液相色谱-串联质谱法检测中兽药中金刚烷胺和金刚乙胺含量的不确定度评估

目的 评估液相色谱-串联质谱法检测中兽药中金刚烷胺和金刚乙胺含量的不确定度。方法 根据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》的相关规定, 对液相色谱-串联质谱法检测中兽药(白头翁散、苍术香连散、银翘散)中金刚烷胺和金刚乙胺含量测定的不确定度进行评定。结果 中兽药中金刚烷胺和金刚乙胺的含量分别为1.024 mg/kg、1.056 mg/kg时, 取k=2, 测定结果的相对扩展不确定度分别为0.07463、 0.07245 mg/kg, 结果分别表示为(1.024±0.07463)、(1.056±0.07245) mg/kg。结论 影响测量结果的不确定度主要来源为液相色谱-串联质谱仪的灵敏度、天平的精密度、操作的规范性。     

高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中6种抗病毒药物残留量

目的建立动物源性食品中金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、奥司他韦、吗啉胍、阿昔洛韦的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。方法待测样品中的金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、奥司他韦、吗啉胍、阿昔洛韦在醋酸盐缓冲液中经Qu ECh ERS提取、净化,采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),梯度洗脱,在正离子模式下检测。结果 6种抗病毒药物在0.5~100μg/kg范围内线性关系良好,相关系数r0.992。在猪肉、鸡肉、鱼肉和牛奶中金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚的检出限为0.1μg/kg,奥司他韦为0.3μg/kg,吗啉胍和阿昔洛韦为0.5μg/kg,各化合物的回收率均在50%以上,精密度(以相对标准偏差表示)在0.8%~5.7%之间(n=6)。结论本方法具有前处理简单、快速,灵敏度高等优点,可用于禽畜肉中抗病毒类药物残留的定量检测。     

间接竞争化学发光酶联免疫分析方法检测禽肉中金刚烷胺和氯霉素残留

为快速检测禽肉中残留的金刚烷胺和氯霉素,结合高效的前处理方法,建立检测金刚烷胺和氯霉素的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法（indirect competitive chemiluminescence enzyme-linked immunosorbent assay,ic-CLEIA）。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、竞争时间、酶标二抗稀释倍数进行优化。结果表明：金刚烷胺的IC50为0.33 μg/L,线性范围为0.06～1.77 μg/L;氯霉素的IC50为0.039 μg/L,线性范围为0.010～0.179 μg/L。样品经乙酸乙酯和碳酸钾溶液提取后,取上清液用氮气吹干,净化后进行检测。金刚烷胺和氯霉素的加标回收率分别为92.55%～105.14%和92.00%～112.50%,变异系数均低于10.48%,且实际样品检测结果与仪器方法相关性良好（R2＞0.98）,表明建立的ic-CLEIA方法具有良好的准确度和可靠性。该方法将为涉及多种药物残留的免疫快速检测方法及相应的前处理技术提供技术依据。     

EMR-Lipid固相萃取结合液相色谱串联质谱法快速测定鸡蛋中金刚烷胺和金刚乙胺残留量

采用EMR-Lipid增强型脂质去除固相萃取结合高效液相色谱串联质谱建立了快速测定鸡蛋中金刚烷胺和金刚乙胺的方法。样品由2%甲酸乙腈提取后,经EMR-Lipid固相萃取柱净化,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,采用T3色谱柱（100mm×2.1mm,1.8μm）进行分离,正离子模式多反应监测条件下,采用基质配标外标法进行定量。在此条件下,金刚烷胺和金刚乙胺在1.0～20.0μg/kg范围内,线性关系良好（r≥0.998）,方法的检出限为0.5μg/kg,定量限1.0μg/kg,平均回收率为76.5%～106.8%,相对标准偏差为2.41%～6.81%。该方法样品前处理快速简便,减少了同位素内标的使用,节约成本,适用于大批量样本的快速检测。     

鸡肉中金刚烷胺间接竞争ELISA检测方法的建立

建立检测鸡肉中金刚烷胺的间接竞争酶联免疫吸附分析(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法。利用N-(1-金刚烷胺基)肼甲酰胺与乙醛酸合成新式金刚烷胺半抗原,采用活泼酯法将金刚烷胺半抗原分别与血蓝蛋白、牛血清白蛋白偶联合成免疫原和包被原,将所制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,并制备特异性识别金刚烷胺的单克隆抗体。ic-ELISA法经系统优化后,最佳包被原稀释倍数为80 000,抗体工作质量浓度为122.50μg/L,对金刚烷胺的IC50为0.69μg/L,检出限为0.21μg/L,在0.07～6.15μg/L之间线性良好,鸡肉样品中添加回收率为101.69%～108.71%,变异系数均低于15%,且实际样品检测结果与高效液相色谱-质谱联用测定结果相关性良好(R2=0.97),表明建立的ic-ELISA具有良好的准确度和可靠性。利用该特异性抗体建立的方法适用于实际鸡肉样品中金刚烷胺的快速检测。     

液相色谱-四极杆飞行时间质谱法同时测定 动物源性食品中的5种抗病毒类药物

目的建立同时测定动物源性食品中金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、奥司他韦和吗啉胍5种抗病毒类药物残留的液相色谱-四极杆飞行时间质谱(1iquid chromatography-quadrupole-time-of-flight mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS)分析方法。方法样品经醋酸铵缓冲溶液与乙腈提取,采用QuEChERS方法前处理,经C_(18)粉、无水硫酸镁净化。HPLC采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)柱进行分离,采用电喷雾正离子模式(electrospray ionization,ESI+)进行Q-TOF-MS检测,以分子离子精确质量数提取色谱峰面积进行定量。建立5种抗病毒药物的质谱数据库,并通过碎片离子的精确质量数推测碎片结构。结果猪肉、鸡肉、鱼肉、牛奶中吗啉胍的定量限为5~20μg/kg,金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、奥司他韦的定量限为0.5~1μg/kg,所有化合物线性相关系数r0.99。在低、中、高3个加标水平下,化合物回收率在72.5%~115.5%之间,相对标准偏差在1.2%~9.6%之间(n=6)。结论该方法操作简单、高效,可适用于动物源性食品中5种抗病毒药物残留的检测。     

间接竞争ELISA法检测牛乳中β-乳球蛋白含量的准确性评价

研究建立了以β-乳球蛋白标准品为包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG:HRP为二抗、邻苯二胺为底物的间接竞争酶联免疫检测法(indirect competitive enzyme-linked immu nosorbent,ELISA)。同时以反相高效液相色谱法定量检测相同样品中β-乳球蛋白含量,采用t检验方法来评价间接竞争ELISA的方法定量检测β-乳球蛋白的准确性。t检验方法结果显示:在显著水平α=0.05下,该间接竞争ELISA法检测β-乳球蛋白的测量值较为准确。     

食品中金刚烷胺残留检测方法新进展

金刚烷胺是一种抗病毒药物，滥用后会对消费者健康构成威胁。尽管包括中国和美国在内的许多国家都禁止在家畜和家禽生产中使用金刚烷胺，但目前金刚烷胺仍在被非法使用。本综述简要介绍了金刚烷胺的理化性质、危害、检出事件、检测标准和检测方法。传统检测方法，例如高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、酶联免疫吸附法、免疫层析法以及化学发光免疫分析法等现在已经被广泛用于检测金刚烷胺，基于抗原抗体反应的新型免疫分析法和基于金刚烷胺结构特点的分子印迹新方法正在受到越来越多的关注，有望在将来得到应用。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定蜂蜜中4种抗病毒类药物残留

目的 建立一种超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)同时检测蜂蜜中金刚烷胺、金刚乙胺、吗啉胍和阿昔洛韦4种抗病毒药物残留方法。方法 样品经20%乙腈水(含0.2%甲酸)溶液溶解, 超声提取后高速离心, 取上清液过Oasis PRiME HLB固相萃取柱净化, 净化后的样液进行上机测定; 选用SHISEIDO MGⅢ-H C18 色谱柱(2.0 mm×100 mm, 3 μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱; 通过多反应监测(MRM), 在正离子模式下, 采用基质匹配外标法, 同时对4种化合物进行定性和定量分析。结果 金刚烷胺、金刚乙胺、吗啉胍和阿昔洛韦在各自浓度范围内线性关系良好, 相关系数均大于0.999。方法的检出限为0.2~1.0 μg/kg, 定量限为0.5~2.0 μg/kg; 在LOQs、5、10、20 μg/kg 4个添加水平下的平均回收率为82.9%~93.5%, 相对标准偏差(RSDs, n=6)为2.0%~8.4%。结论 本方法简单快速、灵敏度高、重现性好,适用于蜂蜜中4种抗病毒类药物的同时检测。     

生物素间接竞争酶联免疫方法的建立

利用不同方法合成的生物素免疫原免疫小鼠,利用所得到的单克隆抗体建立针对生物素的间接竞争酶联吸附测定方法。所建立的间接竞争酶联吸附测定方法对生物素具有良好的特异性与较高的灵敏度,其对生物素半抑制率质量浓度为2.01 ng/m L,最低检测限为0.32 ng/m L,并且对液态奶、奶粉等样品中的生物素含量具有准确的检出性。与国标相比,所建立的间接竞争酶联吸附测定方法具有结果稳定,操作方便和高灵敏度高特异性等优点,对实际样品的检测具有重要意义。     

Preparation of high affinity antibody for ribavirin with new haptens and residue analysis in chicken muscle,eggs and duck muscle

In this work, high affinity polyclonal antibodies for ribavirin (RBV) from new haptens were prepared and were used to analyse RBV residues in chicken muscle, eggs and duck muscle. The new haptens were synthesised with different spacers, and the best antibody was obtained with an IC₅₀ value as low as 0.61 ng/mL in indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The cross-reactivities with another five antiviral drugs including amantadine, rimantadine, moroxydine, zanamivir and oseltamivir were less than 0.1%, which indicated the good specificity of the antibody. An ELISA was developed based on the antibody and applied to detect RBV in multi-food matrices. The sample preparation prior to detection only needed simple dilution after trichloroacetic acid extraction. The limits of detection were 1.07, 1.18 and 1.03 μg/kg in chicken muscle, eggs and duck muscle, respectively. Recoveries ranged from 89.0% to 112.7% with coefficients of variation below 13.0%. Ten blind samples of chicken muscle were analysed simultaneously by ELISA and liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and a good correlation between the methods was observed. The results indicated that the high affinity antibody could be applied for the simple and fast detection of RBV in multi-food matrices.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中8 种抗病毒类药物残留量

建立同时测定鸡肉、猪肉、鸡肝和猪肝中阿比朵尔、金刚烷胺、金刚乙胺、泛昔洛韦、帕拉米韦、咪喹莫特、奥司他韦、拉米夫定8?种抗病毒药物残留的超高效液相色谱-串联质谱的检测方法。样品采用乙腈-0.1%甲酸溶液（9∶1,V/V）经一次性振荡提取,用MCX固相萃取柱净化,内标法定量。结果表明：8?种抗病毒药物的检出限均低于1.0?μg/kg,定量限均低于3.0?μg/kg,空白鸡肉、鸡肝、猪肉、猪肝中分别添加5.0、10.0?μg/kg和20.0?μg/kg,8?种抗病毒药物的回收率均在70%～120%之间。该方法基质干扰小、灵敏度高、回收率好,可用于日常动物性样品中抗病毒类药物的残留检测。     

在线固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定鸡肉和鸡蛋中5 种抗病毒类药物残留量

建立鸡肉和鸡蛋中阿比多尔、金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、奥司他韦的在线固相萃取-液相色谱-串联质谱检测方法。样品采用1.0%甲酸-乙腈提取，经MCX在线固相萃取小柱净化，用XBridge C18色谱柱分离，使用电喷雾离子源正离子模式监测，以内标法定量。结果表明：5 种抗病毒类药物在0.05～100 ng/mL范围内线性关系良好；检出限为0.05～0.10 μg/kg，定量限为0.10～0.20 μg/kg；方法回收率范围为80.03%～93.96%，相对标准偏差低于10%。该方法分析速度快、灵敏度高，可用于鸡肉和鸡蛋中5 种抗病毒类药物的定性、定量分析。     

高效液相色谱法测定鸡蛋、鸡肉中五种类胡萝卜素物质

本文研究了鸡蛋、鸡肉中虾青素、叶黄素、斑蝥黄、玉米黄素、β-胡萝卜素等5种类胡萝卜素同时检测的HPLC方法。结果表明,5种类胡萝卜素在0.5~100 μg/mL线性范围内有较好的线性关系,决定系数R2均大于0.996,方法的检出限均在0.10~0.20 mg/kg之间,定量限在0.33~0.66 mg/kg之间。在1、10、20 mg/kg的加标水平下,鸡蛋和鸡肉样品的加标回收率分别在71.6%~112.9%和88.6%~119.7%之间,RSD均≤7.2%。该方法快速简单、准确度高、重复性好,适用于鸡蛋、鸡肉等复杂基质样品中5种类胡萝卜素类物质检测的要求,对于鸡蛋、鸡肉的市场监管具有重要意义。     

高效液相色谱-串联质谱法测定肉类中的氯酸盐和高氯酸盐

建立了高效液相色谱-串联质谱法同时测定肉类中氯酸盐和高氯酸盐的分析方法。样品经乙腈-水（13:7,V:V）提取后离心,上清液经PRiME HLB固相萃取柱净化,Acclaim Trinity P1复合离子交换柱分离,以乙腈及20 mmol/L乙酸铵为流动相进行梯度洗脱,串联质谱分析中采用电喷雾正离子源和多反应监测模式,内标法定量。结果表明,氯酸盐和高氯酸盐分别在2～200.0 ng/mL、1～100.0 ng/mL范围内呈现良好线性关系,决定系数分别为0.9983和0.9998,方法的定量限分别为2.0、1.0μg/kg。氯酸盐和高氯酸盐分别在三种肉类四个添加水平6.0、20、40、200μg/kg和3.0、10、20、100μg/kg的加标回收率为91.0%～105.7%和94.2%～110.5%,相对标准偏差为1.8%～9.7%和0.7%～9.4%。本方法具有操作简单、灵敏度高、稳定性好等优点,可很好地满足肉中氯酸盐、高氯酸盐的检测。     

三穗鸭中磺胺类和喹诺酮类药物残留检测及风险评估

建立了15种磺胺类和6种氟喹诺酮类药物残留的超高效液相色谱法-串联质谱法,并采用此法对2018年贵州省三穗县三穗鸭肉进行了15种磺胺类和6中氟喹诺酮类药物残留检测,在此基础上对三穗鸭肉产品中的磺胺类和氟喹诺酮类药物的残留风险进行了分析。结果显示,21种药物在5~200 μg/L质量浓度范围内线性关系良好,决定系数(R2)均大于0.990,药物的检出限为0.5~2.0 μg/kg,定量限2.0~5.0 μg/kg,在添加浓度5~50 μg/kg的范围内,21种药物回收率为70.3%~113.2%,相对标准偏差为2.1%~11.5%(n=6),该方法简单、快捷、精密度和准确度高,能满足鸭肉中两类兽药检测;三穗鸭肉中氟喹诺酮类均未检出,磺胺类仅检出磺胺氯哒嗪,检出率2.17%,检出值为2.37~3.68 μg/kg,均值3.33 μg/kg,未超过国家规定限量(100 μg/kg),其余磺胺类指标均未检出;参照国际上磺胺类ADI值规定,三穗鸭肉中磺胺氯哒嗪的食品安全指数值平均值为0.00014,最小值为0.00010,最大值为0.00016,均远远低于1;结果均表明,三穗鸭肉中氟喹诺酮类和磺胺类药物残留对人体的潜在危害水平是可以接受的。     

固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定市售卤肉制品中5种杂环胺含量

建立了LC-MS/MS快速检测卤肉制品中MeIQ、MeIQx、4,8-DiMeIQx、7,8-DiMeIQx和PhIP 5种杂环胺的方法。样品经40 g/L NaOH-甲醇溶液超声提取,用聚苯乙烯二乙烯苯固相萃取小柱(Poly-Sery PSD)净化,在电喷雾离子源正离子(ESI+)多反应监测(MRM)模式下进行测定。5种杂环胺化合物在0.1~10 μg/L范围内线性关系良好,决定系数R2在0.9976~0.9997之间,在空白样品中的平均添加回收率为76.9%~127.7%,日内相对标准偏差(RSD)为1.0%~9.5%,日间相对标准偏差(RSD)为2.1%~8.7%。在信噪比(S/N)分别为3和10时各化合物的LODs在0.01~0.1 μg/kg,LOQs在0.025~0.25 μg/kg。该方法分析时间短,准确度高,精密度好,可满足卤肉中多种杂环胺同时检测的要求。     

同位素稀释-气相色谱/质谱法测定婴幼儿辅食中四种呋喃类化合物

目的:应用稳定性同位素稀释技术,结合顶空气相色谱-质谱法（headspace/gas chromatography-mass spectrometry,HS/GC-MS）,建立婴幼儿辅食中四种呋喃类化合物的测定方法。方法:取适量样品,加入稳定性氘代同位素内标混合溶液,顶空60 ℃恒温30 min后,经HP-PLOTQ毛细管柱,气相色谱分离,采用选择离子监测（SIM）模式,内标法进行定量分析。结果:称样量1 g时,四种呋喃类化合物在1~200 μg/kg质量浓度范围内线性关系良好,r>0.999,不同基质样品的3个加标水平下的平均回收率为81.6%~110.5%,相对标准偏差（RSD,n=6）为3.44%~14.2%。饼干、米粉、蛋糕、水果泥和肉泥中四种呋喃类化合物总量范围分别为<0.2~497.3 μg/kg,1.8~90.1 μg/kg,<0.2~25.5 μg/kg,3.7~44.2 μg/kg和54.7~599.2 μg/kg。结论:该方法可用于婴幼儿辅食中四种呋喃类化合物的检测分析,婴幼儿罐装食品中含有较高浓度的呋喃及甲基呋喃,有必要制定标准的生产流程,通过建立婴幼儿辅食中呋喃及甲基呋喃的限量标准等方法来降低婴幼儿呋喃及甲基呋喃的暴露量。     

分子印记聚合物仿生抗体用于酶联免疫吸附法检测恩诺沙星

在聚苯乙烯酶标板表面直接合成对恩诺沙星具有特异性识别吸附能力的分子印迹聚合物膜,将其作为仿生抗体代替生物抗体,建立直接竞争仿生酶联免疫分析法(ELISA)进行恩诺沙星的检测。结果表明最适条件下仿生酶联免疫方法的最低检出限(IC₁₅)为 0.80 μg/L,灵敏度(IC₅₀)为 65.93 μg/L,对恩诺沙星的代谢物环丙沙星有较高的交叉反应率(72.85%),对其它7种喹诺酮类结构类似物的交叉反应率均较低(0%~2.87%)。该方法对鸡肉组织和猪尿两种样品的添加回收实验中(鸡肉加标量分别为2.5、15、75 μg/kg;猪尿加标量分别为5、30、150 μg/kg),有较高的回收率(鸡肉:97.30%~103.56%;猪尿:94.48%~96.53%),采用HPLC方法与仿生ELISA方法进行对比验证无显著性差异(p>0.05)。该仿生ELISA法准确度、精密度及特异性均较高,步骤简单,与传统ELISA方法相比省时经济,可以应用于实际样品中恩诺沙星残留的快速检测。     

EMR固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定虾肉中性激素残留的方法建立

本研究建立EMR固相萃取结合超高效液相色谱-串联质谱测定虾肉中15种性激素残留的分析方法。样品采用0.1 mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液-乙腈溶液提取,经Captiva EMR固相萃取SPE小柱净化,CAPCELLPAK C₁₈ BB-H（3 μm,2.1 mm×150 mm）色谱柱分离,电喷雾离子源正负离子分开扫描;多反应监测模式的超高效液相色谱-串联质联质谱法进行检测,以空白基质匹配外标法定量。正离子流动相为甲醇和0.1%甲酸,检测雄激素与孕激素;负离子流动相为乙腈和0.01%氨水溶液,检测雌激素。结果表明,经EMR固相萃取净化的虾肉样品中的15种性激素残留在1～50 μg/kg浓度范围内线性关系良好,相关系数（r）均大于0.99,方法检出限为0.0015～0.436 μg/kg,定量限为0.0051～1.453 μg/kg,平均回收率在85.31%~119.84%,相对标准偏差为2.11%~9.86%（n=6）。本方法操作快速简单,重复性好,灵敏度较高,适用于虾肉中15种性激素残留的检测。