比存在显著性差异。各海参SC-CHS的硫酸根含量在29%左右,各海参SC-FUC的硫酸根含量在26%左右。     

羊栖菜褐藻糖胶寡糖组分分析及抗凝血活性

为研究褐藻糖胶中具有抗凝血活性的寡糖组分,从羊栖菜中分离纯化得到褐藻糖胶（命名为SFF）,通过高效液相色谱法、高效凝胶渗透色谱法、化学法测定SFF的单糖组成、分子质量、理化性质。采用盐酸降解法降解SFF,并通过Bio-gel P4凝胶色谱柱对寡糖组分进行有效分离。采用活化部分凝血酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间评价寡糖组分的抗凝血活性,筛选高活性且低分子质量的寡糖组分,通过质谱法解析其结构,探究抗凝血SFF寡糖的结构特征。结果表明,SFF主要由岩藻糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖组成,物质的量比为67.11∶26.69∶2.54∶3.66。SFF分子质量较大为708 kDa,总糖、蛋白、硫酸基质量分数分别为56.44%、1.14%和26.22%。盐酸降解产物经凝胶色谱柱分离得到5 种寡糖组分P1～P5,这5 种寡糖组分均可延长活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）,其中P1、P2、P3对APTT的延长作用高于P4、P5,P3的延长作用尤为明显;对凝血酶时间和凝血酶原时间无延长作用。高抗凝血、低分子质量寡糖组分P3的质谱分析表明,P3是一种高纯度寡糖组分,主要由二硫酸化岩藻三糖组成。本实验筛选出一种具有良好抗凝血活性的高纯度寡糖组分,丰富了抗凝血褐藻糖胶寡糖的研究。     

石花菜多糖的分离纯化及单糖组成分析

以石花菜为原料,对石花菜多糖进行分离纯化,并对纯化后多糖组分的理化性质及单糖组成进行分析。利用复合酶法提取石花菜多糖并采用Sevage法脱蛋白,通过DEAE-52离子交换柱层析及Sephadex G-200凝胶柱层析对粗多糖进行分离纯化,按峰收集主要的多糖组分GAP1,对其总糖、蛋白质、糖醛酸及硫酸基质量分数进行测定,并采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)对多糖进行衍生化,通过高效液相色谱法测定其单糖组成。结果表明:石花菜粗多糖经柱层析后收集得到主要多糖组分GAP1,其总糖质量分数为92. 56%,糖醛酸质量分数为44. 53%,硫酸基质量分数为6. 92%,不含蛋白质; PMP柱前衍生高效液相色谱法测得GAP1主要由鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和L-岩藻糖6种单糖按照不同比例缩合而成,各单糖物质的量比为1. 00∶1. 00∶4. 45∶27. 31∶2. 27∶1. 88。     

枸杞多糖的超滤分级及理化性质的研究

探究了超滤法分离对枸杞多糖理化性质的影响。采用截留分子量不同的超滤膜分离枸杞多糖,检测各个组分的分子量范围、多糖组成、多糖形貌和热力学性质,探究超滤分级对枸杞多糖理化性质的影响。超滤方法可以实现枸杞多糖的分级分离,得到分子量大小分别为2.03×106(LBP-8),3.62×106(LBP3-1),3.10×104(LBP1-4)的多糖组分,主要有岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成,都不含有核糖,LBP1-4不含有鼠李糖,LBP-8不含鼠李糖和葡萄糖。其总糖含量、半乳糖醛酸含量、中性糖含量、蛋白质含量,多糖形貌和热力学性质均显示差异性。     

仙人掌多糖的分子量及单糖组成分析

对仙人掌多糖分子量及其单糖组成进行了研究。采用水提醇沉法提取多糖,DEAE-纤维素离子交换层析柱分离纯化,高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定多糖分子量,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化高效液相色谱法(HPLC)测定单糖组成。结果表明:此法最终获得三个多糖组分OPS-1、OPS-2、OPS-3,相对分子量分别为124712、197943、43083。OPS-1含葡萄糖、木糖、阿拉伯糖,摩尔比为1.5:12.9:1.0;OPS-2含甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖,摩尔比为1.0:15.6:1.0:2.4:8.2:41.6:36.3;OPS-3含鼠李糖、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖,摩尔比为1.0:2.4:1.4:1.4。为仙人掌多糖的进一步研究及开发提供了科学依据。     

Purification,preliminary structural characterization and in vitro antioxidant activity of polysaccharides from Acanthus ilicifolius

Crude Acanthus ilicifolius (A. ilicifolius) polysaccharides (CAIP) were obtained by hot water extraction and deproteinated. Two major polysaccharide fractions, the neutral A. ilicifolius polysaccharide (NAIP) and the acid A. ilicifolius polysaccharide B (AAIP-B), were isolated from CAIP by chromatography using DEAE-Sepharose Fast Flow and Sepharose CL-6B. The molecular weights (M_w) of NAIP and AAIP-B, determined by high performance gel-filtration chromatography (HPGFC), were 11,775 and 23,161 Da, respectively. AAIP-B contained 51.23% uronic acid, characteristic of a pectin-type hetero-polysaccharide. Analysis of the neutral monosaccharide composition indicated that NAIP contained high proportions of arabinose, galactose and glucose. However, AAIP-B was mainly composed of rhamnose, arabinose and galactose. Their structure properties were confirmed by FT-IR.     

菊花蜂花粉多糖的分离纯化及抗肿瘤活性研究

本文对蜂花粉多糖进行了分离纯化和组成分析,并初步分析了各多糖级分对肿瘤细胞增殖的抑制作用。选取菊花蜂花粉为原料,通过水提、醇沉得到总多糖WDPP,再通过离子交换层析得到一个中性糖（WDPP-N）和两个酸性糖级分（WDPP-1,WDPP-2）。通过高效液相色谱法测定各级分的单糖组成,通过对肿瘤细胞增殖作用的影响探讨各级分的抗肿瘤活性。结果表明,WDPP-N主要由半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,比例为30.3∶31.6∶32.7;WDPP-1和WDPP-2都主要由半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖组成,还含有少量的鼠李糖、葡萄糖等。WDPP-N和WDPP-2浓度为5 mg/m L时对肿瘤细胞HCT116增殖的抑制率分别为38%和32%,对HT-29增殖的抑制率为42%和47%,WDPP-1对肿瘤细胞增殖作用的影响不显著（p>0.05）,而WDPP在浓度为5 mg/m L时对HCT116和HT-29肿瘤细胞增殖的抑制率分别为61%和81%。因此,菊花蜂花粉总多糖WDPP抑制肿瘤细胞增殖的活性优于中性糖和酸性糖。      

银杏叶多糖分离纯化、结构鉴定及抗氧化活性研究

目的:分离纯化银杏叶多糖(GBLP)并对其结构进行表征及抗氧化活性研究。方法:超声辅助提取制备银杏叶粗多糖,经精制除杂和阴离子交换柱分离获得多糖级分,采用高效凝胶过滤色谱(HPGFC)、气相色谱法(GC)分析相对分子质量和单糖组成;采用体外抗氧化方法评价银杏叶多糖抗氧化活性。结果:GBLP经分离后获得三个级分GBLPⅠ、GBLPⅡ、GBLPⅢ,其相对分子质量(Mw)分别为41861、361352、637533。GBLPⅠ由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成;GBLPⅡ和GBLPⅢ由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖组成,但其摩尔比不同。体外抗氧化实验表明GBLPⅢ对羟自由基的清除能力最强,其次为GBLPⅡ、GBLPⅠ、GBLP;而GBLPⅡ和GBLPⅢ对超氧阴离子清除能力相对较好,其次为GBLPⅠ、GBLP。结论:银杏叶多糖各级分的单糖组成比例、相对分子质量有差异;对羟自由基的清除作用强于对超氧阴离子的清除作用,对羟自由基的清除作用差异可能与Mw及结构相关。      

一种姬松茸多糖的纯度鉴定与单糖组成分析

目的:鉴定一种经分离纯化得到的姬松茸多糖的纯度,并分析其单糖组成。方法:采用苯酚-硫酸法测定姬松茸多糖总糖含量,结合凝胶过滤法、高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法和紫外可见吸收光谱法鉴定其纯度,运用高效液相色谱-柱前衍生化法对其单糖组成进行定性、定量分析。结果:所得姬松茸多糖样品的多糖含量为99.50%±2.5%(W/W,以葡萄糖计),且不含核酸、蛋白质等杂质,纯度较高,其单糖组成为葡萄糖、半乳糖、甘露糖(含量比分别为99.2%、0.6%、0.2%)。结论:所得姬松茸多糖是一种纯度较高、葡萄糖为主要单糖的均一多糖。     

芒果多糖的纯化与光谱分析

采用热水浸提、乙醇沉淀法得到芒果多糖粗品;采用苯酚-硫酸法测其多糖含量为(46.3±1.75)mg/g。DEAE-25纤维素和Sephadex G-75凝胶层析柱进一步分离纯化得到白色絮状多糖;高效阴离子交换色谱法分析其单糖组成。结果表明：该多糖是由鼠李糖、半乳糖和葡萄糖等单糖组成,其含量分别为(6.3±1.40)、(11.9±1.76)mg/g和(13.8±1.52)mg/g。红外光谱分析表明具有明显的多糖特征吸收峰,该多糖结构主要为β-糖苷键连接的吡喃型葡聚糖。     

灵芝在牛蒡固体培养基中发酵工艺优化及菌丝多糖的体外抗氧化活性

为提升牛蒡废弃物的利用价值,以低品质牛蒡作为营养基质,精选优良灵芝菌种作为发酵菌株,研究牛蒡固体发酵灵芝产多糖工艺及其体外抗氧化活性。采用单因素试验和响应面优化法确定了装瓶量、粉碎程度、液固比等工艺条件;利用水提醇沉法提取牛蒡固体发酵灵芝菌丝中多糖,并用苯酚-硫酸法测定其总多糖含量;多糖经脱蛋白、透析和脱色后,经红外光谱分析多糖特征,高效液相色谱测定其单糖组成;体外实验检测多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除能力。结果表明：最佳发酵条件为液固比0.4 mL/g 、装瓶量0.2 g/mL、粉碎程度过6 目筛,在此条件下实际获得的多糖含量为24.85 mg/g;红外光谱分析表明所获得的菌丝多糖具有糖类物质的特征吸收峰;高效液相色谱检测其单糖组成为甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖等,其中甘露糖含量最高,是葡萄糖的7.6 倍;抗氧化性检测表明随着牛蒡固体发酵灵芝菌丝多糖质量浓度的增加,其对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基清除能力逐渐增强,且清除率均大于70%,说明多糖具有较好的体外抗氧化活性。     

香薷多糖的乙醇分级纯化及其性质

采用热水浸提法从香薷中得到多糖提取物,然后采用乙醇分级沉淀法纯化香薷多糖,收集得到乙醇体积分数为20%、30%、40%、50%、60%、70% 条件下析出的多糖沉淀物。之后经Sevag 法脱除多糖中的游离蛋白,得到纯化后的6 个香薷多糖组分HMP-1、HMP-2、HMP-3、HMP-4、HMP-5 和HMP-6。应用紫外和红外光谱检测HMP-1、HMP-2、HMP-3、HMP-4、HMP-5 和HMP-6 的光谱性质,测定糖含量、可溶性蛋白质含量和糖醛酸含量,并用气相色谱法测定单糖组成。结果表明：HMP-1、HMP-2、HMP-3、HMP-4、HMP-5和HMP-6 均为酸性多糖,蛋白含量较高。HMP-1 和HMP-2 主要含有阿拉伯糖和葡萄糖,HMP-3 主要含有阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和核糖,HMP-4 主要含有阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖,HMP-5 和HMP-6 主要含有阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖。此外,6 个多糖组分均含有少量的鼠李糖、木糖,但单糖间物质的量比相差较大。     

茶叶酸性多糖的分离、纯化及其理化性质研究

采用水提醇沉法从采自江西婺源的粗老绿茶中提取茶叶多糖,通过Sevag法脱蛋白得到精制茶叶多糖,应用高效凝胶渗透色谱法（high performance gel permeation chromatography,HPGPC）分析茶叶多糖纯度并测定其分子质量,进一步测定茶叶多糖的糖含量、蛋白质含量、单糖组成、糖醛酸组成等理化指标,同时对其进行紫外和红外光谱扫描,考察其光谱性质。结果表明：该茶叶多糖组分为均一性高的酸性多糖组分,分子质量约为289 734 D,糖含量为55.1%,蛋白质含量为1.8%。该茶叶多糖酸性组分主要由鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其物质的量比为1.26∶3.18∶4.08∶1.00∶1.52∶3.92,该茶叶多糖酸性组分中含有大量半乳糖醛酸,含量为33.5%。     

双孢菇菇柄多糖柱层析纯化及单糖组成

以双孢菇菇柄为试材,首先对经超声提取得到的菇柄多糖进行柱层析分离纯化,然后对柱层析得到的多糖组分别采用紫外光谱和柱层析进行纯度分析,并进行红外光谱分析和单糖组成分析。结果表明,脱蛋白双孢菇菇柄多糖经DEAE Sephadex A-25柱层析纯化共得到4个组分,收集其中两个较多的组分(蒸馏水和0.1 mol/L NaCl洗脱组分),经紫外光谱扫描无核酸和蛋白质,经Sephadex G-200柱层析鉴定均为单一峰。所得两种多糖组分经FT-IR红外光谱分析,均含有多糖特征吸收峰,且均为吡喃糖环β-异构体的多糖。菇柄蒸馏水洗脱多糖组分由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖组成,0.1 mol/L NaCl洗脱组分是由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖组成。