香蕉果皮中谷氨酸脱羧酶的活力及分布

为了开发香蕉果皮中谷氨酸脱羧酶(GAD)的高效提取技术,以香蕉果皮为对象,测定了可溶性糖含量和GAD活力在香蕉成熟过程中的变化,并在此基础上探讨了GAD活力与可溶性糖含量的关系以及香蕉催熟对GAD活力的影响,分析了果皮中GAD的分布状态。试验结果表明,香蕉果皮的可溶性糖含量和GAD活力随香蕉的成熟而增加。香蕉催熟改变了果皮中GAD活力随可溶性糖含量的变化模式,提高了GAD活力。催熟香蕉果皮的GAD活力在可溶性糖含量为41.0%时达最大值10.2 U/g。香蕉果皮中,果皮层的GAD活力和比活力均高于角质层和近果肉层。本文为香蕉果皮中GAD的高效提取及其在GABA生产中的应用提供了技术依据。     

高活性果蔬谷氨酸脱羧酶的筛选及其酶学性质研究

比较芒果、荔枝、火龙果、香蕉、百香果、葡萄、猕猴桃、龙眼、黄皮果、西红柿、山竹、木瓜、苹果、菠萝等14种果蔬中的谷氨酸脱羧酶(GAD)的活力大小,并研究其中活性最高的GAD的部分酶学性质。采用高效液相法测定14种果蔬GAD粗酶液水解L-谷氨酸生成γ-氨基丁酸(GABA)能力的大小,确定各种果蔬GAD的活力。通过测定高活性GAD在不同温度、p H和金属离子存在条件下的酶活以及其最适反应条件下的动力学常数研究其酶学性质。在14种果蔬中,香蕉GAD的酶活最高,达到548.03±0.08 U/g;其最适温度为45℃,在25℃~40℃具有较高的耐热性,在40℃时,GAD剩余酶活仍有80%;最适p H 5.5,在p H 3.5~5.0范围内,具有较好的稳定性;对底物谷氨酸的Km值和Vmax分别为56.2 mmol/L和9.06μg/min;在浓度为2 mmol/L时,Mg2+、Na+、Cu2+、K+对香蕉GAD活性没有明显影响,Ca2+、Al3+、Mn2+、Zn2+对香蕉GAD活性稍有抑制,SDS和Ag+对香蕉GAD有明显的抑制作用。香蕉GAD的酶活较高,具备进一步开发应用的价值。     

大豆谷氨酸脱羧酶分离纯化及酶学性质研究

对大豆中的谷氨酸脱羧酶(GAD)进行了提取、纯化及酶学性质的研究.采用硫酸铵分级沉淀技术对大豆中GAD进行了纯化,该酶被纯化了4.7倍.纯化后的大豆GAD最适温度为40℃,最适pH为5.9,大豆GAD的热稳定性较差,在80℃几乎失去活性,但该酶在pH5.0～8.0较稳定,能保持很好的酶活.大豆GAD对底物谷氨酸的Km值为19.4 mmol/L.Mg2、KCl对大豆GAD活性影响不大,但KI、Ag+、SDS对大豆GAD有抑制作用.Ca2+对大豆GAD有激活作用,当Ca2浓度为1 500 μmol/L时,对大豆GAD激活作用最强,相对酶活能达到160％.大豆GAD与其他植物GAD相比存在差异,并证实可被Ca2+激活.     

产谷氨酸脱羧酶片球菌的鉴定及其酶学性质

从发酵蔬菜中分离一株产谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)的乳酸菌HS2,其菌体细胞转化Glu 1h,转化液中γ- 氨基丁酸含量可达(3.114 ± 0.133)g/L,通过形态培养特征、生理生化特征、16S rDNA 序列比对及系统发育分析,鉴定菌株HS2 是戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)。菌株HS2 GAD 最适作用温度为35℃,最适作用pH4.5。酶的热稳定较好,在pH4.0～6.5 于50℃处理4h,酶活基本稳定。Ca2+ 对酶有激活作用,5mmol/L 和50mmol/L Ca2+ 浓度使酶活分别提高了37.21% 和23.02%。Mg2+ 和Mn2+ 在50mmol/L 浓度时激活作用明显,而Co2+在5mmol/L 浓度激活作用较好。     

玉米胚谷氨酸脱羧酶的性质

研究了玉米胚谷氨酸脱羧酶(GAD)的性质。结果表明:玉米胚GAD的最适温度为40℃,最适pH为5.7,其热稳定较差,60℃下保温1 h,酶活下降至39%,85℃时酶完全失活,而此酶在pH4.5～7.5可保持80%以上的酶活。玉米胚GAD对Glu的Km值和Vmax分别为51.87 mmol/L和1.807 mg/min。另外,KCl、NaCl和SDS对玉米胚GAD活性有较大的抑制作用,而Ca2+对此酶的活性有较强的激活作用,可提高底物与玉米胚GAD的亲和力。     

重组谷氨酸脱羧酶的分离纯化与酶学性质研究

利用大肠杆菌原核表达系统获得高活力重组谷氨酸脱羧酶(GAD)并对其酶学性质进行分析。结果表明,纯酶比活力为9.9 U/mg;最适p H为4.6,最适温度为40℃,重组酶有良好的热稳定性,在70℃处理30 min仍有80%活性,在0℃保存一个月基本不失活;辅酶PLP及金属离子Fe2+、Ca2+、Mg2+、Cu2+对重组酶活力都有一定的促进作用,其中PLP最适浓度为0.005 mmol/L;吐温20作为非离子表面活性剂对重组GAD活力有促进作用,而阴离子表面活性剂SDS对其活力有明显抑制作用;有机溶剂异戊醇对其活力有促进作用。重组GAD的Km=23.33 mmol/L,Vmax=1.133μmol/(min·L)。     

米糠谷氨酸脱羧酶的分离纯化及酶学性质研究

利用(NH_4)_2SO,分级沉淀、DEAE-Sephrose FF离子交换色谱技术分离纯化米糠谷氨酸脱羧酶(GAD).米糠GAD纯化倍数为8.8,比活达到了30.1U/mg,酶活回收率为45.5%.同时对米糠GAD酶学性质进行了研究,结果表明.最适温度为40℃,耐热性较差;最适pH5.5,在pH5.5～9都可以保持较高酶活.米糠GAD对底物和辅酶PLP的K_m分别为28.45、1.13μmol/L.KI、Ag~+、SDS、乙酸对米糠GAD的活力有较大的抑制作用,而Ca~(2+)对米糠GAD的活性有较强的激活作用.     

中国蛤蜊内源酶性质的研究

研究了中国蛤蜊的肌肉与消化腺中内源酶的性质。结果表明:1中国蛤蜊肌肉中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H为7.0与9.0,可能存在同工酶;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Ca2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Cu2+在5mmol/L时,对酶活力有激活作用,随着浓度升高对酶活力有抑制作用;Mn2+在5~15 mmol/L时,对酶活力影响不大,在20 mmol/L时对酶活力有激活作用。2消化腺中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H 8.0;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Mn2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Ca2+在5 mmol/L时,对酶活力有抑制作用,随着浓度升高有促进作用。Cu2+在5~15 mmol/L时对酶活力有促进作用,当浓度为20 mmol/L时,对酶活力有抑制作用。3肌肉中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H 10.0;Mn2+、Ca2+对淀粉酶活力有促进作用;Pb2+在5~10 mmol/L时对酶活力有促进作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有抑制作用;Mg2+在5~10 mmol/L时对酶活力有抑制作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有促进作用;Cu2+在5 mmol/L时对酶活力有促进作用,随着浓度升高,对酶活力有抑制作用。4消化腺中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H为9.0;Ca2+在20 mmol/L时对淀粉酶活性有促进作用,低于此浓度有抑制作用。Pb2+、Mg2+、Cu2+和Mn2+对淀粉酶活性皆有不同程度的抑制作用。     

米糠谷氨酸脱羧酶的酶学性质研究

研究了米糠谷氨酸脱羧酶(GAD)的酶学性质。结果表明:米糠GAD的最适温度为40℃,最适pH5.6,米糠GAD耐热性较差,60℃下保温0.5 h后,酶活下降至65%,保温1 h,酶活下降至48%,而70℃时酶就完全失活,而此酶在pH5.5～9都可以保持84%以上的酶活力。米糠GAD对底物和辅酶PLP的Km分别为0.028 45 mol/L和1.13μmol/L。KI、Ag~(2+)、SDS、乙酸对米糠GAD的活力有较大的抑制作用,而Ca~(2+)对米糠GAD的活性有较强的激活作用,提高了底物与米糠GAD的亲和力。     

欧文氏菌乳糖酶的分离纯化及其酶学性质研究

对欧文氏菌Erwinia sp.E5株所产β-半乳糖苷酶进行分离纯化,所得纯酶的比酶活为554.92U/mg.蛋白质。对纯化得到的酶进行酶学性质研究,其最适反应温度为40℃,在20℃保持40%以上的酶活力;该酶最适反应pH为7.0,在pH 6.5体系中保持95%的酶活力;Mg2+和Na+对该酶具有激活作用,而Ca2+为弱抑制剂。乳糖水解试验显示该酶在乳糖含量小于10%的反应体系中具有较高反应速率。