一株蛋白酶产生菌的分离鉴定

从郑州奶牛场土壤样品中分离到一株芽孢杆菌,命名为A—19菌株。该菌株有较高的蛋白酶活性,37℃、pH7．0培养48h后,其蛋白酶活力可达63．5U/mL。菌体生长专性需氧,有运动性,粗糙型菌落,氧化酶试验阳性,DNA（G＋C）的摩尔分数为47％。该菌株的16SrDNA序列与芽孢杆菌属有很高的同源性,Bacillus vallismortis（99．61％）,B．subtilis（98．81％）,B．amyloliquefaciens（98．95％）,B．licheniformis（97．93％）。通过其生理生化特征和16S rDNA序列相似性的系统发育分析,确定A—19菌株属于芽孢杆菌属。该菌的16S rDNA序列已被GenBank收录,序列登陆号为EU561347。     

一株产纳豆激酶菌株的分离筛选及鉴定

对能产生纳豆激酶的菌群进行了筛选,分离得到了1株具有较高纤溶活性的菌株N391,其纳豆激酶相当于1722.4U/mL尿激酶的酶活。利用细菌16S rDNA通用引物对其16S rRNA进行PCR扩增,得到1511bp的片段,该PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过DNA MAN和MAGE3.1软件绘制系统发育树,结果表明,菌株N391的16S rRNA序列(DQ906100)与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的16S rRNA序列的同源性在99%以上,在系统发育树中,菌株N391与Bacillus subtilis在同一分支,且遗传距离最短。结合常规的形态、生理生化鉴定,N391的形态及大部分生理生化特征与Bacillus subtilis极为相似,表明菌株N391属于Bacillus subtilis的1个菌株,由此初步确定该菌在微生物系统发育学上的地位。     

一株产耐高温碱性蛋白酶菌株的筛选

通过形态观察和 16SrDNA序列同源性比较 ,将一株产耐高温碱性蛋白酶菌株GXD990 1初步鉴定为枯草芽胞杆菌 (Bacillussubtilis)。对GXD990 1菌株产蛋白酶的培养条件进行分析表明 ,最佳产酶培养基为 :麦芽糖 3%、NH4 H2 PO4 0 3%、MnCl2 0 0 5%、KCl0 0 5%、Fe2 (SO4 ) 30 0 0 1%、K2 HPO4 0 1% ,pH11 2。在 37℃培养 6 0h后 ,蛋白酶活力达到546 5U/mL发酵液     

一株产海藻糖合酶假单胞菌菌株的分离及鉴定

由薄层层析法检测试验发现,从昆明磷矿粉中分离出的一株真细菌,其粗酶液能将麦芽糖异构化为海藻糖。通过显微观察发现,该菌株为革兰氏阴性菌,无色、杆状、具有鞭毛;菌体直径大小0.6～0.8 μm,长度约1.4～2.0 μm;胞内没有聚-β-羟丁酸（PHB）包含体;最佳生长温度为30 ℃,最适生长pH为7.0。经16S rRNA序列比对、DNA（G+C）mol%和DNA-DNA杂交等分子生物学技术以及生理生化特性检测后,认定该菌株为假单胞菌属（Pseudomonas sp.）一种,将其命名为BIE-1。该菌株增加了假单胞菌属菌种多样性,为海藻糖生物合成真细菌菌株提供了新的选择。     

一株产酯酶海洋细菌的筛选及酯酶性质的研究

在培养基中添加三丁酸甘油酯和橄榄油等特异底物,以罗丹明B作指示剂,从海水中筛选出产酯酶的菌株LJ-7。生理生化鉴定该菌株为芽孢杆菌。发酵Bacillus LJ-7,研究其酯酶的酶学性质表明:此酯酶为碱性酯酶,最适作用温度和pH分别为40℃和8.0,K+和Mn2+对酯酶酶活力有强烈的抑制作用,而Cu2+和Fe2+对酶活的促进作用明显。     

16S与gyrB基因联合建树快速鉴定一株解淀粉芽胞杆菌

在保守序列高度相似的细菌鉴定中,单独使用16S rDNA/RNA序列进行比对和构建进化树通常无法准确鉴定到种,需要增加测序基因数并对多基因进行分析。为实现快速鉴定,课题组对16S与gyrB基因联合建树的方法进行了研究,将土壤中筛选的1株具有淀粉水解酶活性的杆菌HX2016004,分别用通用引物扩增16S和gyrB基因并测序,在Genbank进行序列比对后,选择各菌种保藏中心具有相似16S和gyrB基因的菌株,取其16S和gyrB基因序列,采用Paup^*4. 0构建进化树。使用16S与gyrB拼接序列构建的进化树中属于同一种的菌株聚合在1枝,分类结构准确,其中HX2016004与解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)聚合在1枝,鉴定为解淀粉芽胞杆菌。经生理生化试验验证,该菌株与解淀粉芽胞杆菌特征完全一致,使用16S和gyrB基因联合建树得到的鉴定结果准确且快速简便。通过对Genbank和EZBiocloud已知序列菌株的分析,16S和gyrB基因联合建树的方法普遍适用于解淀粉芽胞杆菌的鉴定。     

广西市售婴儿食品中克罗诺菌分离株基因特征及进化分类鉴定

目的分析广西市售婴儿食品中的克罗诺菌分离株的种类、表型和基因特性。方法将保存的试验菌株进行复苏,通过API 20E生化条和omp A基因扩增检测进行初步鉴定,扩增16S r RNA基因后进行测序,将获得的全16S r RNA基因序列在Gene Bank数据库上比对,构建进化树,确认是否为克罗诺菌。将试验菌接种于显色平板观察其表型和黄色素的产生情况,通过手工生化进行分型,确定其种属。结果 9株分离菌确定为克罗诺菌,有5种生化型,属于4个克罗诺种。检出Cronobacter sakazakii 6株菌,C.malonaticus、C.muytjensii和C.dublinensis各有1株;7株菌符合API 20E鉴定结果,9株分离菌均可检测到omp A基因。结论广西市售婴儿食品中克罗诺菌的污染以C.sakazakii为主,生化表型、种属及基因型具有多样性;鉴定时仅以单一的生化或其他表型作为判别依据存在很大的局限,需辅以分子生物学手段加以鉴别。     

鸡汤中一株耐热菌的分离与鉴定

实验室自制肉制品(鸡肉汤)中分离得到一株耐热菌,进行菌落形态、生理生化特征鉴定,并采用Biolog快速鉴定结合16S r DNA序列分析两种方式鉴定,16S r DNA序列分析结果表明此菌株属于芽孢杆菌属,Biolog快速鉴定结果显示此菌株属于芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌。因此导致鸡汤高温加热后仍腐败变质的菌株为枯草芽孢杆菌。     

碱性蛋白酶产生菌的筛选鉴定及培养优化

通过对筛选的产碱性蛋白酶菌株进行形态观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析鉴定,确定高活力菌株为解淀粉芽孢杆菌.发酵碳源、氮源和金属盐的优化,确定优化培养组分.对接种体积分数、培养温度和培养pH进行研究,确定最佳培养条件.在最优条件下培养18h后获得最大酶活力为395.18 U/mL,产酶能力比优化前提高了2.55倍.该研究为深入研究工业发酵生产碱性蛋白酶提供了参考.     

一株产壳聚糖酶芽孢杆菌的分离及鉴定

采用透明圈法,从黄河三角洲地区的腐败落叶分离出9株产壳聚糖酶的菌株。再经菌株分离纯化、液体发酵复筛及酶活研究,确定其中1株为壳聚糖酶高产菌株,命名为XHT-0903。通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析进行菌株鉴定,确定XHT-0903为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。其液体发酵酶活力达20 U/mL,具有较好的开发及应用价值。     

高活性生淀粉糖化酶菌株F7的鉴定及其酶学性质的研究

对高活性生淀粉糖化酶菌株F7的归属和酶学性质进行了鉴定和探讨,从菌体形态特征和分子生物学特征方面对F7进行了鉴定,从F7的酶活力、酶对生淀粉的吸附力、最佳的作用温度、pH等方面探讨了F7的生淀粉糖化酶性质。结果表明:菌株F7归属藻菌纲(Phycomycetes),毛霉目(Mucorales),毛霉科(Mucoraceae),根霉属(Rhizopus Ehrenberg),米根霉种(Rhizopus oryzae)。其酶不仅对生淀粉吸附力大,消化能力强,而且其兼有的强酸性蛋白酶活力低;该酶作用pH范围是3.3～5.3;作用温度是35～45℃,酶活力稳定,在低温条件下酶液能保存较长时间;该酶对大米生淀粉的吸附率高,糖化能力也强。     

产蛋白酶菌株的鉴定及酶学特性

通过形态学观察、生理生化实验以及16S rDNA基因序列分析对分离自味精糖化废渣中的产蛋白酶菌株NX-PB17进行鉴定,并对其蛋白酶特性进行研究。结果表明：菌株NX-PB17为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其蛋白酶最适酶解温度为50℃,最适pH值为7.0,并且具有良好的热稳定性和pH值稳定性。     

一株产普鲁兰酶菌株的筛选鉴定、酶学性质及海带多糖酶解产物的抗氧化活性

本研究从连云港海泥中筛选产普鲁兰酶菌株,利用形态学、生理生化特征、基因序列(16S rRNA和 gyrB)进行分析鉴定。利用产酶菌株发酵制备普鲁兰酶,初步纯化后分析其酶学性质。利用该普鲁兰酶粗提物对海带多糖进行水解,并对其水解产物进行抗氧化活性分析。结果表明:筛选得到一株产普鲁兰酶的巨大芽孢杆菌P6(Bacillus megaterium),经发酵纯化后普鲁兰酶比活力为62.3 U/mg,分子量约为43 kDa。该酶的最适反应温度为45 ℃,最适pH为6.5,在温度40 ℃下保温5 h,相对残余酶活达95%以上,而60 ℃下保温1 h,酶全部失活。在pH6~7.5之间保温12 h后,该酶仍有40%以上的相对残余酶活。DPPH和·OH自由基清除实验表明:海带多糖经普鲁兰酶水解后抗氧化活性显著增强(p<0.05),为普鲁兰酶在食品工业中的应用研究提供了新的方向。     

1株乳酸链球菌素产生菌的筛选鉴定及其抑菌特性的研究

从白菜叶上分离得到21株对乳酸链球菌素(Nisin)有抗性的乳酸菌株,采用杯碟法从中筛选得到抑菌活性较强的菌株T0625,经鉴定该菌株为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.Lactis)。经测定,发酵液经加热处理,在低pH条件下能够保持较好的抑菌活性,对革兰氏阳性细菌具有明显的抑制作用,但对革兰氏阴性细菌、酵母菌和霉菌不表现抑制作用。研究还证实,T0625的发酵产物的抑菌活性不受胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响。经提取纯化,确定抑菌物质为乳酸链球菌素。     

一株沼泽红假单胞菌的鉴定及产类胡萝卜素的研究

作者通过革兰氏染色、鞭毛染色、扫描电镜对一株光合细茵进行了形态学特征观察,并通过平板培养、液体培养特征、生理生化试验来了解其培养特征和生理生化特征;同时还通过双光束紫外一可见光谱仪分析了其活体细胞和细胞色素的光谱吸收行为.研究了其产类胡萝卜素的培养基和培养条件,并通过高效液相色谱仪对类胡萝卜素成分进行了分析.结果表明,此菌株为革兰氏阴性、有极生鞭毛,细胞为杆形,有集束生长的习惯,不对称出芽分裂,细胞大小为(0.6～2.5)μm×(0.6～5.0)μm;单茵落在固体平板培养基上呈淡黄色,表面光滑湿润,边缘整齐;在液体培养基上的培养物为深红色;对氨基苯甲酸、酵母浸出物对菌株的生长有显著刺激作用;菌体细胞色素含有类胡萝卜素和叶绿素a.根据这些形态学和生理生化特征,初步确定该菌株为沼泽红假单胞菌(Rhod0PsPdomonas palustris).此茵在培养基组成为(g/L):KHz PO4 0.6,K2 HPO4 0.9,醋酸钠2.0,氯化铵1.5,酵母浸膏0.5,NaCl 0.5,硫酸镁0.3,氯化钙0.2.在28℃、1 500 lx,pH6.5～8.5条件下培养能够快速生长繁殖.通过HPLC分析表明:类胡萝卜素提取液中成分至少有10种,其中5种是主要成分.     

海洋低温过氧化氢酶菌株的筛选及酶学性的研究

从渤海湾海域海泥海水混合物中分离获得一株产低温过氧化氢酶菌株CZA1202,通过菌株的形态特征、生理生化和16 S rDNA序列鉴定为Serratia liquefaciens.对其醇学性质进行初步研究,CZA1202所产过氧化氢酶最适反应温度30℃,最适pH 7.0,在pH7.0～9.0范围内较稳定,在35℃保持60 min条件下,酶活可保留70％.初始酶活达到107.8 U/mL.     

柚苷酶产生菌的分离筛选及鉴定

利用柚苷酶平板透明圈筛选方法,加大透明层与未分解层的颜色对比,提高菌种筛选的效率,改进柚苷酶产生菌的选育模型。筛选出1株柚苷酶生产菌株A13。对该菌株进行摇瓶发酵,测定酶活力达到365.31U/mL。通过对该菌株形态特征、培养特征的观察,对照《真菌鉴定手册》,初步判定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)。     

产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及酶学性质研究

从自然发酵酱醅中筛选到一株产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶的菌株MT-0204,通过生理生化反应和分子生物学技术鉴定其为黑曲霉。大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶最适pH值在5.0～5.5之间;具有热敏性,45℃时酶活最高;K 、Ca2 、Fe2 、Mg2 和Mn2 可以提高该酶活性,Ag 和Hg 强烈抑制该酶的活性;Km值Vmax值分别是22.47mmol/L和5.2mmol/min·mg。