中高温大曲中高产蛋白酶菌株的选育

从宋河大曲中共分离得到39株产蛋白酶芽孢菌株,采用透明圈法和摇瓶发酵法筛选出1株高产蛋白酶菌株MSPN-11,酶活达114.8U/m L。以该菌株为出发菌种,采用紫外诱变的育种方法,以致死率和蛋白酶活力为指标选育高产蛋白酶菌株。研究表明:紫外照射时间160s、照射距离50cm~55cm的剂量处理,菌株致死率达80%以上,且90%诱变菌株的R/r值在3.0以上,得到1株高产蛋白酶菌株MSPR 8,酶活提高了26.38%。     

紫外诱变球毛壳霉选育木聚糖酶高产菌株

木聚糖酶具有重要的潜在应用价值,为获得一株遗传性状稳定的木聚糖酶高产菌株,以木聚糖酶的酶活为评价指标,采用紫外线诱变的方法,利用单因素试验确定紫外线照射时间,通过含木聚糖的初筛培养基对紫外诱变后的菌株进行初筛,然后采用DNS法测定木聚糖酶活性对诱变菌株进行复筛.将筛选出的木聚糖酶活力最高的诱变菌株进行传代培养,测定其酶活,探讨其遗传稳定性.试验结果表明:紫外灯功率20W,照射距离30cm,照射时间120s,球毛壳霉致死率为92.35％.在此条件下进行菌株的紫外诱变获得高产木聚糖酶的正突变株15株,其中1株高产菌株Z30 - 56的酶活为9850IU/mL,比出发菌株提高53.7％,并且遗传性能稳定.     

紫外结合亚硝酸诱变选育中性蛋白酶高产菌株

为提高一株深海来源微小杆菌属细菌Exiguobacterium sp.SWJS2产中性蛋白酶的酶活,本文先后采用紫外线和亚硝酸对其进行诱变处理。紫外诱变条件为8W紫外灯在20cm处直接照射50s;三轮诱变后得突变株UV-48,其酶活较原始菌株提升21.32%。再以UV-48为出发菌株进行亚硝酸诱变,条件为0.03mol/L亚硝酸作用8min;三轮诱变后得突变株HN-34,其酶活为1109U/m L,较突变株UV-48提升13.97%,较原始菌株提升38.28%。HN-34传代5次相对酶活均在94%以上,遗传性状稳定。     

产β-葡萄糖苷酶酿酒酵母菌株紫外诱变选育及酶学性质分析

为了得到高产胞外β-葡萄糖苷酶的酿酒酵母(Saccharomycaes cerevisiae)菌株,采用紫外线诱变技术对菌株MQFSM-3进行处理,研究了紫外诱变条件对菌株致死率的影响,并对突变菌株酶活及酶学性质进行评价。结果表明,出发菌株在辐照剂量为3500μJ/cm2的紫外灯下照射9 min,致死率为81.09%;通过初筛、复筛及多次传代培养,突变菌株UV-45产酶稳定,酶活提高41.64%,该酶最适温度为50℃,在20~50℃热稳定性良好;最适p H为5.5,在p H4.0~6.5酶活力相对稳定。     

高产蛋白酶菌株的分离鉴定及诱变

目的:从豆豉中分离出高产蛋白酶的菌株并进行紫外诱变,以提高菌株的产蛋白酶能力.方法:采用酪蛋白平板法,初步筛选出一些产蛋白酶菌株,通过比较发酵后蛋白酶活力,筛选出一株产蛋白酶活力最高的菌株,鉴定其菌种,对该菌株进行紫外诱变,并对诱变后的菌株进行筛选,最后得到一株产蛋白酶活力最高的菌株.结果:分离鉴定后得知菌株B为地衣芽孢杆菌,产蛋白酶活力为2360.80U/mL.最佳诱变时间为120s,菌落致死率为66.68％,得到的高产蛋白酶菌株为B-14,其蛋白酶活力为2922.90U/mL,诱变后菌株产蛋白酶活力提高了23.81％.结论:通过筛选、诱变成功选育出高产蛋白酶的菌株B-14.     

紫外诱变筛选高蛋白酶活米曲霉的研究

为了提高米曲霉的蛋白酶活力,采用实验室保藏菌种蛋白酶活力较高的米曲霉菌株WT415为出发菌株,对米曲霉WT415采用紫外诱变,诱变条件:紫外灯功率40 W;距离35cm;诱变时间0,10,20,30,40,50,70,90,110,130,150s。试验结果表明:40 W紫外灯,35cm照射,90~110s时致死率为72.89%~81.32%,此时间为最佳照射时间;经紫外照射诱变后,米曲霉XWT4的蛋白酶活提高:酸性蛋白酶活提高14.87%,中性蛋白酶活提高48.85%,碱性蛋白酶活提高21.47%。并且经过10代传代培养,米曲霉XWT4具有稳定的遗传性状。     

基于紫外诱变原生质体法选育高活力蛋白酶产生菌

以米曲霉沪酿3·042为出发菌株,在适宜条件下制备原生质体,并进行紫外线诱变提高蛋白酶活力。经过原生质体紫外诱变的处理和遗传稳定性实验,最终得到一株高产菌株,其蛋白酶活力的产量达1700U/g以上,约是出发菌株的1·8倍。     

麦芽三糖生成酶高产菌株的选育

以蛾微杆菌(Microbacterium imperiale)Mebl-012菌株为出发菌株,利用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)和紫外复合诱变,筛选麦芽三糖生成酶高酶活菌株。将不同ARTP致死率下的菌悬液进行了混合,均匀涂布筛选平板进行初筛,之后用摇瓶发酵进行复筛,最终筛选出了一株麦芽三糖生成酶高产突变菌株Microbacterium imperiale Metp-57,酶活达到241.32 U/m L,较出发菌株Mebl-012(产量为116.43 U/m L)提高了107.26%。以ARTP诱变过程中筛选出的高产菌株Metp-57为出发菌株,进行紫外诱变处理,得到高产突变株Metu-24,其麦芽三糖生成酶酶活可达到408.41 U/m L,较原始菌株Mebl-012提高了250.77%,且遗传性状稳定。突变株Metu-24较原始菌株Mebl-012的生长速率有明显提高。以本实验麦芽三糖生成酶水解淀粉,制备的麦芽三糖糖浆中麦芽三糖占主要成分,含量达到46.7%。     

高产酸性蛋白酶菌株的选育及酶学性质研究

以从酱醅中分离出的菌株JL-335为出发菌,采用紫外线诱变,结合HE值及酶活力检测,筛选出1株高产稳定的酸性蛋白酶菌株SKY-520。诱变条件:紫外灯功率20 W,距离25cm,诱变时间0(对照),1,3,5min。试验结果表明:20 W紫外灯,25cm照射,3min时致死率为74.3%,此时间为最佳照射时间;并且优化发酵条件,温度为28℃,pH为5.0,时间为48h,其产酶能力由847.2U/mL提高到3000.8U/mL,提高率将近254.2%;连续6次继代培养,遗传性状稳定。采用单因素试验、正交试验等手段考察了温度、pH值、金属离子等对所产酸性蛋白酶的酶学性质的影响,得出该酶的最佳作用条件为45℃、pH 3.5、添加Mn~(2+),此时酶活性可以提高183.7%,并且该酶在80℃下保温10min仍保留有74.2%的相对酶活,说明其具有一定的耐干热处理能力。     

原生质体紫外诱变选育木聚糖酶高产菌株

采用紫外诱变选育木聚糖酶高产菌株,通过对出发菌株Thermomyces lanuginosus DSM10635原生质体形成条件及诱变条件的研究,探索出了其原生质体形成的最适条件:酶系及酶解浓度为0.010g/mL纤维素酶+0.010g/mL蜗牛酶(体积比1:1混合),菌龄58h,酶解时间2.5h,酶解温度30℃~34℃,稳渗剂为0.6mol/L的甘露醇;紫外诱变的最佳条件:距离15W紫外灯30cm处,照射时间5min,通过初筛和复筛,最终选育出3株遗传性能稳定的木聚糖酶高产诱变株,木聚糖酶的酶活分别提高了26.5%、37.78%、28.2%。     

新型果蔬加工用酶--粥化酶

以黑曲霉菌株A.niger103为出发株,通过紫外、亚硝基胍等诱变剂进行反复诱变处理,得到一株高产菌株A.niger537,果胶酶酶活提高了130%,同时测定了其纤维素酶、木聚糖酶、蛋白酶及淀粉酶的酶活,分别达到4.76,176.82,832.4,105.73 U/mL.并通过单因素试验研究了营养条件对改变各酶产酶量及其酶系组成的影响.     

N~+离子注入-紫外复合诱变选育纤维素酶高产菌株

对产纤维素酶菌株Rhizopus sp.TY1原生质体进行N+离子注入-紫外复合诱变,以期获得高产菌株。以原生质体形成率和再生率为指标,确定最佳酶解时间3h;以致死率和正突变率为指标,确定最佳N+离子注入剂量为2.0×1015ions/cm2、最佳紫外照射时间为90s。实验筛选得到一株高产菌株Rhizopus sp.TY1.2,液态发酵终点时滤纸酶活力(FPA)和羧甲基纤维素酶活力(CMC)分别达到5.1、20.9U/mL,与出发菌株相比,FPA和CMC分别提高了75.9%和175.0%。传代实验结果显示Rhizopus sp.TY1.2产纤维素酶性能稳定,该结果表明N+离子注入-紫外复合诱变所产生的变异是可遗传的变异。     

酯化红曲霉原生质体制备及紫外线诱变育种

以红色红曲霉（Monascus ruber）为出发菌株,用混合酶制取原生质体并对原生质体形成条件进行探讨,并进行紫外诱变选育。采用50h菌龄的菌丝体,使用蜗牛酶（0.6%）＋溶菌酶（0.4%）＋纤维素酶（0.6%）的复合酶液,30℃酶解2h,在该条件下原生质体浓度可达7.8×106个/mL,再生率为7.3%。在最佳紫外照射时间80s下,突变株经筛选,得到一株酯化酶活显著提高、遗传性能稳定的诱变株HN215-6,其酶活达468.4mg/100mL,比出发菌株HN215提高了1.66倍。     

LiCl-ARTP复合诱变选育高产碱性蛋白酶菌株及其发酵条件优化

以地衣芽孢杆菌（Baclicus lincheniformis）E-417为出发菌株,采用氯化锂（LiCl）-常压室温等离子体（ARTP）复合诱变法对其进行诱变,通过酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛、遗传稳定性验证筛选高产碱性蛋白酶的优良菌株,并通过单因素及响应面试验对其发酵产酶条件进行优化。结果表明,在氯化锂添加量为1.5%、ARTP照射时间为45 s的最适复合诱变条件下筛选得到1株高产碱性蛋白酶的优良菌株F-3,酶活达到12 147 U/mL,且该菌株传代8次后仍具有良好的遗传稳定性,其最适发酵培养基成分为玉米粉41 g/L、豆饼粉40 g/L、碳酸钠2.1 g/L、磷酸氢二钠2.0 g/L;最适发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH值7.0、接种量8%。在此优化条件下,碱性蛋白酶酶活达到16 156 U/mL,较原始菌株提高75%。     

Bacillomycin高产菌株的紫外诱变选育及其防治大米黄曲霉霉变的研究

本研究以Bacillus subtilis fmb J为出发菌株,通过紫外诱变选育高产抗菌肽Bacillomycin的菌株,并将Bacillomycin应用于防治大米黄曲霉霉变。结果表明,当紫外照射时间为60 s和80 s时,菌株致死率分别为85.2%和86.8%,正突变率相对较高分别为40.33%和44.87%。进一步采用紫外照射时间60 s和80 s进行诱变,经过筛选得到一株遗传性状稳定的高产Bacillomycin的菌株UV60-4,产量高达306.31 mg/L,是出发菌株产量的1.32倍。在温度为37℃、加水量为6 m L、黄曲霉(3.3×103cfu/m L)接种量为500μL的条件下,Bacillomycin添加量达到0.15 mg/g时,可以有效抑制大米黄曲霉霉变。     

脂肪酶产生菌的紫外诱变和筛选

以提高生物催化制备生物柴油的效率为目的,采用紫外诱变的方法对产脂肪酶的细菌菌株进行诱变和筛选,得到的诱变株命名为U12,脂肪酶酶活(60.25 U/mL)比原始相对出发菌株酶活提高220%。经五次传代实验平均酶活为58.63U/mL,相对诱变原菌降低2.69%。     

高糖化力白曲霉的复合诱变及固态发酵条件优化

采用紫外线及常压室温等离子体（ARTP）复合诱变技术对白曲霉（Aspergillus candidus）Nz 3.602进行诱变选育。对诱变致死率进行测定,确定最佳诱变条件为：15 W紫外灯照射12 min,ARTP处理40 s。对突变菌株进行透明圈法初筛、糖化力测定法复筛,最终得到产酶能力较高的突变菌株B5。其糖化酶酶活为1 050.32 U/g,较出发菌株糖化酶酶活提高85.53%,并且遗传稳定性较好。以菌株B5为研究对象,经单因素试验和响应面分析法对其固态发酵条件进行优化,最佳固态发酵条件为：糠壳添加量15%,原料含水量70%,接种量12%,培养时间5 d,培养温度30 ℃。该条件下糖化酶酶活为（1 254.17±6.14） U/g,比优化前提高了19.41%。     

紫外诱变选育高效降解甲醛菌株及其降解特性

以甲醛降解菌--拟青霉菌（Paecilomyces variotii）CSLG1为出发菌株,对其进行紫外诱变,并考察突变株对甲醛的降解特性。选用功率15 W的紫外灯、照射距离30 cm、照射时间30 s、致死率为88%的诱变强度对出发菌株进行紫外诱变;通过初筛、复筛选育出一株甲醛抗性及其降解能力明显提高的诱变菌株F1-23。结果表明：F1-23临界甲醛抗性质量浓度为7.88 g/L,比诱变前提高22.2%;甲醛脱氢酶酶活力为83.6 U/mg,提高了23.8%。连续传代5 代,诱变菌株F1-23的甲醛抗性和降解力基本不变,证实其具有良好的遗传稳定性。诱变菌株F1-23对甲醛的抗性及降解能力均较出发菌株高。     

一株高产纳豆激酶菌株的筛选及其发酵条件的优化

通过紫外诱变、纤维蛋白原平板初筛、复筛得到了一株高产纳豆激酶的纳豆芽孢杆菌菌株。研究液体发酵产纳豆激酶的最佳条件,结果表明最佳培养基为营养肉汤,最佳培养时间为24h,最佳培养温度30℃。在优化条件下,发酵液酶活达640U/ml。该菌株的酶活比原始菌株酶活提高了258%。     

紫外-亚硝酸钠复合诱变高产纤维素酶菌株

为得到高产纤维素酶的菌株,改善菌种产纤维素酶的能力,该研究以贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）为原始菌株,以纤维素酶酶活为考察指标,通过单因素和正交试验优化复合诱变条件。结果表明,最优复合诱变条件为紫外（UV）处理150 s、0.25 mol/L亚硝酸钠（NaNO2）在诱变温度23 ℃下诱变处理23 min。在此优化复合诱变条件下,突变株UN-5纤维素酶酶活为101.48 U/mL,比原始菌株的酶活提高了205.8%。经10代传代,纤维素酶酶活仍有100.5 U/mL,说明该突变株产纤维素酶能力强且遗传性状稳定。