离子液体催化合成新型荧光衍生剂及其在β-受体激动剂检测中的应用与研究

以咪唑类离子液体为催化剂合成荧光衍生剂2-(4-磺酰氯基苯基)苯并咪唑,建立肉制品中β-受体激动剂的提取、净化等前处理方法,并利用该荧光衍生剂对四种β-受体激动剂进行荧光衍生反应,优化各种衍生条件。最终建立基于该荧光衍生剂针对肉制品中β-受体激动剂的高效液相色谱-荧光检测方法。该衍生剂在p H值为10. 0±0. 5,85℃环境下与含有苯乙醇胺结构的β-受体激动剂中的仲胺基基团能快速的生成高荧光强度的荧光衍生产物,目标物回收率为86%~91%,相对标准偏差(RSD)为1. 26%~2. 54%,检出限接近0. 3ng/g;定量限1. 0ng/g。表明所建立的样品前处理方法、衍生方法及检测方法可用于肉制品中β-受体激动剂的检测。     

毛细管电泳-色谱联用法(CEC-LIF)检测运动营养品中α2-受体激动剂

建立一种毛细管电泳-色谱联用法检测运动营养品中赛拉嗪、右美托咪啶、胍那苄等3种α₂-受体激动剂的分析方法。本研究结合激光诱导荧光技术,以1.0 mmol/L的4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并呋咱为衍生剂,在pH8.9、衍生温度60℃、衍生反应30 min。所得衍生产物以乙腈-磷酸钾(10 mmol/L)(55:45,v/v)为流动相,经苯基毛细管色谱填充柱进行分离后检测。结果表明,3种α₂-受体激动剂能在1.0~20.0 ng/mL浓度范围内线性良好,相关系数R²为0.995~0.999,检出限均为5.0 μg/kg,定量限均为16.0 μg/kg,加标回收率达到80.5%~93.4%。本方法前处理操作简单、灵敏,为运动营养品中α₂-受体激动剂分离分析提供了新手段。     

液相色谱-串联质谱法检测猪尿中26种β2-受体 激动剂类药物残留

目的 建立了一种猪尿中26种β2-受体激动剂兽药残留的液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法。方法 样品经β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶酶解后,用正丁醇及甲基叔丁基醚混合液萃取,过MCX固相萃取柱净化。采用0.1%甲酸(A) 和0.1%甲酸-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,质谱(ESI )采用多离子检测模式(MRM)对β2-受体激动剂的定量离子和定性离子进行监测。结果本方法在15 min内完成26种目标化合物的分离分析。26种β2-受体激动剂在5、10和20μg/L添加水平的回收率为65.0%~105.3%,相对标准偏差小于11.5%（n=6）,方法检出限为0.04 μg/ kg ~1.02 μg/kg。结论 该方法快速、准确、灵敏,适合测定猪尿中的β2-受体激动剂类药物残留。     

膜透析/高效液相色谱-串联质谱法测定畜产品中9种β-受体激动剂残留

建立了膜透析/高效液相色谱-串联质谱法(MD/HPLC-MS/MS)检测畜产品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等9种β-受体激动剂的新方法。样品经乙酸铵缓冲液提取和β-葡萄糖苷醛甙酶/芳基硫酸酯酶酶解,采用标准再生纤维素膜(RC,截留分子量MWCO:1000D)透析净化,β-受体激动剂通过膜渗入透析液中,透析液用环已烷-乙酸乙酯(4:1)萃取,经Waters Xbridge C18色谱柱进行分离,以0.1%甲酸水和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式进行检测,外标法定量。结果表明,9种β-受体激动剂在0.5~10μg/kg浓度范围内线性关系良好。方法的定量限为0.5μg/kg,在0.5、1.0、2.5μg/kg 3个添加水平的回收率为72.5%~92.6%,相对标准偏差(n=6)在4.1%~12.7%之间。该方法采用膜透析技术进行净化,无需使用昂贵的固相萃取柱,适用于畜产品中9种β-受体激动剂的经济、高灵敏度的分析检测。     

同时检测动物性食品中6种β-受体激动剂的化学发光免疫分析方法的建立

建立同时测定动物性食品中6种β-受体激动剂(克伦特罗、西马特罗、溴布特罗、班布特罗、马布特罗和西布特罗)残留的化学发光免疫分析方法。结果表明:6种β-受体激动剂在猪肉样品中的检测限(limit of detection,LOD)分别为0.48、1.96、0.41、0.29、0.42、0.87μg/kg,在羊肉样品中的LOD分别为0.37、1.78、0.43、0.38、0.31、0.96μg/kg;样本的平均添加回收率为66.7%~106.4%,且批内、批间相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于15%。在最优条件下,西马特罗的50%抑制质量浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为0.254μg/L,克伦特罗、溴布特罗、班布特罗、马布特罗和西布特罗与西马特罗的交叉反应率分别为438.0%、470.0%、434.0%、561.0%和198.0%。同时,比较化学发光免疫分析方法和液相色谱-串联质谱(liquid chromatographic-tandem mass spectrometric,LC-MS/MS)法的检测结果,表明化学发光免疫分析方法具有较高的准确度和可靠性。因此,化学发光免疫分析方法能够实现动物性食品中多种β-受体激动剂药物残留的快速检测,且灵敏度较高。     

HPLC-q/LTQ-MS法测定肉及肉制品中10种β-受体激动剂

建立基质分散固相萃取-高效液相色谱-四极杆串联线性离子阱质谱法快速测定肉和肉制品中的克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、妥布特罗、氯丙那林、喷布特罗、西马特罗、非诺特罗以及苯乙醇胺A 10种β-受体激动剂。猪肉、肠衣和午餐肉中的β-受体激动剂经乙腈提取后,采用基质分散固相萃取净化,内标法定量。方法按照多反应监测、信息相关采集、增强离子扫描,结合10种β-受体激动剂标准的子离子谱库检索进行分析,可对试样中10种β-受体激动剂同时进行定性、定量测定。结果表明,克仑特罗在0.05~0.5 ng/mL质量浓度范围内,其余9种药物残留在0.5~5 ng/mL质量浓度范围内线性良好,相关系数(r2)均大于0.99。克仑特罗定量限为0.05μg/kg,其余9种药物定量限为0.5μg/kg。10种β-受体激动剂在猪肉、肠衣和午餐肉中平均回收率分别在85.6%~118.4%、85.6%~119.2%、80.4%~118.4%之间(n=6),相对标准偏差在1.47%~14.4%、2.45%~15.4%、1.04%~12.5%之间(n=6)。方法可对猪肉、肠衣、午餐肉等肉和肉制品中10种β-受体激动剂药物的定性同时进行定量测定。     

高效液相色谱-串联质谱法测定卤肉中3种β-受体激动剂残留

建立卤肉中3种β-受体激动剂(克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇)残留检测的高效液相色谱-串联质谱方法。样品经β-盐酸葡萄糖醛甙酶/芳基硫酯酶水解,MCX固相萃取柱净化,以乙腈-0.1%甲酸溶液作为流动相洗脱,采用电喷雾离子源,多反应监测方式进行采集,外标法定量。结果表明：3种β-受体激动剂在1～100ng/mL质量浓度范围内呈现良好的线性关系,R2均大于0.99,方法检测限均为0.25μg/kg,从0.5、1μg/kg和2μg/kg添加水平检测结果可以看出,方法平均回收率为80%～120%,相对标准偏差为1.0%～10.0%。     

在线固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉和羊肉中10 种β-受体激动剂

建立在线固相萃取-高效液相色谱-串联质谱检测猪肉及羊肉中10 种β-受体激动剂的全自动分析方法。样品 于37 ℃酶解16 h后,经MCX在线固相萃取小柱净化,采用XBridge C18色谱柱分离,以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动 相进行梯度洗脱,在电喷雾电离正离子模式下,采用多反应监测模式检测,内标法定量。结果表明：10 种β-受体 激动剂在0.01～10.00 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999 0;检出限为0.004～0.040 μg/kg,定量限为 0.02～0.20 μg/kg;方法回收率为76.5%～107.7%,相对标准偏差小于10%。该方法分析速度快、灵敏度高,可用于 猪肉和羊肉中10 种β-受体激动剂的定性及定量分析。     

超高效液相色谱-串联质谱方法同时测定猪肉中7种β-受体激动剂残留量

建立同时测定猪肉中苯乙醇胺A、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、西马特罗和氯丙那林7种β-受体激动剂残留量的超高效液相色谱-串联质谱方法（UPLC-MS/MS）。样品采用1%甲酸-乙腈一次性振荡提取,用β-受体激动剂专用固相萃取柱净化、多反应监测（MRM）、内标法定量。结果表明：7种β-受体激动剂检出限均为0.2μg/kg,定量限为0.5μg/kg。空白猪肉中添加1、2、10μg/kg水平,7种β-受体激动剂总体平均回收率72.2%～116.9%,总体相对偏差均小于2.5%。该方法不需要酶解,分析速度快,灵敏度高,重现性好,各项技术指标均满足国内外相关法规要求,可用于猪肉中7种β-受体激动剂残留的快速检测。     

QuEChERS EMR-Lipid-LC/MS/MS测定8种β-受体激动剂

建立以QuEChERSEMR-Lipid为前处理测定动物源性食品中8种β-受体激动剂的LC-MS/MS方法。样品经粉碎混匀后加入pH为5.2乙酸-乙酸铵溶液,以β-盐酸葡萄糖醛酸苷酶/芳基硫酸酯酶酶解,酶解液经QuEChERSEMR-Lipid净化后,取乙腈层与0.1%的甲酸水溶液混合上LC-MS/MS进行分析。8种β-受体激动剂在测定浓度范围内线性关系良好,各组分相关系数R~20.998,加标回收率范围79.1%~94.8%,方法精密度范围5.4%~9.4%,测定各组分β-受体激动剂检出限范围0.2μg/kg~0.4μg/kg,定量限范围0.5μg/kg~1.0μg/kg。     

高效液相色谱-串联质谱法测定动物尿液中23种β-受体激动剂

目的 建立一种动物尿液中23种β-受体激动剂残留的液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。方法 样品经酸解释放结合态药物,混合型阳离子(MCX)固相萃取柱富集净化,5%氨水甲醇洗脱,浓缩。采用乙腈和5 mmol/L乙酸胺-0.2%甲酸溶液作为流动相进行梯度洗脱, 质谱(ESI_⁺)采用多反应监测模式(MRM)对β-受体激动剂的定量离子和定性离子进行监测。结果 本方法在10 min内完成23种兴奋剂的有效分离。在猪尿液、牛尿液、羊尿液中0.2、0.4和2 μg/L添加水平下,23种β-受体激动剂的平均回收率为65.7%~112.6%, 相对标准偏差小于16.5%(n=6), 方法定量限为0.2 μg/L, 检出限为0.1 μg/L。结论 该方法高效、准确, 适合测定动物尿液中23种受体激动剂药物残留,并为相关标准制修订提供参考。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定清咽类保健食品中14种β2-受体激动剂非法添加物

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定清咽类保健食品中非法添加的14种β_2-受体激动剂含量的分析方法。方法样品经乙酸钠-甲醇混合溶液提取,用氢氧化钠溶液调节pH值,待测物由二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂液液萃取,经阳离子固相萃取小柱富集、净化后,采用C_(18)色谱柱分离,以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用正离子多反应离子检测模式对14种β_2-受体激动剂的含量进行检测,内标法定量。结果 14种β_2-受体激动剂在0.5～20ng/mL(1.0～40μg/kg)范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99。各待测物方法定量限为1.0μg/kg。加标回收率为75.9%～110.9%,相对标准偏差为1.9%～9.7%。结论该方法准确、灵敏,适用于清咽类保健食品中14种β_2-受体激动剂的测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定猪肉中 20种β-受体激动剂

目的建立猪肉中溴氯布特罗、非诺特罗、妥洛特罗、苯乙醇胺A等20种β-受体激动剂的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法猪肉样品经均质混匀并进行酶解和净化后,选择C_(18)柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱。正离子模式下,以克伦特罗-D_9为同位素内标,采用多反应监测模式测定。结果 20种目标物在13 min内完成分离。除多巴胺外,其余19种β-受体激动剂在空白基质中的线性范围为0.05~10μg/kg,检出限为0.05μg/kg,相关系数大于0.998。在空白猪肉样品中添加浓度为0.5、1.0、5.0μg/kg的待测物质时,固相萃取净化法的回收率为82.3%~102.1%,相对标准偏差为3.4%~7.2%。结论本方法准确性高、操作简便,可应用于猪肉中多种β-受体激动剂的定量检测。     

固相萃取-LC-MS/MS同时测定牛奶中7种β_2-受体激动剂

建立了牛奶中7种β2-受体激动剂残留量超高效液相色谱/串联质谱的分析方法。牛奶样品经40%甲醇溶液提取、乙酸锌溶液蛋白沉淀、HLB固相萃取柱净化后,以C_18为分析色谱柱,甲醇-0.1%甲酸溶液作为流动相进行梯度洗脱分离,采用多反应监测(MRM)模式测定。结果表明,7种β_2-受体激动剂在0.04μg/kg~4μg/kg的浓度范围内呈线性,其相关系数r~2大于0.998,定量限在0.01μg/kg~0.04μg/kg,加标回收率为66.8%~99.2%,相对标准偏差(RSD)范围为2.0%~15.8%。本方法灵敏度高,准确度好,对实际样品进行了测试分析,均获得了满意的结果。     

固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定食品中β-受体激动剂

目的建立可靠的预处理方法,应用于高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法检测猪肉、猪肝中β-受体激动剂。方法动物组织经过β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶酶解,酶解液用固相萃取柱净化,采用Waters BEH C_(18)柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),梯度洗脱进行HPLC-MS/MS检测,试验中对固相萃取条件进行优化。结果两种β-受体激动剂在0.5~10.0μg/L范围内响应值与浓度呈良好线性关系,相关系数均大于0.999,采用MCX和SCX两种固相萃取柱净化样品,加标回收率分别为81.4%~121.0%和97.0%~113.4%。沙丁胺醇和莱克多巴胺的检出限分别为0.13、0.14μg/kg,在不同基质浓度下的相对标准偏差(RSD)分别为5.9%~16.2%和6.4%~20.2%。结论采用优化后的固相萃取方法通过HPLC-MS/MS检测,精密度和回收率较为理想,可用于动物源性食品中β-受体激动剂残留的检测。     

超高效液相色谱串联质谱法测定全蛋粉中的双酚A和双酚S

建立超高效液相色谱-串联质谱测定全蛋粉中双酚A和双酚S的检测方法。全蛋粉经水复溶后经乙腈提取,提取液使用分散系固相萃取-基质增强脂质去除产品进行除脂,使用Oasis PRiME HLB小柱进一步净化,使用超高效液相串联质谱测定,负离子多反应监测(MRM)模式测定,内标法定量。结果显示:双酚A在1~50 μg/kg范围内呈线性,相关系数为0.9991,加标回收率为98.8%~105.0%,日内和日间相对标准偏差分别为3.84%~8.58%和5.65%~8.74%,检出限为0.3 μg/kg,定量限为1.0 μg/kg;双酚S在0.4~20 μg/kg范围内呈线性,相关系数为0.9995,加标回收率为98.5%~102.5%,日内和日间相对标准偏差分别为3.01%~7.86%和3.18%~7.03%,检出限为0.1 μg/kg,定量限为0.3 μg/kg。实际样品测定结果分别为:双酚A 2.4~3.8 μg/kg;双酚S 0.48~0.82 μg/kg。本方法前处理简单、高灵敏度适用于全蛋粉中双酚A和双酚S的日常测定。     

超高压液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法测定猪肉食品中8种β-受体激动剂

目的 采用超高压液相色谱-电喷雾串连四极杆质谱同时测定猪肉食品中8种β-受体激动剂残留。方法 试样中β-受体激动剂残留经酶解后超声提取, 低温离心后, 上清液用MCX固相萃取柱净化, Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱分离, 以甲醇?0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱, 最后用液相色谱-质谱/质谱进行测定。结果 该方法的平均回收率为75.6%~118.7%, 相对标准偏差小于25.0%, 方法的定量限为0.1~0.2 μg/kg。结论 该方法操作简单, 灵敏度高, 重现性良好, 适用于猪肉食品中β-受体激动剂残留的定性与定量检测。     

液相色谱-串联质谱法检测奶制品中9种 β-受体阻断剂药物残留量

目的 建立同时检测奶制品(牛奶、奶粉、奶酪)中9 种β-受体阻断剂(β-blockers, BBS)残留的液相色谱-串联质谱方法。方法 混合均匀的试样经β-葡糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶水解, 乙腈提取, 硅藻土与BondElut分散固相萃取填料双重快速净化后, 利用液相色谱-串联质谱法进行定性定量分析。结果 9 种BBs在0.1~20.0 μg/L线性范围内线性关系良好(r≥0.995); 定量限(limit of quantity, LOQ, S/N≥10), 均达到0.5 μg/kg; 3 个添加水平(0.5、1.0和5.0 μg/kg)下的回收率为89.5%~112.5%; 相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为4.2%~11.5%。结论 该方法快速、准确、灵敏, 可用于奶制品样品中多种BBs残留的同时有效测定。     

QuEChERS前处理结合HPLC-MS/MS同时测定原料乳中30种兽药残留

建立快速、简便、低价、有效、稳定、安全（quick、easy、cheap、effective、rugged、safe,QuEChERS）前处理结合高效液相色谱-串联质谱技术同时测定原料乳中β-激动剂、喹诺酮和磺胺类30种兽药残留的分析方法。样品经酸化乙腈溶液和乙二胺四乙酸-Mcllvaine缓冲液提取,盐析后的乙腈相用十八烷基硅烷和N-丙基乙二胺净化剂分散固相萃取净化,在电喷雾正离子多反应监测模式下进行测定。30种兽药在0.5 μg/kg～100.0 μg/kg线性关系良好,相关系数（r）>0.99。方法检出限和定量限分别为 0.10 μg/kg～1.21 μg/kg 和 0.28 μg/kg～4.05 μg/kg。在 5.0、10.0、20.0 μg/kg 加标水平时,回收率为71.1%～94.8%,相对标准偏差均低于12.2%。该方法准确可靠、灵敏度高,可用于原料乳中β-激动剂、喹诺酮和磺胺类兽药残留的定量分析。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测动物血液中6种β-受体激动剂类药物残留

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法检测动物血液样品中6种β-受体激动剂类药物残留的分析方法。方法 样品经乙腈提取, 经Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱分离, 以乙腈?0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱, 电喷雾正离子(electrospray ionization, ESI+)模式电离, 多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)扫描模式检测。结果 6种化合物在0.2~50 ng/mL范围内均呈现良好的线性关系, 相关系数(r)均大于0.990。检出限为0.04~0.11 μg/kg, 猪血液样品中3个浓度添加水平平均回收率为86.2%~99.2%, 相对标准偏差为3.2%~8.4%。结论 本方法操作简便, 回收率高, 适用于动物血液样品中6种β-受体激动剂类药物同时定性、定量分析。