海湾扇贝多肽混合物对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

采用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测海湾扇贝多肽混合物对体外培养的人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜及流式细胞仪观察、分析其对HepG2细胞的形态和细胞凋亡的影响。结果表明：不同质量浓度海湾扇贝多肽混合物（4、6、8、10、12 mg/mL）能够抑制人肝癌HepG2细胞的生长,且抑制率随海湾扇贝多肽混合物质量浓度的增加而升高。经12 mg/mL海湾扇贝多肽混合物处理后,HepG2细胞的形态发生了明显改变,表现为细胞皱缩、透明度降低、细胞核固缩等,并出现了凋亡小体。海湾扇贝多肽混合物可诱导HepG2细胞凋亡。     

山桃稠李果实花色苷对Nrf2/Keap1通路的影响

目的:探讨山桃稠李果实花色苷对Nrf2/Keap1通路的影响。方法:质量浓度为0.05、0.2、0.8mg/mL的山桃稠李果实花色苷分别作用于HepG2细胞24、48、72h,MTT法检测对HepG2细胞生长抑制率,检测各组细胞内谷胱甘肽(GSH)含量及谷胱甘肽硫转移酶(GSH-ST)、磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)活性变化;实时荧光定量RT-PCR实验方法检测山桃稠李果实花色苷对HepG2细胞的Nrf2、Keap1、GSTP1的基因表达的影响。结果:随着花色苷质量浓度的增加,HepG2细胞的谷胱甘肽(GSH)含量下降,谷胱甘肽硫转移酶(GSH-ST)、磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)活性显著降低;Nrf2、Keap1、GSTP1的基因表达下调。结论:山桃稠李果实花色苷能够通过对Nrf2/Keap1通路的调节来降低HepG2细胞的抗氧化能力。     

大豆多肽的分离纯化及其体外降血脂功能研究

通过HepG2肝癌细胞构建高胆固醇细胞模型,以大豆蛋白为对照组,分析了大豆多肽的体外降血脂活性,并通过凝胶过滤层析法和纳米技术-高效液相色谱-串联质谱（Nano-HPLC-MS/MS）技术对大豆多肽进行了初步纯化和鉴定。结果表明,大豆多肽对HepG2细胞内甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的产生具有一定的抑制作用,对HepG2细胞内高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的产生和超氧化物歧化酶（SOD）活力具有促进作用,且大豆多肽对HepG2细胞内TG、LDL-C的抑制作用及对HDL-C和SOD活力的促进作用均强于对照组,具有良好的体外降血脂活性。大豆多肽经分离纯化,最终鉴定并筛选出5个多肽,分别编号为LLDTN、FLEHAF、DFGKFF、LVGLKLY和LIDSVLDVVRK,相应的分子质量分别为574.30 Da、762.37 Da、759.36 Da、804.51 Da和1 255.75 Da。     

豌豆肽缓解胰岛素抵抗形成效果探究

目的:探究豌豆肽对缓解人肝癌细胞胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)形成的作用。方法:体外采用高浓度胰岛素诱导人肝癌细胞HepG2建立IR细胞模型,利用葡萄糖氢化酶过氧化氢酶法(GOP-POD)测定不同浓度豌豆肽对胰岛素诱导前后HepG2/IR细胞的葡萄糖含量及消耗量变化;MTT比色法检测豌豆肽对发生胰岛素抵抗细胞的毒性影响;采用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)手段检测细胞中胰岛素受体(InsR)及凋亡促进蛋白Caspase-3的表达。结果:胰岛素诱导48 h建立的HepG2/IR抵抗模型最为稳定,其葡萄糖消耗量与正常HepG2细胞相比降低10%。利用不同浓度豌豆肽对胰岛素诱导的HepG2细胞进行作用时,其葡萄糖消耗量提高1.31~1.68倍,InsR的表达水平提高1.19~1.34倍,凋亡蛋白Caspase-3阳性率表达增加。结论:豌豆肽对肝细胞内胰岛素抵抗的形成具有一定缓解作用。     

山桃稠李果实花色苷对HepG2细胞抗氧化系统的影响

目的:研究山桃稠李果实花色苷对人肝癌细胞(HepG2)抗氧化系统的影响.方法:质量浓度0.1 ～ 1.2mg/mL的花色苷作用于HepG2细胞,MTT法检测HepG2细胞生长抑制率;检测各组细胞内抗氧化酶活性和谷胱甘肽、丙二醛的含量变化;采用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化.结果:随着花色苷质量浓度的增加,HepG2细胞的抗氧化酶(T-SOD、GSH-PX)活性显著降低;谷胱甘肽(GSH)含量下降,丙二醛(MDA)及活性氧的含量上升.结论:山桃稠李果实花色苷能够明显的降低HepG2细胞的抗氧化能力.     

利用废革屑制备不同分子量肽-Zn螯合物的工艺探究

本文主要通过不同用量的碱对废革屑进行水解,制备不同分子量的多肽1、多肽2、多肽3,利用GPC测定3种多肽分子量,并将多肽和Zn(CH3COO)2进行螯合反应来制备多肽-Zn金属螯合物。设计单因素实验,考察了pH、反应温度、反应时间、多肽-Zn质量比等因素对螯合反应的影响。确定了Zn(CH3COO)2与多肽螯合的最佳条件。多肽1的最佳螯合条件:多肽-Zn比为7∶1,反应时间60 min,反应温度为60℃,pH为8,最佳条件下的螯合率为66.83%;多肽2的最佳螯合条件:多肽-Zn比为7∶1,反应时间60 min,反应温度为60℃,pH为8,最佳条件下的螯合率为75.33%;多肽3的最佳螯合条件:多肽-Zn比为6∶1,反应时间60 min,反应温度为60℃,pH为7,最佳条件下的螯合率为82.56%;最后,对多肽-Zn螯合物进行红外光谱分析表征,结果表明Zn离子成功螯合到多肽上,得到Zn肽螯合物。     

n-6/n-3多不饱和脂肪酸比例对HepG2细胞脂代谢的影响

本文研究了不同比例n-6/n-3多不饱和脂肪酸对HepG2细胞影响,通过体外培养细胞60μM不同比例LA/ALA培养24 h,通过反转录PCR研究不同比例LA/ALA对HepG2细胞SREBP-1、FAS、HMG-CR、LDLr和Apo B蛋白等脂代谢相关基因及蛋白表达量的影响。结果表明在组1(LA)、组2(10:1 LA/ALA)、组3(5:1 LA/ALA)、组4(1:1 LA/ALA)、组5(1:5 LA/ALA)、组6(1:10LA/ALA)和组7(ALA)7组比例中,1:1 LA/ALA比例处理细胞效果最佳,此比例脂肪酸通过下调HepG2细胞SREBP-1和FAS基因的表达来降低细胞TG的含量;下调HMG-CR基因的表达,上调LDLr基因的表达来降低细胞TC和LDL-C含量;通过上调SR-B1基因表达增加胆固醇逆转运,从而实现对HepG2脂代谢的有效调控。此多不饱和脂肪酸体外营养评价模型,为n-6/n-3多不饱和脂肪酸最佳营养比例推荐及食用植物油中多不饱和脂肪酸比例营养评估提供理论依据。     

核桃多肽结构表征及抗氧化活性

以核桃粕为原料,复合酶酶解制备核桃多肽,并通过超滤分离获得不同分子质量的核桃多肽,进行结构表征和实验分析,探究核桃多肽的抗氧化活性及其对氧化损伤HepG2细胞的保护作用。结果表明,分子质量<1 kDa核桃蛋白水解产物抗氧化活性最强,其羟自由基清除能力的半抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC₅₀)值为11.47 mg/mL、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力的IC₅₀值为35.67μg/mL、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力的IC₅₀值为49.72μg/m L。同时,<1 kDa核桃多肽组分能够减少Hep G2细胞内活性氧含量,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力。核桃多肽在225 nm波长处有最大吸收峰。核桃多肽形状不规则、表面光滑、结构致密,有大量粗糙纹路和孔隙。核桃多肽的二级结构中无规卷曲(36.5%)和β-折叠(36.6%)相对含量最高。综上,<1 kDa核桃多肽对...     

山莴苣苦素改善FFA诱导的HepG2细胞脂肪变性及氧化应激的研究

目的:研究山莴苣苦素对游离脂肪酸(FFA)诱导的HepG2细胞脂肪变性的改善作用,并初步探讨其可能作用机制.方法:观察山莴苣苦素对HepG2细胞活力的影响.采用FFA诱导培养HepG2细胞,构建脂肪变性模型(NAFLD体外模型),并用山莴苣苦素干预72h后,检测各组细胞内脂滴数量、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量...     

山茶油对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂质代谢的影响

目的:探究山茶油对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂质代谢的影响。方法:首先,利用CCK8法测定不同浓度山茶油对HepG2细胞活性的影响以选定适宜浓度进行后续实验。其次,采用不同浓度山茶油对HepG2细胞进行24 h干预,再使用0.5 mmol/L游离脂肪酸处理24 h诱导建立脂肪肝细胞模型。然后,通过油红O染色法判断各组间的脂滴生成情况,并参照相关试剂盒测定各干预下细胞内脂质水平的变化情况。最后,通过qRT-PCR法测定细胞内脂质代谢相关基因的表达,以探讨山茶油调节脂质代谢的作用及其可能的机制。结果:与正常对照组相比,造模干预组细胞内的甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量显著降低(P<0.05);与造模干预组相比,茶油预处理显著逆转了游离脂肪酸诱导细胞内TG、HDL-C和LDL-C含量的变化(P<0.05)。qRT-PCR结果表明,与造模干预组相比,山茶油预处理显著降低了游离脂肪酸诱导的HepG2细胞内脂肪酸转运酶(CD36)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(...     

唐古特白刺果实花色苷改善高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝损伤

目的：研究唐古特白刺果实花色苷对高脂饮食诱导的C57BL/6J小鼠非酒精性脂肪肝损伤的保护作用及其机制。方法：将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组及唐古特白刺果实花色苷组,持续喂养14 周。分别测定各组小鼠体质量、腹部脂肪质量、脂体指数、内脏脂肪质量、体长和Lee’s指数等常规生理指标,谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）活力、总胆固醇（total cholesterol,TC）和总甘油三酯（total triglyceride,TG）质量浓度、低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）和高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）浓度等生化指标,丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力等氧化应激相关指标,以及乙酰辅酶A羧化酶（acetyl coenzyme A carboxylase,ACC）、肝X受体α（liver X receptor-alpha,LXR-α）、脂肪酸转位酶（fatty acid translocase,CD36）和过氧化物酶增殖体激活受体-α（peroxisome proliferator-activated receptor-alpha,PPAR-α）等肝脏脂质代谢相关蛋白质量浓度。结果：与模型组比较,唐古特白刺果实花色苷能明显降低高脂小鼠的体质量、腹部脂肪质量、脂体指数、内脏脂肪质量以及Lee’s指数,降低高脂小鼠血清中AST和ALT活力、TC和TG质量浓度、LDL浓度,提高HDL浓度,降低肝组织中MDA含量和SOD活力,提高GSH-Px活力,降低肝组织脂肪合成相关蛋白ACC、LXR-α和CD36质量浓度,升高脂肪分解相关蛋白PPAR-α质量浓度。结论：唐古特白刺果实花色苷通过调节肝脏氧化应激和脂质代谢,改善高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝损伤。     

酶解与发酵联合处理对黑木耳成分及生物活性的影响

为探究黑木耳液经过酶解与发酵联合处理后的成分和生物活性的变化,将黑木耳液利用纤维素酶、果胶酶酶解,再利用接种比例1:1的植物乳杆菌(L. plantarum)与发酵乳杆菌(L. fermentum)进行发酵,测定经酶解与发酵联合处理前后木耳液的成分变化,通过傅立叶红外光谱(FTIR)和原子力显微镜(AFM)表征其结构;对其抗氧化活性,体外抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性进行评价;建立H₂O₂诱导RAW264.7细胞氧化损伤模型,通过检测抗氧化酶含量来评价不同质量浓度木耳发酵液对细胞氧化损伤的保护作用,以及对RAW264.7细胞增殖、吞噬效果及细胞因子释放量的影响。结果表明,木耳发酵液中总糖含量由未处理木耳液的170.57 mg·g^-1提高到539.14 mg·g^-1,同时,蛋白质含量由未处理木耳液的15.00 mg·g^-1提高到81.28 mg·g^-1;FTIR光谱分析结果表明,木耳发酵液中-OH峰明显变宽;原子力显微镜结果显示,木耳发酵液的三维结构呈密...     

Tandem mass tag-based quantitative proteomics analysis reveals the effects of the α-lactalbumin peptides GINY and DQW on lipid deposition and oxidative stress in HepG2 cells

The objective of this study was to investigate the mechanism by which the α-lactalbumin peptides Gly-Ile-Asn-Tyr (GINY) and Asp-Gln-Trp (DQW) ameliorate free fatty acid–induced lipid deposition in HepG2 cells. The results show that GINY and DQW reduced triglyceride, total cholesterol, and free fatty acid levels significantly in free fatty acid–treated HepG2 cells. Based on proteomic analysis, GINY and DQW alleviated lipid deposition and oxidative stress mainly through the peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) pathway, fatty acid metabolism, oxidative phosphorylation, and response to oxidative stress. In vitro experiments confirmed that GINY and DQW upregulated the mRNA and protein expression of fatty acid β-oxidation–related and oxidative stress–related genes, and downregulated the mRNA and protein expression of lipogenesis-related genes by activating peroxisome proliferator-activated receptor α (PPARα). Meanwhile, GINY and DQW reduced free fatty acid–induced lipid droplet accumulation and reactive oxygen species generation, and enhanced the mitochondrial membrane potential and ATP levels. Furthermore, GINY and DQW enhanced carnitine palmitoyl-transferase 1a (CPT-1a) and superoxide dismutase activities, and diminished acetyl-coenzyme A carboxylase 1 (ACC1) and fatty acid synthase (FASN) activities in a PPARα-dependent manner. Interestingly, GW6471 (a PPARα inhibitor) weakened the effects of GINY and DQW on the PPARα pathway. Hence, our findings suggest that GINY and DQW have the potential to alleviate nonalcoholic fatty liver disease by activating the PPARα pathway.     

基于改善脱水白萝卜复水特性的黑木耳多糖组分筛选及结构鉴定

采用热水浸提法提取黑木耳多糖,对醇沉样品AAP-10、AAP-80分离纯化获得AAP-10-Ⅰ、AAP-10-Ⅱ、AAP-10-Ⅲ和AAP-80-Ⅰ、AAP-80-Ⅱ、AAP-80-Ⅲ六种黑木耳多糖组分,将上述组分真空渗透入白萝卜中,脱水干燥后复水,测定复水比、膨胀性、持水性、色泽、质构参数,考察其对白萝卜复水特性的影响,筛选出对脱水白萝卜复水特性产生较大差异的组分进行结构鉴定。结果表明：与未渗透处理的脱水白萝卜比较,渗透黑木耳多糖均可不同程度提高脱水白萝卜复水特性,其中由AAP-80-Ⅲ渗透的样品效果最好,复水比为7.32、膨胀性为3.22 mL/g、持水性为87.2%,并使脱水白萝卜具有更好的色泽（L*62.68±0.17、a*-1.06±0.02、b*4.23±0.09）及硬度（1 746.14±11.9）N、咀嚼性（1 207.09±9.39）N。AAP-10-Ⅰ也可改善脱水白萝卜复水特性,但差异不显著。对AAP-10-Ⅰ和AAP-80-Ⅲ进行结构鉴定,结果显示二者不含蛋白质及核酸,均具有亲水性官能团,但AAP-80-Ⅲ的分子质量小于AAP-10-Ⅰ,更易渗入白萝卜组织中,且A...     

Oral administration of heat-killed Lactobacillus brevis SBC8803 ameliorates alcoholic liver disease in ethanol-containing diet-fed C57BL/6N mice

We examined the effect of heat-killed Lactobacillus brevis (L. brevis) SBC8803 on the development of alcoholic liver disease using ethanol-containing diet-fed mice. Heat-killed L. brevis was orally administered at a dose of 100 or 500 mg/kg once a day for 35 days. Alcoholic liver injury was examined by measuring the activity of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) in a serum, and the alcoholic fatty liver was assessed from the content of triglyceride (TG) and total cholesterol in the liver. Quantitative RT-PCR was used to examine mRNA expression of tumor necrosis factor (TNF)-alpha, sterol regulatory element-binding protein (SREBP)-1, SREBP-2, and peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) in the liver, as well as E-cadherin, Zonula occludens 1 (ZO-1), and heat shock protein (Hsp) 25 in the small intestine. Oral administration of L. brevis significantly inhibited an increase in the level of serum ALT and AST, as well as the content of TG and total cholesterol in the liver caused by ethanol intake. L. brevis supplementation suppressed the overexpression of TNF-alpha, SREBP-1, and SREBP-2 mRNA in the liver induced by ethanol intake and up-regulated the expression of Hsp25 mRNA in the small intestine. These results suggest that L. brevis ameliorated the ethanol-induced liver injury and the fatty liver by suppressing the up-regulation of TNF-alpha and SREBPs in the liver. We speculate that the inhibition of TNF-alpha and SREBPs up-regulation by L. brevis is due to the inhibition of gut-derived endotoxin migration into the liver through the enhancement of intestinal barrier function by the induction of cytoprotective Hsps.     

黑木耳多糖降血脂作用的研究

本试验研究了黑木耳多糖的降血脂作用。采用不同浓度黑木耳多糖对高脂模型小鼠进行试验,研究黑木耳多糖对高脂模型小鼠甘油三酯(TG),总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDLC)和低密度脂蛋白(LDL-C)的影响。结果表明,黑木耳多糖组小鼠的血清甘油三酯(TG),总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)均不同程度低于高脂模型组,而高密度脂蛋白(HDL-C)却极其显著高于高脂模型组,提示黑木耳多糖确具显著的降血脂作用。     

黑木耳多糖的结构组成及其免疫活性研究

目的:对高温蒸汽浸提法提取得到的黑木耳多糖进行结构解析,并探究其在免疫功能方面的活性。方法:通过气相色谱(GC)、红外光谱(FT-IR)、刚果红实验等对其结构进行分析,建立RAW264.7巨噬细胞的免疫模型以探究其免疫刺激活性。结果:黑木耳多糖主要由鼠李糖、甘露糖和葡萄糖组成,其具有和免疫活性相关的β-构型糖苷键和三股螺旋构象。黑木耳多糖可以促进巨噬细胞的增殖,增强巨噬细胞的吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮的分泌及细胞因子IL-6、TNF-α的释放。结论:黑木耳多糖具有与免疫相关的多种结构,对巨噬细胞具有强烈的刺激作用,在用作潜在的免疫刺激剂方面具有广阔的前景,黑木耳也可作为调节人类免疫力的功能性食品发挥巨大的应用价值。     

普洱茶茶色素对HepG2细胞脂质代谢的影响及作用机理

以正常培养和油酸诱导培养的人肝癌细胞系(human hepatocellular liver carcinoma cell line,Hep G2)细胞为模型,通过测定普洱茶茶色素对Hep G2细胞内甘油三酯(triglyceride,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)含量,细胞中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein 1c,SREBP-1c)、三磷酸腺苷结合转运子A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)、胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)的转录水平,磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phospho-AMPactivated protein kinase,p-AMPK)的蛋白表达水平研究普洱茶茶色素的减肥降脂作用机制。结果显示,普洱茶茶色素能明显降低油酸诱导的Hep G2细胞模型中TG和TC含量,作用程度依赖于普洱茶的作用质量浓度。但对正常培养的Hep G2的TG、TC作用影响不显著。经过普洱茶茶色素作用油酸诱导Hep G2细胞24 h后,能显著下调细胞的FAS和SREBP-1c的m RNA表达水平(P0.05),显著上调ABCA1的转录水平(P0.05),且使CYP7A1的转录水平呈上升趋势,并显著上调p-AMPK蛋白的表达量(P0.05)。因此,普洱茶茶色素可通过调控上述调控因子和酶的表达而改善油酸诱导下Hep G2细胞的脂质代谢水平。     

椴木木耳和袋栽木耳挥发性成分及特征风味物质比较分析

本文采用顶空固相微萃取分别提取椴木木耳、袋栽木耳的挥发性成分,采用GC-MS分析样品的挥发性成分组成,采用相对气味活度值(ROAV)判定特征风味物质,并对椴木、袋栽木耳的特征风味物质进行了比较。结果表明,从椴木木耳中检出45种挥发性成分,主要是醇类、酸类、醛类化合物,相对含量最高的是乙酸,占比14.57%。从袋栽木耳中检出46种挥发性成分,主要是醇类、酸类、醛类化合物,相对含量最高的是正十四烷,占比8.63%。采用ROAV法进行评价,椴木木耳的关键风味物质包括1-辛烯-3-醇、正己醛、壬醛、正庚醛、正戊醛、1-庚醇、正己醇,共7种。袋栽木耳的特征风味物质包括1-辛烯-3-醇、正己醛、正庚酸、1-壬醇、正戊醛、1-辛醇,共6种。