牡蛎蛋白酶解物对小鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用

为探究牡蛎酶解物对小鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用,采用牡蛎酶解物干预慢性酒精性肝损伤小鼠,测定小鼠血清中谷丙转氨酶（alaninetransaminase,ALT）活力、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）活力、总胆汁酸（total bile acid,TBA）浓度以及肝脏指数和肝脏甘油三酯（triglyceride,TG）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量等指标,观察肝脏的组织形态变化,分析肝脏相关基因mRNA转录水平以及肠道菌群结构的变化。结果表明,与模型组相比,高、低剂量牡蛎酶解物均显著降低了小鼠血清中ALT、AST活力和肝脏中TG、MDA含量（P＜0.05、P＜0.01）,极显著提高了谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量（P＜0.01）;牡蛎酶解物高剂量组的TBA浓度显著降低（P＜0.05）。牡蛎酶解物高、低剂量都可改善酒精对小鼠肝脏造成的形态学损伤,与模型组相比,TLR4、TNF-α和NF-κB的转录水平均显著下调（P＜0.05）,在科水平上提高了小鼠肠道中Firmicutes的丰度,降低了Bacteroidetes的丰度,在属水平上提高了小鼠肠道中Lactobacillus和Alistipes丰度。结论：牡蛎酶解物对慢性酒精性肝损伤小鼠具有保护作用,其作用机制与降低AST、ALT活力和TG、MDA、TBA水平,提高GSH含量,下调TLR4、NF-κB和TNF-α基因转录水平以及肠道菌群结构变化有关。     

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨黔产刺梨根干预溃疡性结肠炎的作用机制

目的:基于TLR4/NF-κB信号通路探讨黔产刺梨根治疗溃疡性结肠炎大鼠的作用机制。方法:采用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇溶液灌肠建立溃疡性结肠炎模型,灌胃刺梨根水煎液高、中、低剂量组（8、4、2 g/kg）,柳氮磺嘧啶组（0.3 g/kg）。观察大鼠外观、动作行为以及血便;采集大鼠血清与大鼠结肠,利用苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠结肠病理学改变;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素（IL）-1β,IL-6,TNF-α水平;逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测大鼠结肠Myd88、NF-κB p50、NF-κB p65、TLR4 mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠结肠Myd88、NF-κB p50、NF-κB p65、TLR4蛋白表达。结果:刺梨根水煎液可明显改善溃疡性结肠炎大鼠结肠炎症损伤,特别是刺梨根水煎液高剂量组。与模型组比较,刺梨根水煎液高剂量组结肠病理损伤得到显著改善,刺梨根水煎液高剂量组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均极显著下降（P<0.01）;结肠Myd88、NF-κB p50、TLR4 mRNA表达量显著下降（P<0.05）;结肠Myd88、NF-κB p50、NF-κB p65、TLR4蛋白表达量极显著下降（P<0.01）。结论:刺梨根水煎液可有效缓解TNBS诱导的溃疡性结肠炎并改善炎症损伤,刺梨根水煎液干预溃疡性结肠炎的作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路相关。     

n-3多不饱和脂肪酸对小鼠糖脂代谢影响及机制

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/NF-κB通路探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)改善小鼠糖脂代谢的机制。方法:40只SPF级C57BL/6雄性小鼠适应性喂养1周,随机分为4组:正常对照组、高脂猪油组(富含饱和脂肪酸)、高脂大豆油组(富含n-6多不饱和脂肪酸)和高脂亚麻籽油组(富含n-3多不饱和脂肪酸),持续饲喂9周后进行葡萄糖耐量实验,全自动生化分析仪测定血脂血糖相关指标,ELISA试剂盒测定相关炎症因子,RT-PCR检测各组小鼠脂肪组织中TLR4/MyD88/NF-κB通路相关基因表达水平。结果:与其他高脂组相比,高脂亚麻籽油组能显著降低血糖水平,提高血清胰岛素水平,降低血清甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)水平(P0.05);同时能下调TLR4/MyD88/NF-κB通路相关基因及炎症因子TNF-α、IL-6及IL-8的表达量。结论:n-3 PUFAs能够抑制高脂引起的小鼠糖脂代谢紊乱,抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路所介导的炎症反应可能是其作用机制。     

海兔素对酒精性肝损伤大鼠肝脏保护作用及机制（英文）

本实验旨在观察海兔素对酒精性肝损伤大鼠的保护作用,并从内毒素介导的Kupffer细胞toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路角度探讨海兔素可能的保肝机制。雄性Wistar大鼠随机分为3组,包括正常对照组、酒精模型组和海兔素干预组。其中,酒精模型组和海兔素干预组大鼠分别灌胃给予8 g/(kg mb·d)乙醇2周后,再给予12 g/(kg mb·d)乙醇6周。海兔素干预组在给予乙醇前1h,灌胃给予海兔素150 mg/(kg mb·d),持续8周。末次灌胃后,禁食不禁水12 h,处死大鼠。采用苏木精-伊红染色进行肝组织病理学观察,采用透射电子显微镜进行肝组织超微结构观察,采用酶学实验检测肝脏损伤血清生物标志物水平,采用显色底物鲎试剂盒检测血清内毒素水平;采用门静脉胶原酶Ⅳ原位灌注及密度梯度离心获得大鼠原代Kupffer细胞。采用墨汁吞噬试验评价Kupffer细胞吞噬活性;采用逆转录聚合酶链反应测定Kupffer细胞中CD14、TLR4和NF-κB的mRNA表达水平;采用蛋白印迹实验测定Kupffer细胞中TLR4、MyD88、NF-κB p65和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附实验测定Kupffer细胞上清液中TNF-α和白细胞介素(interleukin-1β,IL-1β)含量。结果显示,海兔素补充可减轻乙醇引起的肝组织损伤,降低肝脏损伤血清生物标志物水平(P0.05)。进一步研究发现,海兔素补充可减少血浆内毒素含量(P0.05),有效恢复Kupffer细胞吞噬活性,显著降低Kupffer细胞中TLR4及其下游CD14、TLR4、MyD88、NF-κB p65等相关蛋白表达水平(P0.05),并使TNF-α和IL-1β等炎性因子释放受到抑制(P0.05)。结果表明,海兔素对酒精性肝损伤大鼠肝组织具有保护作用,其作用机制可能与海兔素抑制内毒素介导的MyD88依赖性TLR4信号通路活化有关。     

沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性

本实验在体外应用脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞建立炎症模型的基础上,探讨沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性。应用CCK-8法检测0、50、100、200、400、800 μg/mL沙葱总黄酮水洗组分对小鼠腹腔巨噬细胞增殖活力的影响;将细胞分为空白对照组、LPS应激模型组及不同质量浓度沙葱总黄酮水洗组分预处理组,采用Griess法及酶联免疫吸附测定法分别测定各处理组细胞上清液中NO浓度和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6、IL-10的质量浓度,反转录实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各处理组细胞中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、髓样分化蛋白（myeloid differential protein,MyD）88、核因子 κB（nuclear factor κB,NF-κB）mRNA的表达水平。结果显示：与对照组相比,沙葱总黄酮水洗组分在50～800 μg/mL时对小鼠腹腔巨噬细胞无明显细胞毒性作用。与LPS应激模型组相比,沙葱总黄酮水洗组分能够极显著抑制促炎介质NO、TNF-α、IL-1β、IL-6质量浓度及其mRNA的表达（P＜0.01或P＜0.001）;高度显著提高抗炎细胞因子IL-10质量浓度及其mRNA的表达（P＜0.001）,且呈剂量依赖效应;极显著降低MyD88、NF-κB mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.001）。由此得出,沙葱总黄酮水洗组分对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞具有抗炎作用,其抗炎活性可能是通过抑制促炎性介质NO、TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌并提高抗炎性细胞因子IL-10的质量浓度实现的,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。     

榆干离褶伞溶栓酶对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用

目的:探讨榆干离褶伞溶栓酶(LUFE)对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法:以高脂饮食建立高脂血症模型,用不同剂量的LUFE灌胃模型大鼠。HE染色观察肝脏病理形态学变化;比色法检测大鼠血浆生化指标;蛋白免疫印迹法观察炎症相关蛋白的表达水平。结果:LUFE可以缓解高脂血症大鼠的肝组织损伤,降低血浆血脂水平、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,下调TLR4、MyD88和磷酸化的PI3K、Akt、NF-кB水平。结论:LUFE通过调控PI3K/Akt/NF-кB和TLR4/MyD88/NF-кB信号通路,可以保护高脂血症所致的大鼠肝损伤。     

榆干离褶伞溶栓酶对脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨榆干离褶伞溶栓酶对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的血管内皮细胞炎性损伤的保护作用。方法：以LPS诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）炎性损伤。将HUVEC分为空白对照组、模型组和榆干离褶伞溶栓酶（Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE）低、中、高剂量组。采用噻唑蓝法测定HUVEC存活率,通过酶联免疫吸附测试法检测细胞上清液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、白介素6（interleukin 6,IL-6）、E-选择素和单核细胞趋化因子1（monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1）水平。流式细胞术检测细胞间黏附分子1（intercellular cell adhesion molecule 1,ICAM-1）表达水平,采用Hoechst染色法观察HUVEC与人急性单核细胞白血病细胞系（human acute monocytic leukemia cell line-1,THP-1）的黏附作用。用蛋白印迹实验检测HUVEC的Toll样受体4（toll-like receptor 4,TLR4）、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）以及核因子-κB（nuclear factor κB,NF-κB）通路中主要蛋白（髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,MyD88）、转化生长因子β激活激酶1（transforming growth factor β activated kinase 1,TAK1）、磷酸化TAK1（phosphorylated TAK1,p-TAK1））的表达和活化情况。结果：LUFE能够抑制LPS所诱导的HUVEC培养上清液LDH、TNF-α、IL-6、E-选择素和MCP-1水平的升高,降低细胞ICAM-1表达水平并减弱HUVEC与THP-1的黏附作用。与模型组比较,LUFE各剂量组TLR4、MyD88、p-TAK1/TAK1、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK）/JNK、p-p38/p38、p-NF-κB/NF-κB水平显著降低（P＜0.05）。结论：LUFE对血管内皮细胞的炎性损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制TLR4/MyD88/TAK1/NF-κB信号通路及MAPK通路,进而降低炎症因子水平,从而保护血管内皮细胞。     

金属硫蛋白对大鼠肝缺血再灌注损伤中NF-κB、TNF-α和ICAM-1 mRNA表达的影响

为了研究金属硫蛋白（MT）对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）核转录因子-κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）。mRNA表达的影响,本试验将96只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、MT低、高剂量处理组,缺血45min再灌注lh,3h,6h,9h。建立大鼠HIRI动物模型,给予不同剂量MT,实时荧光定量PCR方法检测NF-κB、TNF-α和ICAM—1 mRNA的相对表达量。结果表明,与假手术组相比,模型组再灌注3h,NF-κB、TNF-α、ICAM-1mRNA表达显著增加（p〈0.01）,MT高、低剂量组与模型组相比,NF-κB、TNF-α及ICAM-1mRNA表达量显著降低（p〈0．01）。由此可知,金属硫蛋白抑制NF-κB、TNF-α和ICAM三种细胞因子的表达是肝缺血再灌注损伤保护作用的主要机理。     

白首乌酵素对癫痫小鼠认知损伤影响研究

为研究白首乌酵素对癫痫小鼠认知损伤缓解作用,以江苏滨海白首乌为原料制备白首乌酵素。建立癫痫小鼠模型,分别测定无特定病原体（SPF）小鼠认知功能,血清和海马体组织的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平和海马体组织的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）水平和核因子-κB（NF-κB）P65及其抑制蛋白（IκB）表达水平。结果表明,酵素中的二苯乙烯苷含量为78.18 μg/mL;添加酵素可显著缩短逃避潜伏期（57.7%）、增加跨越平台次数（83.3%）（P＜0.05）;组织切片显示海马体组织细胞分布轮廓较清晰,顶状树突较明显;血清、海马体组织的SOD水平分别提高19.9%、33.3%,MDA水平分别降低16.0%、26.4%;NF-α、IL-1β分别降低27.8%、20.6%;（p-NF-κB） P65、（p-IκB）蛋白表达水平显著降低至121.6%、119.1%（P＜0.05）。表明白首乌酵素可能通过NF-κB信号通路缓解癫痫小鼠认知损伤。     

英红九号红茶水提物通过调控TNF-α/NF-κB信号通路缓解小鼠的急性酒精中毒

该研究探讨了英红九号红茶水提物（Yinghong NO.9 Black Tea Water Extract,YBTE）缓解小鼠急性酒精中毒作用（Acute Alcoholic Intoxication,AAI）及其机制。采用56°白酒稀释液一次性灌胃方法建立小鼠AAI模型,记录翻正反射消失和恢复时间,检测血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性以及血清和肝脏中乙醇脱氢酶（ADH）的活性,采用Western blot法测定肝脏中核因子-κΒ（NF-κB）、炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）蛋白表达水平。结果表明,不同剂量YBTE均能延长小鼠入睡时间,也能缩短睡眠时间,其中高剂量组小鼠入睡时间延长到40.89 min（p<0.01）,睡眠时间缩短为166.18 min（p<0.01）。与模型组相比,YBTE可降低血清中ALT和AST的活性,提高血清和肝脏中ADH的活性,其中高剂量组ALT活性下降到22.89 U/L（p<0.01）,AST活性下降到29.58 U/L（p<0.01）,血清ADH提高到43.43 IU/mL（p<0.01）,肝脏ADH提高到7.37 IU/mL（p<0.01）,并能下调肝脏中p-NF-κB p65、TNF-α和IL-1β蛋白表达量。YBTE具有良好的缓解AAI的作用,其作用机制可能是促进酒精代谢和下调TNF-α/NF-κB信号通路。     

黑米花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞炎症损伤的保护作用

单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物,富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中,其中矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g）是花色苷中重要的单体,本研究旨在探讨黑米来源的Cy-3-g对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人单核白血病细胞（Tohoku hospital pediatrics-1,THP-1）炎症损伤的作用及可能的分子机制。采用乙醇-盐酸溶液浸提、大孔树脂吸附洗脱等步骤得到黑米花色苷粗提物,然后用中压液相层析联合紫外检测提取得到纯化的Cy-3-g（纯度>96.5%）。用不同质量浓度（0、0.10、0.25μg/mL和0.50μg/mL）Cy-3-g与THP-1细胞共孵育4 h,然后加入LPS（质量浓度50 ng/mL）与细胞继续孵育48 h,用酶联免疫吸附试验法测定培养液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac...     

黑豆肽对高脂性肝损伤小鼠的保护作用

目的:研究黑豆肽对高脂性肝损伤小鼠保护作用.方法:选择健康的雄性ICR小鼠,适应性饲养7?d后,按照体质量随机分为对照组和模型组.连续饲喂模型组小鼠高脂饲料5周,建立高脂性肝损伤模型.第5周后,将造模小鼠按照体质量随机分为模型组、阳性药物组以及黑豆肽高、中、低剂量组(1000、800、400?mg/kg?mb),连续灌...     

The nutritional supplement Active Hexose Correlated Compound (AHCC) has direct immunomodulatory actions on intestinal epithelial cells and macrophages involving TLR/MyD88 and NF-κB/MAPK activation

Active Hexose Correlated Compound (AHCC) is an immunostimulatory nutritional supplement. AHCC effects and mechanism of action on intestinal epithelial cells or monocytes are poorly described. AHCC was added to the culture medium of intestinal epithelial cells (IEC18 and HT29 cells) and monocytes (THP-1 cells) and assessed the secretion of proinflammatory cytokines by ELISA. Inhibitors of NFκB and MAPKs were used to study signal transduction pathways while TLR4 and MyD88 were silenced in IEC18 cells using shRNA. It was found that AHCC induced GROα and MCP1 secretion in IEC18 and IL-8 in HT29 cells. These effects depended on NFκB activation, and partly on MAPKs activation and on the presence of MyD88 and TLR4. In THP-1 cells AHCC evoked IL-8, IL-1β and TNF-α secretion. The induction of IL-8 depended on JNK and NFκB activation. Therefore, AHCC exerts immunostimulatory effects on intestinal epithelial cells and monocytes involving TLR4/MyD88 and NFκB/MAPK signal transduction pathways.     

Effects of a synthetic di-phosphoserine peptide (SS-2) on gene expression profiling against TNF-α induced inflammation

It has been showed bioactive di-phosphoserine peptide (SS-2) possesses functions to ameliorate oxidative stress in vitro. This study aimed to substantiate the role of bioactive di-phosphoserine peptide (SS-2) in modulating inflammatory responses in TNF-α-stimulated HT-29 cells, and its mechanism of action. SS-2 significantly reduced IL-8 secretion in TNF-α-induced HT-29 cells, and also suppressed pro-inflammatory cytokines, including IL-8, IL-12, MCP-1 and TNF-α. Moreover, SS-2 inhibited TNF-α initiated signalling cascades by suppressing phosphorylation of the ERK1/2, JNK, P38 and IκB those culminate in above cellular inflammatory responses. Differentially expressed genes analysis within NF-κB signalling pathway revealed that SS-2 blocks multiple sites of upstream NF-κB signalling cascade, including FADD and MyD88, thereby preventing the signalling transduction involved in cellular inflammatory response. These results provide a new insight into molecular mechanism for anti-inflammatory action of SS-2, suggesting SS-2 is a potential alternative approach to treat IBD by particular targeting TNF-α driven inflammatory event.