乳酸菌发酵乳血管紧张素转化酶抑制活力的比较研究

以18种共计61株乳酸菌为研究对象,比较了乳酸菌发酵脱脂乳的血管紧张素转化酶抑制活力(ACE抑制活力),并探讨了ACE抑制活力与pH值、滴定酸度、蛋白水解度的关系。结果表明,乳杆菌ACE抑制活力最强,双歧杆菌次之,链球菌、乳球菌、明串珠菌和片球菌ACE抑制活力很低。ACE抑制活力最高的是Lacto- bacillus helveticus 6024,发酵28 h后ACEI%可达到80%以上,其OPA指数可达到0.800以上,而球菌的ACE抑制活力和蛋白水解能力都很低,甚至检测不到。乳酸菌产酸能力做为一个单一因素与ACE抑制率没有明显相关性(Spearman相关系数r_3=0.526),乳酸菌的蛋白水解能力与ACE抑制率具有显著的正相关性(Spearman相关系数r_3=0.938)。通过对2株产ACE抑制活力高的L.helveticus 6024和L.helveticus T16的研究发现,其共同特点是产酸能力和蛋白水解能力都很强。     

乳酸菌盐溶性蛋白培养物中血管紧张素转化酶抑制活性肽的测定及分离

将16 株乳酸菌用MRS液体培养基3 代继代培养后,离心,并用灭菌的生理盐水制成乳酸菌悬浮液,接种于远东多线鱼肉盐溶性蛋白溶液（salt-soluble protein,SSP）,对其代谢产物进行血管紧张素转化酶（angiotensinconverting enzyme,ACE）抑制活性测定,筛选出ACE抑制活性较高的Pediococcus acidilactici ID7菌株（ACE抑制率为47.6%）和Lactobacillus plantarum 6214菌株（ACE抑制率为40.6%）。利用高效液相色谱（high performanceliquid chromatography,HPLC）对Pediococcus acidilactici ID7的盐溶性蛋白培养代谢物进行色谱分析,获得了两个峰,其相应成分对ACE抑制的IC50分别为1.21 μg/mL和1.07 μg/mL,利用凝胶过滤HPLC法对出现较高的ACE抑制活性峰的成分进行色谱纯化,获得了ACE抑制率为26.67%,分子质量为586.7 D以下的ACE抑制多肽。     

具有高效ACE抑制活性乳酸菌的筛选及其益生特性研究

本研究运用紫外分光光度法初筛,再以HPLC法进行复筛,从31株源自云南传统发酵食品的乳酸菌中筛选具有高效ACE抑制活性菌株,同时研究其益生特性及脱脂乳发酵过程中ACE抑制率的动态变化。综合各项研究结果,最终筛选出ACE抑制率较高、抑菌谱广、耐酸耐胆盐性强,且对抗生素敏感的Lactobacillus plantarum YM-4-3作为研究菌株。益生特性研究表明,该菌株对Escherichia coli O 157:H 7和Listeria monocytogenes的抑菌圈直径可分别达41.30 mm和42.00 mm,甚至在高胆盐(0.3%)及强酸(p H 2.5)处理后仍保持较高活菌数(大于105 cfu数量级)。脱脂乳发酵过程中ACE抑制活性的动态监测表明,37℃发酵48 h是Lb.plantarum YM-4-3菌株发酵产生ACE抑制肽的最适培养条件,该发酵条件下获得的发酵乳的ACE抑制率可高达81.23%,菌体生物量、游离氨基酸及多肽含量也均达到最大值。本研究成果将为新型具有高效ACE抑制活性发酵乳制品的研发提供理论依据及菌株保证。     

具有降血压功能乳酸菌的筛选及其益生作用

为高血压治疗方式提供更多选择,筛选1株具有较强降血压功能的益生菌菌株,探究其降血压能力及其益生特性。通过ACEKitWST试剂盒对12株益生菌菌株进行血管紧张素转化酶（ACE）活性抑制的检测,选出ACE抑制率最强的菌株,测定其在胃肠液中的存活率及对酸和胆盐的耐受性。结果表明,鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）HCS01-013的ACE抑制率最高（61.54%）,其在人工胃液中处理3 h、人工肠液中处理4 h后,存活率分别为99.9%、99.7%;分别在pH 2.0、1.5%胆盐的环境中培养17 h,存活率为71.95%、96.79%。说明鼠李糖乳杆菌HCS01-013是一株具有较强降血压功能且耐逆性能较强的益生菌菌株。     

具有血管紧张素转换酶抑制活性的乳酸菌筛选及特性研究

血管紧张素转换酶（Angiotensin Converting Enzyme，ACE）是抗高血压药物的筛选靶位酶。以体外ACE抑制率为筛选指标，从传统发酵食品中筛选出12株具有ACE抑制活性的乳酸菌，研究了12株乳酸菌的ACE抑制活性和蛋白水解活性，以及模拟胃肠消化对乳酸菌发酵乳ACE抑制活性的影响和乳酸菌耐酸耐胆汁的特性。结果表明，CZ2112具有良好ACE抑制活性，经API鉴定系统鉴定为植物乳杆菌，ACE抑制类型为非竞争性抑制，24h发酵产物ACE抑制率可以达到83％，经模拟胃肠消化后抑制率为70％，邻苯二甲醛（OPA）法检测其蛋白水解活性为OPA指数0．43，对胃酸、胆汁具有较好的耐受性。     

产ACE抑制肽乳酸菌的筛选、益生特性评定及应用

目的:筛选出富产血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽的乳酸菌并评定其益生特性.方法:依据蛋白水解度及ACE抑制率对乳酸菌进行初筛,然后依据模拟胃肠消化后的ACE抑制率最终筛出2株乳酸菌ZJUIDS09和ZJUIDS11,进一步评价其耐酸、耐胆盐、抗生素耐药性和抑菌...     

微生物发酵法制备大豆ACE抑制肽菌种的筛选

以大豆分离蛋白为底物,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和肽含量为检测指标,选择5株乳酸菌、3株霉菌和1株枯草芽孢杆菌为出发菌种,通过微生物发酵筛选出具有高ACE抑制活性的发酵菌株。结果表明:乳酸菌中具有强ACE抑制活性的菌株为保加利亚乳杆菌,ACE抑制率和肽含量分别为57.93%和3.27mg/mL;霉菌中具有强ACE抑制活性的菌株为米曲霉,ACE抑制率和肽含量分别为41.23%和2.17mg/mL;枯草芽孢杆菌ACE抑制率和肽含量分别为45.02%和2.25mg/mL。综合比较9种菌株的发酵特性,选用保加利亚乳杆菌作为制备大豆抗高血压活性肽优良菌株。     

发酵马铃薯蛋白制备ACE抑制肽

从市售腐乳和酸菜中筛选出12株产蛋白酶菌株,然后用筛选出的菌株来发酵马铃薯蛋白,测定其蛋白酶活力对菌株进行复筛。通过测定发酵液的水解度和ACE抑制率得到一株最适合发酵马铃薯蛋白制备ACE抑制肽的菌株4-2-1。结果表明,用该菌株发酵马铃薯蛋白,其水解度和ACE抑制率分别为:(7.72±0.04)%和(86.94±0.78)%。     

Lactobacillus delbrueckii QS701在还原脱脂乳中的生长特性与ACE抑制活性的研究

对Lactobacillus delbrueckii QS701在还原脱脂乳中的生长特性、蛋白水解能力和血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性进行测定,还探讨其耐酸、耐胆盐和人工胃肠液的耐受性。结果表明,菌株QS701在10%的还原脱脂乳中37℃培养前期的生长较缓慢,12 h以后生长速度加快;48 h时其生物量、游离氨基氮含量和ACE抑制活性均达到最高值,分别为11.2(OD410 nm×10)、512.8μg/mL Tyr和62.7%。该菌株具有一定的耐酸、耐胆盐能力,经模拟胃肠消化后活菌增长率为37.04%。     

具有胆固醇去除能力和胆盐水解酶活性的乳酸菌的体外筛选

对分离自内蒙古传统稀奶油或酸化稀奶油中的10株乳酸菌进行了胆固醇去除能力和胆盐水解酶活性的研究(定性和定量),筛选出了3株具有较高胆固醇去除能力和胆盐水解酶活力的乳酸菌菌株,分别为KLDS6.0330、KLDS6.0333和KLDS6.0335,并对它们进行16SrDNA分子生物学鉴定、酸耐受性和胆盐耐受性的测定。结果表明:这3株菌均为植物乳杆菌(L.Plantarum),并且表现出了较好的酸耐受性和胆盐耐受性。     

动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002益生特性的研究

该研究测定动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animails subsp. lactis）菌株HCS04-002对酸、胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性,并采用邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）法及甘油三酯试剂盒分别测定菌株的β-半乳糖苷酶活力和甘油三酯降解能力。结果表明,菌株HCS04-002在pH 2.0和pH 3.0环境下处理17 h,存活率达60%以上;在0.3%、0.5%、1.0%、1.5%的胆盐环境处理17 h,存活率达70%以上;经人工胃液和人工肠液消化后,存活率达99%以上;β-半乳糖苷酶活力为0.78 U/mL;甘油三酯降解率为43%。综上,动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002具有较好的耐酸、耐胆盐及耐胃肠液能力,进入人体后能够以较高存活率到达肠道发挥作用,并具有一定的缓解乳糖不耐受和降甘油三酯功能。     

耐酸耐胆盐益生菌的筛选及其益生特性研究

该研究采用浓香型白酒原酒为主要原料研发低度艾草酒。浓香型白酒原酒在80 ℃、-65 kPa条件下减压蒸馏，去除蒸馏釜中残液并收集中段馏出液。与原酒相比，中段馏出液中的乙醛、甲醇分别降低了32%、77%，酯类物质总含量提升89%，酒精度从67%vol提高至85%vol，以此为基酒浸渍艾草新鲜茎叶，并对浸渍条件进行优化。结果表明低度艾草酒的生产工艺为料液比5∶100（g∶mL），在20～25 ℃条件下浸渍新鲜艾草茎叶5 d，无菌纱布过滤，添加纯净水降度至30%vol。经检测，该低度艾草酒含有相对含量为0.33%的石竹烯、0.40%的桉叶油醇、0.09%的天然樟脑、0.06%的4-萜烯醇、0.06%的2-茨醇、0.02%的马鞭草醚等活性成分，且常温储存3个月外观及风味仍保持稳定。该研究结果为以浓香型白酒为基酒生产特色露酒提供了新的途径。     

Amino acid transamination in permeabilised cells of Lactobacillus helveticus, Lb. paracasei and Lb. danicus

Aminotransferase (AT) activity against 18 amino acids was studied in ten strains of three species of Lactobacillus. A method for permeabilisation of cells was developed using toluene and ethanol combined with mechanical treatment. It was found that the AT activities in the washed permeabilised cells (W-PC) corresponded well to that in cell-free extracts (CFE). The AT specificity pattern was species as well as strain dependant. Strains of Lb. helveticus had high specificity for aromatic amino acids (ArAA) and lower activity against branched-chain amino acids (BcAA) and Asp, while strains of Lb. paracasei subsp. paracasei degraded BcAA and Asp, but had a lower and variable specificity against ArAA. One of the Lb. paracasei strains was characterised by having very high AT activity against all three BcAA (Ile, Leu, Val) compared with any of the other Lb. paracasei strains tested. Strains of Lb. danicus, which is a newly discovered Lactobacillus species isolated from cheese, had up to about 20 times higher AT activity against Leu than Lb. paracasei and Lb. helveticus. The permeabilised cells of Lb. danicus had also considerably higher AT activity against ArAA than Lb. paracasei and Lb. helveticus strains, and also higher AT activity against Asp. All Lactobacillus strains tested had AT activity against Met, but at a much lower rate than against other amino acids. Results of this study also demonstrated a chemical reaction between alpha-ketoglutaric acid and Asp that was catalysed by pyridoxal-5-phosphate without any AT present.     

副干酪乳杆菌诱导Caco-2细胞凋亡及其发酵乳贮藏品质的研究

以新疆马奶酒中自行分离得到的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）M5L为对象,研究该菌株对结肠癌Caco-2细胞的抑制作用并分析发酵乳贮藏品质变化。结果表明,副干酪乳杆菌M5L可以在一定的盐浓度、胆盐浓度及酸性环境中较好的生长。当菌体以100∶1的感染系数作用于Caco-2细胞72 h后抑制率最佳;显微镜下观察活菌处理后的细胞发生明显的凋亡现象;流式细胞仪检测到副干酪乳杆菌M5L可以诱导Caco-2细胞内活性氧显著增加,并将细胞周期阻滞在合成期,且通过增大Caspase-3和Bax基因表达量,降低Bcl-2基因表达量来促进肿瘤细胞的凋亡。其发酵酸乳贮藏5 d时品质较佳,长时间的贮存会导致酸乳品质的劣变。     

来宾酒糟酸菜中降胆固醇乳酸菌的筛选鉴定及发酵工艺研究

该研究采用钙溶圈法及MRS-胆固醇培养基从来宾酒糟酸菜汁中分离筛选具有降胆固醇能力的乳酸菌,通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,同时对其耐酸性、耐胆盐性能进行研究,并以胆固醇去除率为考察指标,通过单因素试验及正交试验对其发酵条件进行优化。结果表明,筛选得1株具有去除胆固醇能力的乳酸菌,编号为XL-02,经鉴定,菌株XL-02为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,其具有较好的耐酸能力和胆盐耐受性。在pH2.0的酸性环境下培养24 h,菌株存活率为3.14%;在胆盐含量为0.3%条件下培养24 h,菌株存活率为12.17%。菌株XL-02去除胆固醇的最优发酵条件为以MRS液体培养基为发酵培养基,初始pH值6.0,接种量4%,发酵温度39 ℃,发酵时间72 h。在此优化条件下,胆固醇去除率为（61.56±0.08）%。     

驼乳制品中抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性乳酸菌的筛选及益生特性研究

目的:本研究以新疆阿勒泰地区的驼乳制品为研究对象,筛选对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性的优良乳酸菌。方法:采用稀释涂布法分离纯化菌株,DNS和pNPG法筛选对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性的菌株,通过耐酸性、耐胆盐、模拟胃肠道环境耐受性、抑菌性、抗氧化活性实验评价菌株的益生特性。结果:从驼乳制品中共计获得34株菌株,其中6株对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性,经过形态学和16S rRNA分子鉴定,确定有4株为植物乳杆菌Lactiplantibacillus plantarum,2株为副干酪乳杆菌Lactiplantibacillus paracasei。6株乳酸菌对α-淀粉酶的抑制活性都达到50%以上,其中X34对α-淀粉酶的抑制率最高达到88.59%。本实验中筛选的乳酸菌对α-葡萄糖苷酶的抑制率在11%~16%之间,X31抑制率最高为15.43%。6株乳酸菌在不同pH（1.0、2.0、3.0）和不同浓度胆盐（1、2、3 g/L）的培养基中均可存活。6株乳酸菌在模拟胃液和肠液中的存活率分别达到83%和90%以上。对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率超过90%以上,其中X29对羟自由基的清除率最高为92.43%,对超氧阴离子自由基清除率最强的是X33清除率达到94.04%。6株乳酸菌对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用,其中X31对大肠杆菌的最大抑菌圈直径为19.63 mm,X23对沙门氏菌抑菌圈最大达到19.85 mm,菌株X33对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径最大为19.17 mm。结论:从驼乳制品中筛选到6株具有潜在降糖活性的乳酸菌,对强酸、胆盐和胃肠液有一定的耐受性,抗氧化能力较强,具有抑制致病菌的效果,为后期研发功能性降糖饮品提供益生菌株。     

植物乳杆菌KLDS 1.0318产酸、耐酸、耐胆盐能力及其免疫特性研究

目的:通过体外实验,研究植物乳杆菌KLDS 1.0318的生长曲线、产酸能力、耐酸耐胆盐性能,在此基础上对其可能的免疫调节活性进行研究。方法:采用平板计数法和紫外-可见分光光度法测定菌株生长曲线,pH计测定其产酸能力,平板计数法测定该菌株在酸性及高胆盐环境作用后的活菌数及存活率。采用CCK-8法观察不同剂量的植物乳杆菌KLDS 1.0318对小鼠脾淋巴细胞增殖能力以及对小鼠腹腔巨噬细胞能量代谢水平的影响,采用巨噬细胞吞噬中性红法评估不同剂量的植物乳杆菌KLDS 1.0318对巨噬细胞吞噬作用的影响。结果:植物乳杆菌KLDS 1.0318在4 h后进入对数期,12 h后达到稳定期。其产酸能力较强,pH在12 h后降至4.16。菌株在pH为2.5、3.5条件下培养至3 h时,其存活率分别为91.20%、97.50%,在胆盐质量浓度分别为0.3、0.5 g/100 mL的培养基中作用4 h后,其存活率分别为95.40%、87.76%。一定剂量的植物乳杆菌KLDS 1.0318能够促进脾淋巴细胞和巨噬细胞活性,并呈现剂量依赖关系。结论:植物乳杆菌KLDS 1.0318生长较快,具有较强的产酸、耐酸、耐胆盐能力,并具有潜在免疫调节功能。     

副干酪乳杆菌NCU622耐酸耐胆盐及其黏附性能

通过体外实验研究副干酪乳杆菌NCU622的耐酸、耐胆盐性能;采用体外细胞模型（人体结肠腺癌细胞系Caco-2细胞）测定副干酪乳杆菌NCU622的黏附性能,考察了菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能的影响,并对该菌株进行细胞毒性检测。结果表明：副干酪乳杆菌NCU622在pH 2.5的MRS液体培养基中作用3 h,存活率为98.21%;在胆盐质量浓度为0.3、0.5 g/100 mL的MRS液体培养基中作用4 h,存活率分别为95.14%和85.07%。副干酪乳杆菌NCU622对Caco-2细胞的黏附能力较强,为（21.19±0.94）CFU/Caco-2细胞,且菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能均有影响。副干酪乳杆菌NCU622与Caco-2单层细胞共培养24 h后,对其无裂解作用。这表明副干酪乳杆菌NCU622具有良好的耐酸耐胆盐能力及较强的黏附性能,且对Caco-2细胞无裂解作用,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品的菌种要求。