Bcl-xl和p53基因在条斑紫菜多糖抑制胃癌BGC-823细胞增殖中的作用

目的:探讨Bcl-xl、p53基因在条斑紫菜多糖抑制BGC-823细胞增殖和诱导凋亡中的作用。方法:将不同浓度条斑紫菜多糖作用于BGC-823细胞,利用MTT法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测Bcl-xl、p53基因表达量的变化、流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果:条斑紫菜多糖能抑制BGC-823细胞增殖及诱导细胞凋亡,并上调p53和降低Bcl-xl表达。结论:条斑紫菜多糖抑制人胃癌细胞增殖、促进凋亡,其机制可能与激活p53、抑制Bcl-xl表达有关。     

条斑紫菜多糖对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨Fas、Bcl-2基因在条斑紫菜多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用。方法:不同浓度条斑紫菜多糖作用于MCF-7细胞48h后,荧光显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果条斑紫菜多糖能诱导MCF-7细胞凋亡,并且上调Fas和降低Bcl-2表达。结论:条斑紫菜多糖促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与激活Fas、抑制Bcl-2表达有关。     

姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡的影响

目的:探讨姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及其作用机制。方法:将Wistar大鼠随机分为5组,A:正常对照组;B:模型组;C:8%姬松茸多糖组;D:4%姬松茸多糖组;E:2%姬松茸多糖组。8周后,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,RT-PCR观察Bax基因、Survivin基因的表达。结果:与模型组比较,姬松茸多糖组视网膜细胞凋亡明显减少,Survivin表达上调,Bax表达降低。结论:姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜组织保护作用的机制可能与抑制视网膜组织细胞凋亡及上调Survivin基因,降低Bax基因表达有关。     

海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用及其机制

目的：探讨不同质量浓度的海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用。方法：分别以质量浓度为5、10、20、30 mg/mL的海带多糖处理Bel-7402细胞,48 h后观察海带多糖对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-FITC试剂盒检测细胞凋亡状况,酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测Caspase-3活性,Western blotting法检测细胞内Caspase-3和甲胎球蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）表达量。结果：海带多糖对Bel-7402细胞的增殖有明显抑制作用,最佳抑制剂量为30 mg/mL;随着海带多糖质量浓度的升高,细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）,海带多糖处理组Bel-7402细胞内的Caspase-3表达水平同正常对照组细胞相比呈上升趋势,差异具有统计学意义（P＜0.05）;AFP蛋白表达水平呈下降趋势。结论：海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖具有抑制作用,其机制可能是激活Caspase-3,引起细胞凋亡和AFP蛋白表达水平下降所致。     

羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和诱导细胞凋亡研究

以黑脉羊肚菌多糖为原料,研究羊肚菌多糖对人乳腺癌细胞MDA-MB-231（以下简称MDA）增殖和凋亡的影响。结果表明：在无细胞毒性范围内,羊肚菌多糖能显著抑制人乳腺癌细胞MDA的增殖,半数有效浓度（median effective concentration,EC50）值为0.096 mg/mL,同时人乳腺癌细胞MDA表现出多种细胞凋亡的形态学变化。免疫印迹检测实验结果显示,羊肚菌多糖能抑制B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达,促进Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达,同时增加Bax/Bcl-2蛋白表达比值,并呈现出剂量依赖效应。说明羊肚菌多糖能抑制人乳腺癌细胞MDA增殖,促进细胞凋亡。     

紫甘薯汁抗肿瘤活性及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究

目的:研究紫甘薯汁的抗肿瘤活性及其诱导肝癌细胞HepG2凋亡机制。方法:采用Alamar Blue、倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电镜、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR和Western blotting法检测不同体积分数的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞的增殖抑制作用及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究。结果:与对照组相比,体积分数5%和10%的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞具有抑制作用,呈体积分数依赖性;作用HepG2细胞48h后,能观察到细胞皱缩和凋亡小体以及凋亡细胞典型的梯状DNA条带。RT-PCR和Western blotting法检测结果显示,紫甘薯汁可以诱导HepG2细胞中Fas、FADD、Caspase-3、Caspase-8和p53 mRNA表达水平上调和蛋白表达量增加,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性裂解片段明显增高且Caspase-3酶活性显著提高。结论:紫甘薯汁体外对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过细胞表面死亡受体途径诱导HepG2细胞凋亡,同时p53在此凋亡过程中也起着重要的作用。     

醋酸棉酚抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖

目的研究醋酸棉酚(gossypol acetic acid,GAA)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其可能作用机制。方法采用MTT法检测GAA对MG-63细胞的增殖抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核的形态变化,流式细胞仪分析细胞凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达情况。结果 GAA对MG-63细胞具有显著的增殖抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;Hoechst 33258荧光染色可观察到明显核固缩、染色质凝集等细胞凋亡现象;流式细胞仪检测发现细胞凋亡相关基因Bcl-2表达下调,而Bax表达则相对上调。结论 GAA能够抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax实现。     

莲房原花青素通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导HepG2细胞凋亡

研究莲房原花青素(LSPCs)诱导肝癌Hep G2细胞凋亡的机制。利用MTT法检测LSPCs对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用,Hochest 33258染色观察凋亡细胞的核形态,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,彗星实验用来检测细胞DNA损伤,JC-1染色用来检测线粒体膜电位,Western blotting法检测细胞凋亡蛋白水平的表达。LSPCs作用细胞后,显著抑制Hep G2细胞的增殖;细胞凋亡征象明显,核染色体高度凝聚,细胞核碎裂,核固缩,染色质凝聚的细胞数从3.86%增至42.76%(p0.01);活细胞率急剧减少,而凋亡率从5.32%增至67.05%(p0.01);LSPCs诱发细胞产生DNA损伤,线粒体膜电位下降,导致Cytochromec、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量增加,Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2蛋白的表达量下调,Bax/Bcl-2的比值上升。而凋亡抑制剂Z-VAD能够削弱LSPCs对Hep G2细胞增殖的抑制作用,显著下调细胞核聚缩,抑制线粒体损伤及Caspase相关蛋白的表达量,最终阻断LSPCs的致凋亡作用。由此得出结论,LSPCs可通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导人肝癌细胞凋亡。     

醋酸棉酚抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖

目的:研究醋酸棉酚(gossypol acetic acid,GAA)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其可能作用机制.方法:采用MTT法检测GAA对MG-63细胞的增殖抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核的形态变化,流式细胞仪分析细胞凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达情况.结果:GAA对MG-63细胞具有显著的增殖抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;Hoechst 33258荧光染色可观察到明显核固缩、染色质凝集等细胞凋亡现象;流式细胞仪检测发现细胞凋亡相关基因Bcl-2表达下调,而Bax表达则相对上调.结论:GAA能够抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax实现.     

槟榔多糖对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

采用CCK-8法测定细胞的存活率、Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,利用蛋白质免疫印迹检测人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)中抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax及细胞间紧密连接蛋白的表达情况,研究槟榔多糖对DMNQ诱发Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果表明：槟榔多糖能显著抑制促凋亡蛋白Bax的表达并同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制DMNQ引起的细胞凋亡并减轻内质网应激,显著上调Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin 1的表达,维持细胞紧密连接的完整性,即槟榔多糖能显著改善DMNQ诱导的Caco-2细胞氧化损伤。     

夏枯草提取物对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察夏枯草提取物对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,探讨夏枯草抗肿瘤作用及机制。方法：不同浓度夏枯草作用于食管癌Eca-109细胞,利用MTr法检测细胞增殖抑制率,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;Annexin—V—FITC／PI法检测细胞凋亡率。结果：中高剂量夏枯草抑制食管癌Eca-109细胞增殖,并呈量效和时效关系;使细胞凋亡率增高,同时Bcl-2蛋白减少,Bax蛋白表达增加。结论：夏枯草提取物可抑制食管癌Eca-109细胞增殖,使Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,细胞凋亡增加。     

条斑紫菜多糖与薏米仁多糖复配物的制备及其降血脂功效研究

本文通过对粗粮的筛选,选出最佳粗粮与浡海条斑紫菜进行复配,对其进行吸油量及脂肪酶等降血脂功能性指标的测定进行研究,首先响应面法优化条斑紫菜可溶性多糖的最佳超声波法提取工艺,再在9种粗粮中筛选出最适复配的粗粮种类,再以体外油脂吸附能力即吸油量为指标,筛选出条斑紫菜多糖和粗粮多糖的最佳复配比,最后使用复配物对小鼠脂肪酶进行抑制活性实验。结果表明:超声波法最佳提取条斑紫菜多糖的工艺为:料液比1:25,超声功率为150 W,超声温度60 ℃,超声时间30 min,获得水溶性多糖得率为4.24%±0.19%。筛选9种粗粮中得到薏仁米最适合与条斑紫菜多糖复配,且最佳复配比为1:1,吸油量最大为45.87%±5.27%,对小鼠脂肪酶抑制率为34.67%。本实验为研发新型渤海紫菜降血脂功能性食品提供理论依据。     

条斑紫菜蛋白和多糖的逆流脉冲超声辅助提取技术研究

为了缩短生产周期和提高产品产量,本文采用逆流脉冲超声技术对条斑紫菜中蛋白和多糖进行提取。采用Box-Behnken中心组合设计方法结合响应面分析对脉冲超声辅助提取条件进行优化。研究得到了提取的回归方程,通过回归分析与实验验证。在提取液pH9.0、脉冲超声的工作时间4s和间歇时间2s的条件下,获得紫菜蛋白和多糖逆流脉冲超声辅助提取的最佳工艺条件为:提取时间85min、料液温度40℃、料液比19:1(mg/mL),在此最佳条件下,紫菜蛋白和多糖总得率高达37.26%,其中紫菜蛋白和多糖的得率分别为15.68%和21.58%。通过与传统的浸提法对照实验,发现利用逆流脉冲超声辅助提取紫菜中蛋白和多糖的总得率提高了116.38%,提高幅度显著。     

冲泡过程对条斑紫菜多糖溶出的影响及其动力学研究

基于Fick第二定律,对颗粒状和片状条斑紫菜冲泡过程中多糖的溶出进行动力学分析。测定条斑紫菜冲泡液中多糖溶出随冲泡水温及时间的变化,建立颗粒状和片状条斑紫菜冲泡过程的多糖溶出动力学模型。结果表明在整个冲泡过程中,颗粒状紫菜中多糖溶出率均大于片状紫菜。对于颗粒状紫菜,冲泡水温的影响大于冲泡时间,以363.15 K(90℃)热水或373.15 K(100℃)沸水冲泡20 min,其多糖溶出率达到62.07%和64.05%。实验数据与动力学模型计算值吻合良好(R>0.933);紫菜多糖溶出表观速率常数和扩散系数均随冲泡温度的升高而增加;颗粒状和片状紫菜多糖溶出过程的活化能分别为5.984、1.406 k J/mol;多糖溶出相对萃余率符合指数模型。该动力学模型可为条班紫菜多糖最佳冲泡方式奠定理论基础。      

条斑紫菜多糖的含量测定及其部分理化性质研究

条斑紫菜经脱脂,浸提,除蛋白,醇沉,超滤和脱色得精制多糖,Molish反应和Fehling反应定性鉴定,依次稀释法测定特性粘度,Dodgson法测定硫酸基含量,苯酚–硫酸法测定多糖含量,并用精制多糖测得对半乳糖的换算因子。结果表明,此测定方法简便灵敏,供试液在3h内显色稳定,重现性好,平均回收率为98.26%,RSD=4.77%(n=5),换算因子f=1.35,在18.32～54.96μg范围内呈良好的线性关系,r=0.99945。特性粘度适中[η]=34.26×10-3ml/g,硫酸基含量较高为21.63±0.11%(n=2)。     

超高压处理对条斑紫菜品质的影响

以条斑紫菜为原料,研究不同压力和保压时间的超高压处理对其微生物、色泽及质构的影响。结果表明,压力和保压时间对紫菜微生物的影响显著(P0.05):随着保压时间延长,处理压力升高,菌落总数总体呈下降趋势;保压时间超过15 min后微生物杀灭效果变化不显著;保压时间15min,压力600 MPa,菌落总数降低了2.44lg CFU/g。紫菜硬度随着处理压力的升高先下降后升高,随着保压时间的延长先升高后下降,但压力和保压时间对硬度的影响不显著(P0.05),保压时间15min,压力600 MPa时,紫菜硬度与未处理的紫菜硬度相比变化较小。处理时间对L值无显著变化(P0.05)。超高压处理条斑紫菜,处理压力600 MPa,保压时间15min时,微生物的杀灭效果较好,硬度和色泽也没有较大的变化,利于开发出新鲜高值的紫菜新产品。     

条斑紫菜活性肽的抗氧化作用

以条斑紫菜为原料,使用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶水解紫菜蛋白制备活性肽,采用还原能力、清除羟自由基和二苯代苦味酰基自由基作为抗氧化性评价指标,研究紫菜活性肽的体外抗氧化活性,并测定其分子质量分布。结果表明：3种蛋白酶对紫菜蛋白具有较好的酶解效果,酶解产物具有一定的还原能力;自由基清除率和底物浓度之间具有正相关关系,木瓜蛋白酶酶解活性肽清除羟自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.397mg/mL;胃蛋白酶酶解活性肽清除二苯代苦味酰基自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.261mg/mL;经测定,具有抗氧化活性的小分子肽分子质量分布在148～1963u之间。     

葛根黄酮提取物对HL-60细胞bc1-2和bax基因表达的影响

目的：探讨葛根黄酮提取物对HL-60细胞bcl—2和bax基因表达的影响。方法：用RT—PCR和蛋白质免疫印迹技术检测葛根黄酮提取物、葛根素和大豆甙元处理HL-60后，对bcl—2和bax基因的mRNA和蛋白表达的影响。结果：葛根黄酮提取物、葛根素和大豆甙元处理HL-60细胞后能够上调bax mRNA表达水平，下调bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达，且随着处理时间的延长其诱导下调和上调能力增强。结论：葛根黄酮提取物诱导HL-60细胞凋亡与其下调bcl-2mRNA和蛋白表达水平和其上调bax mRNA和蛋白表达水平有关。