北五味子多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

北五味子是我国传统中药材,近年来因其具有的护肝、安神等多种功效而得到了广泛地关注和研究。本实验提取北五味子多糖并超滤处理获得不同分子质量的多糖组分Sp1(100 ku)和Sp2(10~100 ku),分别按不同质量浓度对小鼠巨噬细胞系RAW264.7孵育处理,通过检测细胞增殖活性、吞噬能力、NO分泌水平及培养基中细胞因子(细胞白介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α))的含量,并与脂多糖实验组进行对比,评价北五味子多糖在免疫调节方面的作用。结果显示,较低分子质量的Sp2组分活性较强,在500.00μg/m L以上时,可以对小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬能力、NO分泌水平、IL-1β和TNF-α含量有普遍的促进作用,显现出良好的免疫提高潜力,而较高分子质量的Sp1组分活性较弱。     

硒化低聚氨基多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响。用噻唑蓝比色法分别考 察硒化低聚氨基多糖、Na2SeO3对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并观察巨噬细胞形态的变化。通过中性红 法、酶联免疫吸附测定法及实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法分别检测巨噬细胞的吞噬能力、肿瘤坏死因子 （tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-6及IL-10细胞因子的分泌量及其mRNA表达水平。 结果表明：硒质量浓度为100～1 000 μg/L时,硒化低聚氨基多糖对细胞的相对增殖率无显著影响;而Na2SeO3的硒 质量浓度超过200 μg/L即对巨噬细胞RAW264.7产生细胞毒性作用。硒化低聚氨基多糖能增强巨噬细胞吞噬活性, 显著提高RAW264.7细胞TNF-α、IL-6及IL-10分泌量及其mRNA表达水平,且效果比Na2SeO3处理组、低聚氨基多糖 处理组及Na2SeO3＋低聚氨基多糖复合添加组好。实验结果提示硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有一 定的免疫调节作用。     

锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用的影响

目的 研究锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。方法 以巨噬细胞RAW264.7为研究对象, 设置空白对照组、阳性(LPS)对照组、锁阳多糖给药组(25、50、100、200、400 μg/mL), 用CCK-8法测定细胞增殖活性, 中性红法测定其吞噬活性; Griess法测定其对NO分泌量的影响; ELISA法测定其IL-6和TNF-α的释放能力。结果 与空白组比较, 不同浓度(25~400 μg/mL)锁阳多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖(P<0.05或P<0.01), 干预24 h和48 h的增殖活性明显高于干预6 h和12 h的增殖活性(P<0.05); 锁阳多糖(25~ 400 μg/mL)能显著促进细胞的吞噬活性(P<0.05); 干预48 h后, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)的NO分泌量显著高于空白组和LPS组(P<0.05); 与空白组和LPS组相比, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)能显著促进细胞IL-6和TNF-α的释放(P<0.01)。结论 锁阳多糖在一定浓度范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。     

不同分子质量阿胶组分对RAW264.7小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

为了探究阿胶不同分子质量组分免疫活性的强弱,通过Superdex 75pg葡聚糖凝胶柱将阿胶分为分子质量<10 kDa、10～30 kDa、>30 kDa(F1、F2和F3)的3个组分,并比较它们刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞释放NO和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的能力,然后以免疫活性最强组分为研究对象,研究其对巨噬细胞的激活作用及其机制。结果表明,在同等浓度下,F2组分比F1和F3组分能刺激巨噬细胞释放更多的NO和TNF-α,且其可以激活RAW264.7细胞,促进细胞释放活性氧(reactive oxygen species, ROS)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),说明阿胶中10～30 kDa的组分(F2)具有相对较强的免疫活性。此外,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q-PCR)结果表明F2可以促进细胞TNF-α、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和Toll样受体4(Toll-lik...     

不同食用菌多糖复配物对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

目的:探究5种食用菌多糖,包括银耳多糖(Tremella fuciformis polysaccharide)、茯苓多糖(Poriacocos polysaccharide)、香菇多糖(Lentinan)、猴头菇多糖(Hericium edodes polysaccharide)和竹荪多糖(Dictyophora in...     

5种食用菌多糖及复配多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

探究银耳多糖、茯苓多糖、香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖5种食用菌多糖及其两两复配得到的10种复配多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用.将RAW264.7细胞分为正常对照组、阳性组和样品(不同浓度的银耳多糖、茯苓多糖、香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖及其10种复配多糖)处理组,通过检测巨噬细胞的细胞活力、肿瘤坏...     

樟树果实多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

樟树被证明具有许多生物活性,包括抗真菌、抗氧化、抗菌、抗过敏、抗炎活性。然而,很少有研究报道樟树果实多糖(CCFP)。本研究的目的首先从樟树果实中分离出CCFP,然后通过体外实验评估其对RAW264.7巨噬细胞免疫调节活性。结果表明,CCFP可显著提高RAW 264.7细胞内一氧化氮(NO)的浓度和细胞因子如前列腺素E_2(PGE_2)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌,在给药浓度为100μg/m L时,NO、TNF-α和PGE2的分泌量达到最大,分别为53.53±4.25μM、1008.32±35.23 pg/mL和434.56±25.23pg/m L。反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析结果表明,CCFP也能够提高诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)和TNF-α的表达。进一步的分析表明,CCFP通过与Toll样受体4(TLR4)蛋白结合,迅速激活细胞外信号调节激酶(ERK)、转录激活因子激活蛋白-1(AP-1)和核因子(NF)-κB。这些结果表明,CCFP可以提高免疫力,在功能食品的开发中,可以作为一个潜在的免疫调节剂。     

豆渣中水溶性大豆多糖提取工艺的研究

采用正交实验法对豆渣中水溶性大豆多糖的提取过程进行研究,实验结果表明,第一次提取过程的优化工艺条件为:固液比为1∶8,提取时间4.5h,温度90℃,提取率为13.74%;整个提取过程的优化工艺条件为:固液比为1∶8,提取时间4.5h×3,温度80℃,提取率为53.96%。     

豆渣中水溶性大豆多糖提取工艺的研究

采用正交实验法对豆渣中水溶性大豆多糖的提取过程进行研究,实验结果表明,第一次提取过程的优化工艺条件为:固液比为1∶8,提取时间4.5h,温度90℃,提取率为13.74%;整个提取过程的优化工艺条件为:固液比为1∶8,提取时间4.5h×3,温度80℃,提取率为53.96%。      

毛酸浆果提取物对RAW264.7细胞的免疫调节作用

该文探讨了毛酸浆果提取物（Physalis pubescens L. Fruits Extract,PPFE）对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用。采用噻唑蓝比色法（MTT）确定细胞毒性和增殖活性,格里斯法（Griess）、酶联免疫法（ELISA）、荧光探针法、中性红吞噬实验测定体外培养的巨噬细胞中一氧化氮（NO）、肿瘤因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）、干扰素-γ（IFN-γ）、活性氧（ROS）含量以及吞噬率;流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡情况,荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测TNF-α、IFN-γ以及IL-6等细胞因子mRNA表达水平。结果显示：运用UHPLC-Q-TOF-MS测定PPFE化学成分分析,共鉴定出14种黄酮类物质。PPFE作用RAW264.7细胞的安全浓度在25~250 μg/mL范围内,与空白组相比,毛酸浆果提取物质量浓度为25 μg/mL时免疫增强效果最佳,其细胞增殖率、NO释放量、吞噬率、相对活性氧水平、TNF-α、IFN-γ、IL-6的分泌量分别为130.53%、27.79 μmol/L、189.88%、137.75%、150.54 pg/mL、119.36 pg/mL、15.41 pg/mL。PPFE治疗组的细胞周期的G0/G1期、S期、G2/M期百分比分别为53.08%、17.40%、29.52%。细胞凋亡率与空白组相比降低了52.80%,同时极显著（p<0.01）上调TNF-α、IFN-γ、IL-6的表达。综上可知,PPFE通过调节RAW264.7细胞吞噬功能、分泌免疫因子、细胞周期分布及凋亡情况,以及上调细胞因子mRNA表达水平,增强RAW264.7细胞免疫调节作用。     

豆渣可溶酸性多糖的分离纯化及结构解析

利用DEAE-Cellulose离子交换色谱柱对豆渣可溶性多糖进行分离纯化,获得了2种电荷均一的水溶性大豆多糖(soluble soybean polysaccharides,SSPS)SSPS-A1和SSPS-A2.进一步对组分SSPS-A1进行凝胶过滤色谱,获得电荷和分子质量均一的多糖组分SSPS-A1-c.对其进...     

蛹虫草多糖调节小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的分子机制

多种真菌多糖近年来因其免疫调节活性成为保健食品领域研究的热点。本实验以食药用真菌蛹虫草提取物蛹虫草多糖（Cordyceps militaris polysaccharides,CMP）为研究材料,初步探究CMP对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的调节机制。噻唑蓝实验结果显示CMP无细胞毒性,且100、200 μg/mL CMP可以明显增强RAW264.7细胞活性;中性红法、Griess法和酶联免疫吸附检测结果表明25～200 μg/mL的CMP以剂量依赖方式增强RAW264.7细胞吞噬活性并增加一氧化氮（nitric oxide,NO）和白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）分泌,肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌呈先升高后降低的趋势,在100 μg/mL时达到最高值;抑制剂中和实验结果显示当Toll样受体4（Toll-like receptors 4,TLR4）和甘露糖受体（mannose receptor,MR）受到抑制时,CMP诱导的RAW264.7免疫反应显著降低,这表明TLR4和MR均为CMP激活巨噬细胞的受体;此外,Western blot结果显示丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）信号通路也参与CMP诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β。表明TLR4和MR/MAPK信号传导途径在CMP诱导巨噬细胞RAW264.7产生免疫应答时发挥了重要作用。     

野生亚侧耳多糖的提取和对巨噬细胞Raw264.7的免疫调节作用研究

本研究从亚侧耳子实体中分离出水溶性亚侧耳多糖(HSP),通过体外实验评估其对Raw264.7巨噬细胞的免疫调节作用。采用WST-1法检测HSP对巨噬细胞增殖作用的影响,Griess试剂检测一氧化氮(NO)浓度,ELISA法检测HSP对淋巴细胞中一肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE₂)等细胞因子分泌量的影响,反转录聚合酶链式反应分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)、TNF-α和IL-1β的转录水平表达量。结果表明,HSP可显著提高Raw264.7细胞内NO的浓度,在HSP浓度为100.00 μg/mL时,NO的分泌量达到最大值(29.94 mmol/L)。与空白组相比,HSP可以显著提高TNF-α、IL-1β、PGE₂等免疫因子(P<0.05)的分泌量,其中IL-1β、PGE₂的25 μg/mL剂量组中各因子分泌量(31.9524 pg/mL,1.8174 ng/mL)均与LPS(脂多糖)阳性对照组相接近。反转录聚合酶链式反应分析结果表明,HSP能够提高iNOS和COX-2的蛋白表达量。HSP具有免疫调节的功能,可以作为免疫调节剂添加到功能性食品和药品中。     

重组黑芝免疫调节蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7向M1型分化的影响

真菌免疫调节蛋白具有免疫调节和抗肿瘤功效。巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中发挥重要的作用,M1型巨噬细胞具有很强的肿瘤杀伤能力和抗原递呈能力。本研究通过真菌免疫调节蛋白在体外对小鼠巨噬细胞RAW264.7经典活化M1型的影响探究其抗肿瘤的作用机制。利用重组黑芝免疫调节蛋白（recombinant Ganoderma atrum immunomodulatory protein,rFIP-gat）干预RAW264.7细胞,用中性红吞噬实验测定细胞吞噬能力,一氧化氮（nitric oxide,NO）检测试剂盒测定NO浓度,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的mRNA相对表达量。结果表明,rFIP-gat以剂量依赖的方式增强RAW264.7细胞的吞噬能力,促进其产生NO,并提高iNOS和TNF-α基因的转录。因此,rFIP-gat可能具有诱导RAW264.7细胞向M1型巨噬细胞分化的作用。     

大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物对RAW264.7细胞的免疫调节作用

目的：研究大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的免疫调节作用。方法：将小鼠RAW264.7细胞分为空白组、脂多糖组和样品组（大豆分离蛋白、杏鲍菇多糖、大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖混合物及共价结合物）,分别测定并比较各组细胞的巨噬细胞活力、中性红吞噬活性、一氧化氮释放量、细胞因子分泌及其mRNA表达水平。结果：当质量浓度在0～50?μg/mL范围时,大豆分离蛋白、杏鲍菇多糖、大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖混合物和大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物组4?种样品对细胞活力没有显著影响（P＞0.05）。当大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物的质量浓度达到100?μg/mL时,能够显著提高细胞的中性红吞噬活性、一氧化氮释放量以及肿瘤坏死因子-α、白细胞介素1β（interleukin 1β,IL-1β）和IL-6的含量及这3 种细胞因子的mRNA表达水平（P＜0.05）,表明大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物能显著提升小鼠巨噬细胞系RAW264.7的免疫调节能力,且存在剂量依赖效应。结论：本研究可对大豆分离蛋白进行糖基化改性,为谷物蛋白的深加工和开发利用提供一定的理论依据。     

Comparison of Immunomodulatory Effects of Fresh Garlic and Black Garlic Polysaccharides on RAW 264.7 Macrophages

Garlic has a long history to be used for medicine and food purposes. Black garlic, the fermented product of fresh garlic, is considered with better biological activities, such as antioxidant activity, and is developed as an increasingly popular functional food. Polysaccharides are the major components of fresh and black garlic, and immunomodulatory activity is one major pharmacological effect of polysaccharides. Therefore, chemical characteristics and immunomodulatory effects of polysaccharides from fresh and black garlic are investigated and compared in vitro for the 1st time, in order to reveal their molecular and pharmacological differences. It is demonstrated that the molecular weights of polysaccharides from the 2 sources and molar ratios of monosaccharides after acid hydrolysis are greatly variant. The effects of polysaccharides from 2 sources on RAW 264.7 macrophages functions, including promotion of phagocytosis, release of NO, and expressions of several immune‐related cytokines (including interleukin [IL]‐6, IL‐10, tumor necrosis factor alpha, and interferon gamma), were different from each other. The results indicated that fresh garlic polysaccharide exhibited stronger immunomodulatory activities than that of black garlic. Moreover, it is revealed that fructan might be the bioactive component in garlic and it is indicated that during the fermentation treatment, fructan constituents of garlic has degraded, and basically no immunomodulatory effect can be found in black garlic polysaccharides.     

黑木耳酸性多糖对高血脂症小鼠的降血脂作用

目的：初步探究黑木耳酸性多糖对高血脂症小鼠的降血脂作用。方法：采用不同剂量的黑木耳酸性多糖对高脂模型小鼠进行灌胃,研究黑木耳酸性多糖对高脂模型小鼠血脂四项及相关酶类的影响。结果：与高脂模型组相比,黑木耳酸性多糖组小鼠体质量明显降低,肝脏指数和动脉粥样硬化指数（atherosclerosis index,AI）也明显降低;小鼠血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）水平均明显降低,HDL-C水平则显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）;黑木耳酸性多糖中、高剂量组小鼠的总超氧化物歧化酶（total superoxidedismutase,T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力均极显著高于高脂模型组（P＜0.01）。结论：黑木耳酸性多糖可以明显降低高血脂症小鼠血脂水平,改善其因摄入过多脂质而导致肝脏脂肪堆积及动脉粥样硬化程度,并对高血脂症引起的脂质过氧化损伤具有防护作用。