基因拼接型蜡状芽孢杆菌ZY12磷脂酶D的异源表达及转酯活性的研究

磷脂酶D是一类酯键水解酶,能够水解磷脂生成磷脂酸,并在某些羟基化合物存在的条件下,通过脱水缩合生成新型磷脂.利用磷脂酶D生成新型磷脂的活性,通过生物转化可以制备稀有磷脂如磷酯酰丝氨酸等.因此,磷脂酶D在食品及医疗领域应用潜力巨大.实验室前期发现的蜡状芽孢杆菌ZY12来源新型磷脂酶D具有水解活性,但检测不到转酯活性,将其...     

采后苯并噻重氮处理对厚皮甜瓜细胞膜磷脂代谢的影响

磷脂是细胞膜的重要组分,磷脂代谢直接影响细胞膜的稳定性,进而影响植物的生长、衰老和次生产物代 谢。诱抗剂苯并噻重氮（benzothiadiazole,BTH）可提高甜瓜（Cucumis melo L.）采后抗病性、延缓果实衰老、影 响果实次生代谢产物香气物质的释放。本研究以‘玉金香’甜瓜为实验材料,于采后贮藏期间分析样品果实中磷脂 酰胆碱（phosphatidyl cholines,PC）、磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol,PI）和磷脂酸（phosphatidic acid,PA） 含量以及磷脂酶A2（phospholipase A2,PLA2）、磷脂酶C（phospholipase C,PLC）和磷脂酶D（phospholipase D, PLD）活力和相关基因表达水平,探讨采后BTH处理调控厚皮甜瓜磷脂代谢的机理。结果表明：BTH处理可抑制 厚皮甜瓜采后贮藏期间磷脂酶基因的表达和活力,果皮样磷脂酶活力峰值分别较CK组低7.11%（PLA2）、10.24% （PLC）和7.20%（PLD）;BTH处理组膜磷脂组分PC、PI的积累量较CK组增加,贮藏结束时果皮样峰值比CK组 高5.24%（PC）和2.08%（PI）,BTH处理组磷脂代谢产物PA的含量较CK组、CC组降低,贮藏结束时,BTH处理 组比CK组低20.72%（果皮）和8.51%（果肉）;BTH对不饱和脂肪酸的抑制率低于饱和脂肪酸。可见,采后BTH处 理可通过抑制PLC、PLD基因相对表达降低其活力,进而减少产物脂肪酸生成,改变脂肪酸不饱和度,然后影响细 胞膜代谢过程中的信号传导和次生代谢产物生成,降低甜瓜果实的采后病害。     

磷脂酶D在果蔬采后逆境胁迫及衰老过程中的作用

本文综述了磷脂酶D(PLD)在采后果蔬细胞生理活动中的作用,在果蔬胁迫反应(如高低温胁迫、机械损伤、干旱胁迫)及衰老过程中,PLD作为脂质分解代谢途径中的起始酶类主要参与细胞膜的降解,同时PLD在跨膜信号传导和细胞调节方面也具有重要作用;在此期间,PLD活性以及PLD mRNA表达都呈现增强趋势,其活性的增加使得细胞膜的完整性受到破坏,不利于采后果蔬品质的保持。PLD抑制剂的处理可降低PLD的活性,从而延缓果实细胞膜的降解进程,保持果实贮藏期的品质。     

磷脂酶D特性及其在磷脂酰丝氨酸合成中的应用

磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）是一种新资源食品，在自然界中含量稀少，提取困难。磷脂酶D（Phospholipase D，PLD）是生物酶法制备磷脂酰丝氨酸的关键合成酶。本文主要介绍了PLD的分子结构特点、催化机理及酶活特性，并总结了目前PS的制备方法，重点对PLD酶催化制备磷脂酰丝氨酸的研究进展及反应体系进行了论述，并对催化制备PS反应体系的选择进行了分析和展望，以期为深化酶法技术制备PS的研究提供参考，以此推动新资源食品PS的工业化生产和应用。     

磷脂酶D及其催化机制的研究进展北大核心CSCD

磷脂酶D是一类具有水解作用和磷酰基转移作用的酶,故其在磷脂改性方面发挥重要作用。主要对磷脂酶D及其催化机制研究现状进行介绍,包括磷脂酶D的来源与制备、催化合成磷脂质、磷脂酶D的分子结构、分子催化机制与分子改造。最后对磷脂酶D的发展进行了展望。     

磷脂酶D及其催化机制的研究进展

磷脂酶D是一类具有水解作用和磷酰基转移作用的酶,故其在磷脂改性方面发挥重要作用。主要对磷脂酶D及其催化机制研究现状进行介绍,包括磷脂酶D的来源与制备、催化合成磷脂质、磷脂酶D的分子结构、分子催化机制与分子改造。最后对磷脂酶D的发展进行了展望。     

磷脂酶D交联聚集体的制备及其酶学性能研究

磷脂酶D(phospholipase D,PLD)可以催化磷脂的磷酸二酯键水解和转磷脂酰基反应,目前已广泛应用于化工和医药等行业。该研究利用交联酶聚集体(cross-linked enzyme aggregates, CLEAs)技术开发了一种新型的PLD交联聚集体固定化酶(PLD-CLEAs)。以酶活性回收率为指标,确定了PLD-CLEAs的最佳制备条件：饱和度60%的硫酸铵为沉淀剂,质量分数0.125%的戊二醛为交联剂,交联反应时间为1.5 h,此时PLD-CLEAs的酶活力回收率为118.8%。与游离酶相比,PLD-CLEAs最适pH值向中性偏移,由8.0变为7.0;且PLD-CLEAs在较宽的温度和pH范围内均保持较高的酶活性,在高温(50℃)下的热稳定性明显提高。另外,在重复使用10次后,PLD-CLEAs仍能保持50.4%的酶活性。研究结果表明,PLD-CLEAs具有比游离酶更优异的热稳定性、pH耐受性和重复使用稳定性,有良好的工业应用前景。     

链霉菌S-pMS02发酵制备磷脂酶D的关键技术研究

实验室前期构建了重组链霉菌菌株S-pMS02用于高效分泌表达磷脂酶D（phospholipase D, PLD）,但是其PLD产量依然难以满足大规模生产需求。为了进一步提高PLD产量,该研究对S-pMS02的最佳产酶条件进行了探索,并改进了制备工艺。结果显示,该菌株最适发酵产酶碳源为可溶性淀粉、氮源为硫酸铵酪蛋白氨基酸复合物,此外1.5 g/L的Mg²⁺能显著提高PLD的产量。在接种孢子浓度为1×10⁵个/mL,发酵温度为32℃,发酵6 d时PLD酶活力达到最高,为25.56 U/mL。通过在发酵制备过程中使用剪切搅散和保温装置,进一步将PLD产量提升至33 U/mL,为最初的2倍。该研究的结果为促进PLD的生产以及工业化应用奠定了基础。     

磷脂酶D制备及应用的研究进展

磷脂酶D是作用于磷脂分子中的磷酰氧键（P-O）的一类酶,可催化发生水解和转磷酯化反应。本文综述了磷脂酶D制备和应用的研究进展。     

磷脂改性现状

该文简要介绍磷脂基本加工过程和化学改性方法,着重介绍磷脂酶改性及其工业化生产现状,用于磷脂改性的酶主要包括磷脂酶和脂肪酶。在工业化设计时,除考虑反应基本参数,如酶的种类、水分、溶剂等因素外,工艺方案确定也是一个关键问题;对几种反应器进行比较,填充床反应器被认为是最适于大规模工业化生产,溶血磷脂的酶法生产代表着酶技术在油脂行业中应用开始。     

Effect of Cabbage Phospholipase D Treatment on the Oxidative Stability of Beef Homogenate and Egg Yolk Phosphatidylcholine Liposomes

The possibility that enzymatic hydrolysis of phospholipids increases the oxidative stability of muscle food was examined using cabbage phospholipase D (PLD). As judged by the amounts of thiobarbituric acid‐reactive substances and carbonyl content, treatment of meat homogenate with 500 ppm (840 units) PLD increased its oxidative stability during storage at 4°C for 7 d, as compared to the nontreated ones. The thin‐layer chromatographic analysis confirmed the formation of phosphatidic acid (PA) in the 500 ppm (840 units) cabbage PLD‐treated samples. In a nonheme and heme iron‐induced lipid oxidation of egg yolk phosphatidylcholine liposomes, cabbage PLD treatment also improved their oxidative stability. Cabbage PLD treatment is, therefore, likely to improve the oxidative stability of meat homogenate via PA generation.     

南极磷虾脂质提取方法的比较

实验分别比较了氯仿甲醇、正己烷和95%乙醇三种不同溶剂以及超临界CO2提取的南极磷虾脂质成分差异,为南极磷虾脂质的研究提供一定基础。结果表明,氯仿甲醇提取的脂质得率最高,为19.21%±0.59%。正己烷提取的得率最低,仅为14.24%±0.38%,甘油三酯和胆固醇含量最高,分别为46.98%±1.00%和3.68%±0.30%,但对极性脂的提取效果不理想,磷脂含量仅为19.20%±3.45%。95%乙醇提取的脂质磷脂含量35.59%±2.69%,不饱和脂肪酸中EPA和DHA含量是最高的,占总脂肪酸含量的41.13%,且95%乙醇安全性高,价格低廉,适合大规模工业化生产,可以作进一步的探讨。超临界CO2萃取技术作为脂质的一种温和提取手段,得到的脂质基本成分与氯仿甲醇近似,虽然安全性更高,但是超临界设备成本较高,不适于中小型企业工业化生产。     

螺旋藻的开发与应用

螺旋藻具有丰富而全面的营养，具有极高的医疗保健价值，是一种新型的保健食品，其大规模工业生产具有巨大的社会与经济效益。对螺旋藻在经济社会中开发、生产及应用前景作了较为详细的论述。     

蛋白酶基因的克隆与表达研究进展

蛋白酶在各领域的应用愈加广泛,但其大规模工业生产受到诸多因素制约。利用基因工程技术对蛋白酶基因进行改良和克隆表达,开发高产量、高纯度、高活力的蛋白酶资源成为研究的热点。本文对蛋白酶的分类、结构与功能、菌种选育等进行了概述,同时分析了蛋白酶基因在原核和真核生物中的克隆与表达研究进展,并对未来蛋白酶基因工程的发展趋势进行了展望。     

全程机械化+适度精细化的甘蔗生产模式研究——以慧拓农业为例

机械化水平是制约糖料生产发展的重要因素,机械化砍收更是降低人力成本和提高效率的有力措施.近年来,在中央及地方糖料政策支持下,我国的蔗糖产业"双高"基地建设如火如荼.一方面,甘蔗机械化、规模化生产模式获得多方探索与尝试,规模化生产是蔗糖产业发展趋势的这一理念逐渐成为广泛共识;另一方面,推行机械化、规模化生产模式过程中因粗...     

Considerations for the development of cost-effective cell culture media for cultivated meat production

Innovation in cultivated meat development has been rapidly accelerating in recent years because it holds the potential to help attenuate issues facing production of dietary protein for a growing world population. There are technical obstacles still hindering large-scale commercialization of cultivated meat, of which many are related to the media that are used to culture the muscle, fat, and connective tissue cells. While animal cell culture media has been used and refined for roughly a century, it has not been specifically designed with the requirements of cultivated meat in mind. Perhaps the most common industrial use of animal cell culture is currently the production of therapeutic monoclonal antibodies, which sell for orders of magnitude more than meat. Successful production of cultivated meat requires media that is food grade with minimal cost, can regulate large-scale cell proliferation and differentiation, has acceptable sensory qualities, and is animal ingredient-free. Much insight into strategies for achieving media formulations with these qualities can be obtained from knowledge of conventional culture media applications and from the metabolic pathways involved in myogenesis and protein synthesis. In addition, application of principles used to optimize media for large-scale microbial fermentation processes producing lower value commodity chemicals and food ingredients can also be instructive. As such, the present review shall provide an overview of the current understanding of cell culture media as it relates to cultivated meat.     

明串珠菌发酵产甘露醇的研究进展

明串珠菌是韩国泡菜、德国泡菜和腌菜等发酵蔬菜中的优势细菌,保持产品的质量中起着重要作用,在各种乳制品中也有其的应用,因此近年来在内地对其的研究开始活跃。明串珠菌的发酵产甘露醇实现大规模工业化的潜力非常大,因此丰要论述了明串珠菌的甘露醇转化及相关代谢、发酵产甘露醇的研究。     

利用酿酒酵母工程菌株生产2,3-丁二醇的 研究进展

2,3-丁二醇在食品、化妆品、医药和运输燃料等行业具有广泛的应用,因而提高2,3-丁二醇的产量一直备受研究者们关注。目前,研究的热点主要集中于利用微生物发酵可再生资源生产2,3-丁二醇以取代传统的化学合成法,并取得了较大的进展。常见的2,3-丁二醇产生菌有克雷伯氏菌属和芽孢杆菌属,它们能有效利用可再生资源高效生产2,3-丁二醇。然而这些细菌被认为是潜在的病原菌,难以应用于大规模生产。因此,研究者们又将目光转向了酿酒酵母。就安全性和工业化生产要求而言,酿酒酵母是生产2,3-丁二醇的理想菌种。本文对国内外的相关研究进行了总结,介绍了酿酒酵母产2,3-丁二醇的优势和不足,2,3-丁二醇合成代谢途径及其基因工程菌株构建的方向,以及通过代谢工程将酿酒酵母改造成能高效、高质、高量产生2,3-丁二醇的理想菌株的研究关键。