萘哌地尔衍生物BWYJ 扩张血管效应及其机理研究

目的: 观察萘哌地尔衍生物BWYJ 对家兔血管活动的影响, 并探讨其血管活性机理, 为该药的开发研究提供基础资料。方法: 采用家兔主动脉收缩的方法, 观察BWYJ 对去甲肾上腺素(NA)、5-羟色胺(5-HT) 和高钾量效曲线的影响;应用无Ca²⁺-复Ca²⁺的实验法, 以NA 和咖啡因为血管收缩剂, 间接观察BWYJ 对细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响,并分析其可能作用机理。结果: BWYJ 10^-7、3×10^-7、10^-6mol·L^-1使NA 量效曲线明显平行右移, 而最大反应不变, pA2 值为7.61 。本品10^-6、10^-5 mol·L^-1对5-HT 量效曲线也有同样的效应, pA2值为6.56 。而当剂量为3×10^-6、10^-5 mol·L^-1时,对氯化钾(KCl) 量效曲线没有明显影响。在无钙Krebs 液中, BWYJ 10^-7、3× 10^-7、10^-6 和10^-5 mol·L^-1呈浓度依赖性抑制NA 所致血管条的短暂收缩, 对复Ca²⁺后NA 所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用, 但其剂量达10^-5 mol·L^-1时尚不能抑制咖啡因在无Ca²⁺液中所致收缩。结论: BWYJ 可能是一种α受体阻断剂, 兼有拮抗5-HT 受体的作用。其扩血管的机理可能是通过阻断细胞膜上的α受体或5-HT 受体, 从而抑制这些受体中介的Ca²⁺内流和Ca²⁺释放所致。     

9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐对PC12细胞缺氧缺血损伤的保护作用

目的 研究9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐(EDT) 对神经细胞缺血缺氧损伤的影响。方法 离体培养的PC12 细胞, 用连二亚硫酸钠造成缺氧/复氧损伤模型, 用NaCN 加缺糖造成拟缺血损伤模型, 通过MT T 微量比色、培养介质LDH 活力测定研究EDT 对两模型的保护作用。结果 在10^-8～10^-6 mol·L^-1范围内, EDT 浓度依赖地降低两种损伤所致培养介质内LDH 的释放, 增加MTT 比色值, 同时10^-6 mol·L^-1 EDT 对两模型的保护作用具有时间依赖性, 48 h 达效应平台。结论 EDT 对PC12 细胞缺血缺氧损伤具有保护作用。     

左旋荷包牡丹碱对猪冠状动脉条收缩效应的影响1

目的 观察左旋荷包牡丹碱(L-dicentrine,L-D)对K⁺、5-HT 、Hist、Ca²⁺引起的猪冠状动脉条收缩效应的影响。方法 利用猪冠状动脉条的离体实验法,观察对其收缩的影响。结果 L-D对K⁺、5-HT、Hist、Ca ²⁺诱发的猪冠状动脉平滑肌的收缩有显著的拮抗作用,量效曲线显示:L-D呈现非竞争性拮抗方式。在无Ca²⁺液中,L-D 能抑制5-HT 诱发的猪冠状动脉收缩,说明5-HT对猪冠状动脉依赖细胞内Ca²⁺所致的收缩有明显的抑制作用,而对外Ca²⁺所致的收缩无明显的影响。结论 L-D 具有松弛猪冠状动脉条的作用,同时也提示冠状动脉平滑肌可能存在5-HT受体。     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的:探讨醋柳总黄酮(TFH) 对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响。方法:采用新一代钙荧光探针Fluo-3/AM 检测在高钾、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素II(Ang Ⅱ) 刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变, 并与传统的钙拮抗剂Verapamil (Ver) 进行对照研究。结果:TFH(100 mg·L^-1) 对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 无明显影响;TFH(60 ～ 100 mg·L^-1) 呈剂量依赖性抑制高K⁺ 去极化引起的[Ca²⁺]_i 升高, 与Ver 作用相似, 但弱于Ver;TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE、Ang Ⅱ通过受体介导引起[Ca²⁺]_i 升高均具有明显的抑制作用;在无细胞外Ca²⁺存在下, TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE 引起的[Ca²⁺]_i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论:醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平, 这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

新型磷酸二酯酶Ⅳ抑制剂Ariflo 对内皮素-1诱发离体人子宫平滑肌收缩的影响

目的:研究选择性磷酸二酯酶(phosphodiesterase, PDE) Ⅳ抑制剂Ariflo 对内皮素-1 (endothelin-1,ET-1)诱发的非妊娠人子宫平滑肌收缩的影响。方法:累积给药法观察药物对离体平滑肌收缩的作用。结果:Ariflo 可降低子宫平滑肌自主收缩的收缩频率及收缩幅度(pD₂ =7.90), 且对ET-1 (3 ×10^-8 mol·L^-1)诱发的子宫平滑肌收缩具有浓度依赖性抑制作用(pD₂ =7.40), 作用强度与Rolipram 相似。结论:Ariflo 对ET-1 诱发的离体人子宫平滑肌的收缩具有显著抑制作用, 提示在临床上有缓解痛经的作用。     

果糖二磷酸钠镁对缺血突触体乳酸含量及ATP酶活性的影响

目的 研究果糖二磷酸钠镁(FDPM)对缺血突触体乳酸含量及ATP 酶活性的影响,以探讨其脑保护作用机制。方法 制备正常大鼠脑突触体,氧糖剥夺培养建立缺血突触体模型,分别加1.3 mmol·L^-1硫酸镁,4.0 mmol·L^-11,6-二磷酸果糖(FDP)及1.3mmol·L^-1 果糖二磷酸钠镁共培养60 min,测定突触体乳酸含量及Na⁺-K⁺ATP 酶和Ca²⁺-Mg²⁺ATP 酶活性。结果 FDPM 可明显降低缺血突触体乳酸含量,升高Na⁺-K⁺ATP 酶和Ca²⁺-Mg²⁺ATP 酶活性(P <0.05),其作用强于FDP 的作用。结论 FDPM保护脑缺血的作用机制可能与其改善脑缺血后能量代谢,减轻脑组织酸中毒状态有关。     

多非替利衍生物CPU228(V03) 对大鼠心室肌细胞钙瞬变的调节

目的:在β-受体激动情况下, 研究多非替利衍生物CPU 228 对电刺激触发心肌细胞的胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i) 变化及钙瞬变动力学参数的影响。方法:游离单个大鼠心室肌细胞, Fluo-3/AM 负载, 电刺激诱发心室肌细胞钙瞬变, 定量测定心室肌细胞内Ca²⁺浓度变化, 异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO) 100 nmol°L^-1激动β-受体, 观察CPU 228 1 μmol°L^-1对钙瞬变动力学参数、[Ca²⁺]_i 及钙负荷水平的影响。结果:CPU228 1 μmol°L^-1对大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 的影响不明显(P>0.05);ISO 100 nmol°L^-1显著升高大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 和细胞内钙负荷水平, 缩短钙瞬变时程, 并且增加钙瞬变的消除速率。CPU 2281 μmol°L^-1显著抑制ISO 的上述作用。结论:在β-受体激动情况下, CPU 228 可以降低心肌细胞[Ca²⁺]_i,使ISO 改变的钙瞬变动力学参数恢复到正常水平。     

猪苓多糖对膀胱癌细胞钙离子浓度的影响

目的 观察猪苓多糖对人T24 膀胱癌细胞内钙离子(Ca²⁺) 浓度的影响, 探讨猪苓多糖抗癌机理。方法 体外培养人T24 细胞经钙荧光指示剂(calciumcrimson-AM) 负载后, 用激光扫描共聚焦显微镜测定猪苓多糖作用前后细胞内Ca²⁺随时间的变化。结果 猪苓多糖低剂量(0.2 mg·L^-1) 使T24 细胞内Ca²⁺降低, 高剂量(>1 mg·L^-1) 使T24 细胞内Ca²⁺升高, 最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca²⁺升高, 细胞浆Ca²⁺无明显改变。结论 猪苓多糖可引起T24 细胞内Ca²⁺水平的显著变化, 而且这种变化主要表现在细胞核内, 提示猪苓多糖可能有诱导细胞凋亡的作用。     

盐酸埃他卡林对血管内皮细胞分泌功能的影响

目的:研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(I_pt) 对血管内皮细胞分泌功能的影响。方法:采用灌流消化法分离小牛主动脉内皮细胞(BAEC), 观察I_pt 对BAEC 分泌内皮素-1(ET-1)、前列环素(PGI₂)和一氧化氮(NO) 的影响, 同时观察I_pt 对培养的BAEC 胞浆游离Ca²⁺浓度的影响。结果:在I_pt 浓度为10^-6 mol·L^-1及以上时, 能够剂量依赖性地抑制培养的BAEC 合成分泌ET-1, 并在I_pt 10^-5 mol·L^-1及以上时促进NO 的合成分泌, 同时在I_pt 浓度为10^-4 mol·L^-1及以上时, 显著地增高BAEC 胞浆游离Ca²⁺浓度。结论:I_pt 通过抑制内皮细胞合成分泌ET-1 和促进NO 的合成分泌, 从而使ET 和NO 的平衡状态得到改善;尚能增加内皮细胞[ Ca²⁺] _i, 有利于内皮细胞合成NO 增加, 从而增强内皮介导的舒血管效应。     

三羟基异黄酮和17-β 雌二醇对自由基缩血管效应的影响

目的: 研究自由基引发血管收缩的机制, 并通过血管静息张力的变化探讨三羟基异黄酮和17-β雌二醇对自由基缩血管效应的影响。方法: 制备猪冠状动脉血管环, 固定于恒温肌槽内, 待平衡后, 加入各种药物观察血管张力的变化。结果: 内皮完整的血管环在O₂^·-作用下产生明显的收缩, 去除内皮后无明显反应。1 μmol·L^-1三羟基异黄酮对O₂^·-引发血管收缩有明显的抑制作用(P <0.01, n=16),1 μmol·L^-117-β 雌二醇无明显作用。H₂O₂ 使去内皮血管环产生明显的收缩作用, 对内皮完整的血管环缩血管效应不明显, 30 μmol·L^-1三羟基异黄酮可明显抑制H₂O₂ 的缩血管作用。结论: 三羟基异黄酮可明显抑制O₂^·-和H₂O₂ 的缩血管效应, 其作用明显强于17-β 雌二醇。     

固相萃取HPLC检测生物样品中甲苯磺丁脲和代谢产物及其人体药代动力学研究

目的: 建立固相萃取高效液相色谱测定人血浆和尿液中的甲苯磺丁脲和代谢产物浓度的方法,并用于研究甲苯磺丁脲人体代谢过程。方法: 固相萃取净化和富集样品,建立高效液相色谱法测定人血清和尿中曱苯磺丁脲和代谢产物的浓度。色谱条件:色谱柱为 Waters Spherisorb 5 μm Phenyl 色谱柱(4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-0.02mmol·L^-1 pH 3.3乙酸钠缓冲液(28:72),流速1 ml·min^-1,检测波长:230 nm。用该方法测定10名健康志愿者单次口服500 mg曱苯磺丁脲后血清和尿液中药物及其代谢产物浓度,应用3p97计算其的药动学参数。结果: 血浆曱苯磺丁脲线性范围为2~lOOμmol·L^-1 (r=0.999),回收率为105.1%~103.9%。尿液羧基曱苯磺丁脲、4-羟基甲苯磺丁脲和甲苯磺丁脲的线性范围为 2~50 μmol·L^-1 (r=0.999)、1~50 μmol·L^-1 (r=0.999)和 1~50 μmol·L^-1 (r=0.999),回收率为 98.8%~100.1%、95.4%~103.5%和97.7%~106.6%。各样品的日内、日间精密度均矣15%。健康志愿者单次口服500 mg甲苯磺丁脲的 AUC_0-∞ 为 2644.6±472.8 μmol·h^-1·L^-1,T_max是 1.4±0.6 h,C_max是235.8±47.3 μmol·L^-1,t_1/2为 6.9±2.1 h,MR_0-24=277.5±125.6。结论: 甲苯磺丁脲及其代谢产物的固相萃取高效液相色谱法灵敏、准确,重复性好,可用于甲笨磺丁脲的体内过程研究。甲苯磺丁脲代谢产物主要经尿液排出。     

吡格列酮对培养的心肌细胞肥大的抑制作用

目的: 利用体外培养的乳鼠心肌细胞, 观察吡格列酮对高浓度葡萄糖与去甲肾上腺素共同诱导的肥大心肌细胞的影响, 进一步推测吡格列酮对糖尿病性心肌肥大的可能作用及作用机制。方法: 以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后, 用显微镜目镜计数心肌细胞搏动的频率;用Lowry' s 法测心肌细胞的蛋白质含量;用[³H] leucine 标记法测定心肌细胞蛋白的合成;利用计算机图象分析系统测心肌细胞的体积。结果: 吡格列酮在1 ～ 10 μmol·L^-1 浓度对25. 5 mmol·L^-1高糖与1 μmol·L^-1去甲肾上腺素联合诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。其抑制肥大的效果比1 μmol·L^-1 维拉帕米更为显著;同时观察到10 μmol·L^-1吡格列酮同1 μmol·L^-1维拉帕米一样有抑制心肌细胞搏动的作用。结论: 吡格列酮能有效抑制高糖与去甲肾上腺素联合诱导的心肌细胞肥大。这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

利鲁唑片在健康男性人体内生物等效性研究

目的: 建立利鲁唑片生物浓度的固相萃取后HPLC-UV 检测方法, 研究其在健康男性人体内药代动力学和相对生物利用度。方法: 20 名健康男性志愿者单剂量随机交叉口服150 mg 利鲁唑片剂和进口参比制剂后于不同时间点静脉取血, 血浆经固相萃取, 甲醇洗脱吹干后用少量甲醇溶解后, 采用高效液相色谱-紫外检测器, 应用内标法计算利鲁唑浓度。结果: 利鲁唑片与参比制剂的主要药动学参数C_max 分别为930 ±321 和798 ±306 μg·L^-1, t_max 分别为0. 8 ±0. 5 和1. 2 ±0. 7 h, AUC_{0 ～ t} 分别为3361 ±890和3301 ±886 μg·h^-1·L^-1,AUC_{0 ～ ∞}分别为3661 ±886和3614 ±885 μg·h^-1·L^-1, t_1/2 分别为8. 2 ±2. 8 和8. 1 ±2. 6 h 。AUC_{0 ～ t} 和C_max 的90 %置信区间为:96. 11 %～ 107. 77 %和101. 6 % ±135. 9 %。AUC_{0～ t} 相对生物利用度为102. 8 %±15. 5 %。结论: 国产利鲁唑片剂和进口片两种制剂生物等效。     

氯法拉滨注射液在白血病患者中的单剂量及多剂量临床药代动力学研究

目的: 研究氯法拉滨注射液单剂量及多剂量静脉滴注的人体药动学过程。方法: 4例白血病患者单剂量恒速静脉滴注氯法拉滨注射液 52 mg·m^-2·d^-1 ,单剂量试验结束后进入多剂量给药试验, 52 mg·m^-2·d^-1 ,连续给药 5 d。采用高效液相色谱串联质谱法测定血浆及尿液中氯法拉滨的浓度,并采用DAS药动学软件对试验数据进行处理,求算有关药动学参数。结果: 4例受试者单剂量静脉滴注氯法拉滨注射液后,主要药动学参数分别为C_max(414±205) μg/L,t_max(3.0±1.4) h,t_1/2z(4.4±2.0) h,AUC_0-t(2475±659) μg·h·L^-1,AUC_0-∞(2566±606) μg·h·L^-1,CLz(21.2±5.1) L·h^-1·m^-2,V_z(142±97) L/m²,MRT_(0-t) (6.3±2.2) h,Zeta(0.18±0.07) h^-1,24 h 平均尿液累积排泄率为(39.53±20.98)%。52 mg·m^-2·d^-1静脉滴注氯法拉滨注射液,连续给药5 d,第5日达稳态,主要药动学参数为C_max(581±126) μg/L,t_max(2.0±0.8) h,t_1/2z(6.4±3.1) h,AUC_0-t(2451±349) μg·h·L^-1,AUC_0-∞(2603±409) μg·h·L^-1,CLz(20.4±3.7) L·h^-1·m^-2,V_z(187±80) L/m,Zeta(0.13±0.05) h^-1,MRT_(0-t) (5.1±1.8) h,C_ss(102.14±14.53) μg/L,蓄积因子R(1.04±0.28),血药浓度波动度DF(576.26±226.89)%。结论: 氯法拉滨注射液静脉滴注给药 52 mg·m^-2·d^-1 ,连续给药 5 d,药物在体内无蓄积,安全性好。     

17β-雌二醇对离体猪基底动脉的影响

目的与方法 研究17β-雌二醇(E₂)对KCl和5-羟色胺(5-HT)引起离体猪基底动脉收缩的拮抗及保护作用。结果 E₂浓度依赖性地对抗KCl引起的最大收缩作用,IC₅₀为10^-4.8mol/L。E₂预处理后,浓度依赖性地抑制KCl引起的最大收缩,IC₅₀为10^-4.8mol/L,并降低5-HT引起收缩的浓度效应曲线的最大反应,其pD₂'为4.57。结论 E₂对离体猪基底动脉有舒张作用。     

不同剂量甘丙肽拮抗剂在三叉神经主核对甘丙肽外向电流的双向作用

目的 在三叉神经主核(PrV) 上检测不同剂量甘丙肽拮抗剂M35 和M40 对甘丙肽外向电流的作用。方法 全细胞膜片钳记录技术。结果 0.01、0.03及0.1 μmol·L^-1 的M35, 使甘丙肽引发的外向电流分别抑制53.1%、40.4% 及27.2%; 但1、3 μmol·L^-1 M35 使甘丙肽外向电流分别增大16.2%及38.4%。而给予0.01 及0.03 μmol·L^-1M40 时, 甘丙肽外向电流增大93.7%及68.4%;0.3、1 及3 μmol·L^-1 M40 使甘丙肽外向电流分别抑制49.2%、69.9%及87.2%。结论 低浓度M35为甘丙肽拮抗剂, 高浓度M35 有甘丙肽激动剂作用;低浓度M40 为甘丙肽激动剂, 高浓度M40 为甘丙肽拮抗剂, PrV 同一神经元上可能存在不同甘丙肽亚型受体。     

替米沙坦片血药浓度的HPLC测定方法及其在健康人体的药动学研究

目的: 建立高效液相色谱法测定人血浆中替米沙坦的药物浓度,并研究其在健康人体内的药动学3方法: 采用高效液相色谱-焚光检测法,色谱柱为 Hypersil C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液（45:55,pH 5.8);流速为1.0 ml·min^-1;激发波长和发射波长分别为305 nm和365 nm;进样量20 μl;内标物为α-萘酚。结果: 替米沙坦在2~1 024 μg·L^-1范围内线性良好（r=0.9999),回收率,日间、日内差均符合生物样品分析要求。10名健康受试者口服替米沙坦片80 mg后的药动学结果表明,其体内过程符合二房室开放模型,主要药动学参数如下:C_max为0.98±0.44 mg·L^-1;T_max为 0.83±0.45 h; t_1/2为 1.67±1.26 h; t_1/2β为26.00±14.43 h;t_1/2kd为 0.53±0.86h;AUC_0-l为 3.66±2.10 mg·h ^-1; AUC_0-∞为 3.98±2.40 mg·h ^-1·L ^-1。 结论: 此方法便捷,准确,灵敏,适于替米沙坦血药浓度测定和药动学研究,本试验所得药动学参数可为临床合理用药提供理论依据。